細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)ppt課件-文庫吧資料
2025-02-27 15:45本頁面
【正文】 胞培養(yǎng)物污染 ? 原代培養(yǎng)組織在進入培養(yǎng)前已污染 – 培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復沖洗組織 培養(yǎng)細胞生長減慢 ? 由于更換不同培養(yǎng)液或血清 – 比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗 – 增加起始培養(yǎng)細胞濃度 ? 培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞 – 讓細胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。 細胞培養(yǎng)常見問題解答 培養(yǎng)液 pH 值變化太快 ? 培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊 – 松開瓶蓋 1/4 圈 ? NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖力不足 – 加 HEPES 緩沖液至 10 到 25mM 終濃度 ? 細菌、酵母或真菌污染 – 丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌 培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但 pH值不變 ? 用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來 – 用去離子水反復沖洗玻璃器皿，然后除菌 ? 冰凍保存培養(yǎng)液 – 將培養(yǎng)液加熱到 37℃ ，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液 培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，同時 pH 發(fā)生變化 ? 細菌或真菌污染 – 丟棄培養(yǎng)物 – 抗生素除菌 培養(yǎng)細胞不貼壁 ? 胰蛋白酶消化過度 – 縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度 ? 支原體污染 – 分離培養(yǎng)物，檢測支原體。 ?冷凍過程要緩慢。 ? 消化時間的掌握 哺乳動物細胞冷凍保存 ? 冷凍保存要點 ?凍存細胞必須處在對數(shù)生長期，活力大于 90％，無微生物污染。培養(yǎng)用液應(yīng)嚴格分開。每次最好只進行一種細胞的操作。 注意事項 ? 1．傳代培養(yǎng)時要注意 無菌操作 并防止細胞之間的交叉污染。 ? 以 1： 2或 1： 3進行 分裝 ，補充新鮮培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)瓶上做好標記，注明代號、日期，輕輕搖勻， 37 ℃ CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 ? 加入 2滴管 ％胰蛋白酶 消化液，消化 2～3min，倒置顯微鏡下觀察，待細胞單層收縮突起出現(xiàn)空隙時， 倒去酶液 。 細胞的傳代培養(yǎng)操作 ? 懸浮細胞 ? 可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用離心法后，加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代 ? 貼壁細胞（重點） 貼壁細胞傳代培養(yǎng)過程 ? 實驗準備： 細胞培養(yǎng)用的器材滅菌、超凈工作
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