動植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶-預(yù)覽頁
【正文】 –植物體外培養(yǎng) ? 胚培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、愈傷組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng) –植物細(xì)胞培養(yǎng) —— 外植體選擇和處理 ? 外植體（ explant） – 從植株取出，經(jīng)預(yù)處理后用于組織和細(xì)胞培養(yǎng)的植物組織片段或小塊 – 根、莖、葉、芽、花、果實、種子等 ? 選擇：無病蟲害、生長旺盛、生長有規(guī)則 ? 切片： ～ 1 cm ? 消毒 – 70% 乙醇 – 5% 次氯酸鈉 / 10% 漂白粉 – ～ % HgCl2 –植物細(xì)胞培養(yǎng) —— 獲取植物細(xì)胞：直接分離法 ? 直接分離法即直接從外植體中分離 ? 機(jī)械法 – 將外植體搗碎，過濾或離心分離細(xì)胞 – 質(zhì)壁未分離；細(xì)胞破碎率高，完整細(xì)胞數(shù)量少 ? 酶解法 – 利用果膠酶、纖維素酶等處理外植體，分離具有代謝活性的細(xì)胞 – 能降解細(xì)胞壁，必須對細(xì)胞給予滲透壓保護(hù) –植物細(xì)胞培養(yǎng) —— 獲取植物細(xì)胞：愈傷組織誘導(dǎo)法 ? 愈傷組織（ callus） – 由外植體組織增生的細(xì)胞產(chǎn)生的團(tuán)狀不定型的疏散排列的薄壁細(xì)胞群體；本意是指植物體的局部受到創(chuàng)傷刺激后，在傷口表面新生的可幫助傷口愈合的組織 ? 誘導(dǎo)過程 – 配制半固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基 – 滅菌、植入外植體 – 1～ 3周后繼代培養(yǎng) –植物細(xì)胞培養(yǎng) —— 獲取植物細(xì)胞：原生質(zhì)體再生法 ? 一般采用酶解法分離原生質(zhì)體，使用纖維素酶和果膠酶混合物 ? 保持溶液的高滲狀態(tài) – 防止原生質(zhì)體脹裂 – 滲透壓穩(wěn)定劑：糖、鹽、甘露醇、山梨醇等 ? 原生質(zhì)體培養(yǎng)，再生細(xì)胞壁 –植物細(xì)胞培養(yǎng) —— 懸浮培養(yǎng) ? 將游離的單細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)按照一定的細(xì)胞密度懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法 ? 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞一般來源于愈傷組織，選擇較松散的為宜 –植物細(xì)胞培養(yǎng) —— 產(chǎn)物分離純化 ? 收集培養(yǎng)液，從中獲得所需的產(chǎn)物 –植物細(xì)胞培養(yǎng)基 ? 水：一般用去離子水或蒸餾水 ? 無機(jī)成分 – 大量元素： N、 P、 K、 Ca、 Mg、 S – 微量元素： Fe、 B、 Mn、 Zn、 Cu、 Mo、 Co ? 有機(jī)成分 – 碳源：糖，以蔗糖最常用 – 氮源：氨基酸（ Gly、 Ala、 Ser、 Cys…）及蛋白水解物、無機(jī)氮 – 維生素：主要是 B族維生素和維生素 C – 生長調(diào)節(jié)劑：生長激素、細(xì)胞分裂素等（微量） – 其他：肌醇、瓊脂等 –常用的植物細(xì)胞培養(yǎng)基 ? MS 培養(yǎng)基 – 硝酸鹽濃度較高，營養(yǎng)成分適宜，使用范圍廣 ? B5 培養(yǎng)基 – NH4+ 濃度較低，適用于雙子葉木本植物 ? White 培養(yǎng)基 – 無機(jī)鹽濃度低，高 Mg(II)、 B(III)，適用于生根培養(yǎng) ? KM8P 培養(yǎng)基 – 有機(jī)成分種類齊全，用于原生質(zhì)體培養(yǎng) –培養(yǎng)基配制 ? 配制母液，使用時按需要稀釋 –工藝條件及其控制 ? 溫度 – 室溫范圍（ 25 oC左右） – 最適產(chǎn)酶溫度和最適生長溫度不同 ? pH – 微酸性（ pH 5～ 6） – 細(xì)胞培養(yǎng)時， pH一般變化不大 ? 溶解氧 – 植物細(xì)胞需氧量不高，供氧不宜過量 – 對剪切力敏感，通風(fēng)攪拌不宜太劇烈 –工藝條件及其控制 ? 光照 – 光照對植物細(xì)胞的生長和產(chǎn)物合成具有重要影響（植物特色） – 光照有時也抑制產(chǎn)物合成 ? 添加前體 – 前體：處于目的代謝物代謝途徑上游的物質(zhì) – 添加前體相對于添加了反應(yīng)的底物 ? 刺激劑（ elector） – 引導(dǎo)物質(zhì)朝特定的代謝方向進(jìn)行，強(qiáng)化次級代謝產(chǎn)物的生物合成 – 常用微生物細(xì)胞壁碎片和胞外酶 –產(chǎn)酶實例 —— 大蒜細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn) SOD ? 超氧化物歧化酶（ superoxide dismutase， SOD， EC ） – 生物體內(nèi)清除超氧化物陰離子自由基（ O2183
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