《細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識》ppt課件-預(yù)覽頁
【正文】 g KCl g g KH2PO4 加水至 1000 ml ? 消化液 ： ? 胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵 ，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白 ， 影響細(xì)胞骨架 ， 從而使細(xì)胞分離 。 ? 胰蛋白酶液消化時間： 210分鐘 。 ? 成分復(fù)雜， 影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析 。 優(yōu)點 ：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定。 ⑤ 各種生長因子 ⑥ 轉(zhuǎn)移蛋白 ⑦ 不明成分 ? 一般說來．含 5％小牛血清的培養(yǎng)基對大多數(shù)細(xì)胞可以維持細(xì)胞不死．但支持細(xì)胞生長一般需加 10％血清． ? 對于血清支持細(xì)胞生長的生物學(xué)效應(yīng)已得到證明，但對血清中的復(fù)雜成分至今尚未完全清楚． ? 血清中不僅存在促細(xì)胞生長因子，同對也存在細(xì)胞生長抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞所反映的生物學(xué)特性是細(xì)胞和復(fù)雜血清因子的綜合反應(yīng)。 ?無血清細(xì)胞培養(yǎng)基的使用保證了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性 、 可重復(fù)性和穩(wěn)定性 ， 減少了細(xì)胞污染 ， 簡化了提純和鑒定各種細(xì)胞產(chǎn)物的程序 。 無血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣。 ?血清的滅活（消除補體活性）： 56 ℃ ， 30 分鐘 ?血清的消毒：過濾除菌 抗生素的使用 ： 在培養(yǎng)液配制后，培養(yǎng)液內(nèi)常加適量抗生素，以抑制可能存在的細(xì)菌的生長。 調(diào)節(jié) pH值至 加血清（終濃度 10％） 細(xì)胞傳代方法 根據(jù)細(xì)胞生長的恃點，傳代方法有 3種。 3 貼壁生長細(xì)胞傳代 采用酶消化法傳代。 4 用吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液。 細(xì)胞計數(shù) ?血細(xì)胞計數(shù)器：手工計數(shù)細(xì)胞 ?Coulter計數(shù)儀：非人工計數(shù) 4個 16格總數(shù) 4 104個 /ml 培養(yǎng)細(xì)胞活力測定 細(xì)胞活力測定是腫瘤體外研究中應(yīng)用最廣的技術(shù)手段之一。再用酶標(biāo)儀測定 OD值 ? MTT法簡單快速、準(zhǔn)確，廣泛應(yīng)用于 新藥篩選、細(xì)胞毒牲試驗、腫瘤放射敏感性實驗 等。記錄結(jié)果。 ? ? 如果緩慢冷凍，可使細(xì)胞 逐步脫水 ，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反．結(jié)晶就大，大結(jié)晶會造成細(xì)胞膜、細(xì)胞器的損傷和破裂。 ? 常用的低溫保護(hù)劑是 DMSO，它是一種滲透性保護(hù)劑，可迅速透入細(xì)胞，提高胞膜對水的通透性，降低冰點，延緩凍結(jié)過程，能使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內(nèi)冰晶，從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷。 慢 細(xì)胞復(fù)蘇方法 （ l） 從液氮中取出冷凍管 ， 迅速投入 37～ 38 ℃ 水浴中 ， 使其融化 （ 1分鐘左右 ） 。 快
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