細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 系，無(wú)限細(xì)胞系 ?細(xì)胞系 cell line ?細(xì)胞株 cell strain （就是從細(xì)胞系篩選出來(lái)的，有特殊屬性的 ） 細(xì)胞來(lái)源 ? 國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫(kù) : ? 1. 武漢細(xì)胞庫(kù) ? ? ? ? ? 美國(guó)和歐洲細(xì)胞庫(kù) （細(xì)胞株及胚胎干細(xì)胞庫(kù)）： ? （大全） 培養(yǎng)細(xì)胞的特性 培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式 貼附生長(zhǎng) ： 必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng)。細(xì)胞株潛伏期一般為 6～ 24小時(shí)。 ②保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈。 ? 用含血清培養(yǎng)液終止其對(duì)細(xì)胞的消化作用 培養(yǎng)基 ? 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是維持體外細(xì)胞生存和生長(zhǎng)的溶液，分天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。 成本低 缺點(diǎn) ： 缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。 ? 向無(wú)清培養(yǎng)液中能促進(jìn)細(xì)胞系生長(zhǎng)的補(bǔ)加物都是獨(dú)特的 。 通常是 青霉素和鏈霉素 聯(lián)合使用。常用的消化液有 ％的胰蛋白酶液。 任何培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)的細(xì)胞都由死細(xì)胞和活細(xì)胞組成 ， 從形態(tài)上區(qū)別死 、 活細(xì)胞是困難的 。 細(xì)胞凍存和復(fù)蘇 ? 細(xì)胞低溫冷凍貯存是細(xì)胞室的常規(guī)工作。 細(xì)胞凍存方法 1. 預(yù)先配制凍存液： 20%血清培養(yǎng)基 +10% DMSO 2 .取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，經(jīng)胰酶消化后，加入適量?jī)龃嬉?, 用吸管吹打制成細(xì)胞懸液（ 1 106 ～ 5 106細(xì)胞 /ml) 3. 加入 1ml細(xì)胞于凍存管中，密封后標(biāo)記冷凍細(xì)胞名 稱和冷凍日期。 （ 4） 去上清 ， 加新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)剛復(fù)蘇的細(xì)胞 。 低溫保護(hù)劑的應(yīng)用 ? 在細(xì)胞凍存時(shí)加入溫保護(hù)劑，能大大提高凍存效果。 （ 4）酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔 OD值（檢測(cè)波長(zhǎng) 570nm）。 7 將后者放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 2 半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代 （ Hela細(xì)胞） 此類細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細(xì)胞從瓶壁脫落下來(lái)，進(jìn)行傳代。 ?優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無(wú)沉淀物，無(wú)細(xì)菌、支原體、病毒污染。 ?1975年 ， Sato首次成功地用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)了垂體細(xì)胞株 ， 近 20多年來(lái)已報(bào)道了幾十種細(xì)胞系在無(wú)血清培養(yǎng)基中成功地生長(zhǎng)和增殖 。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。 用濾器過(guò)濾除菌 。 三洋滅菌器 濾器 CO2培養(yǎng)箱 ?CO2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為 37 ℃ ， 5％ CO2 。 底物：膠原、玻璃、塑料、其它細(xì)胞等 血清中有促使細(xì)胞貼壁的冷析球蛋白和纖粘素、膠原等糖蛋白（生長(zhǎng)基質(zhì)），這些帶正電荷的糖蛋白的促貼壁因子先吸附于底物上，懸浮細(xì)胞再與吸附有促貼壁因子的附著。細(xì)胞培養(yǎng) 王愛(ài)云 參考書 ? 司徒鎮(zhèn)強(qiáng) 《 細(xì)胞培養(yǎng) 》 細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念 傳代 ? 細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)一定時(shí)間后，被分開(kāi)接種到新的培養(yǎng)器皿中。細(xì)胞株平均在 10
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