細(xì)胞培養(yǎng)基本知識-文庫吧資料
2024-08-28 20:39本頁面
【正文】 一般說來．含 5％小牛血清的培養(yǎng)基對大多數(shù)細(xì)胞可以維持細(xì)胞不死．但支持細(xì)胞生長一般需加 10％血清． ? 對于血清支持細(xì)因生長的生物學(xué)效應(yīng)已得到證明，但對血清中的復(fù)雜成分至今尚未完全清楚。 ? 優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)： 透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌、支原體、病毒污染。 優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定，成本低 。 2. 合成培養(yǎng)基： 是根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 1. 天然培養(yǎng)基： 有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。毒性小、價(jià)格便宜、使用方便。用含血清培養(yǎng)液終止其消化作用。它作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細(xì)胞骨架，從而使細(xì)胞分離。 培養(yǎng)細(xì)胞生長的條件 ? 1. 細(xì)胞的營養(yǎng)需要 ? 2. 細(xì)胞的生存環(huán)境 ① 溫度 : 37 ℃ ② O2 ③ CO2: 5% CO2 +H2O ← →H 2CO3 ← →H + + HCO3 ④ pH: ⑤ 滲透壓 ? 3 無污染 ? 4 無毒 細(xì)胞培養(yǎng)用液 ? 水：新鮮配置的三蒸水或去離子水 ? 平衡鹽溶液：無 Ca2+、 Mg2+的緩沖液 PBS： NaCl KCl Na2HPO4 ? 6. 加適量新鮮培養(yǎng)液于接種了細(xì)胞懸液的新培養(yǎng)瓶內(nèi)。 ? 4. 用吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液。 ? 2. 加入 12 ml ％的胰蛋白酶液 (以消化液能覆蓋整個瓶底為準(zhǔn)）靜置 210 min（顯微鏡下動態(tài)監(jiān)測）。 3. 貼壁生長細(xì)胞傳代 ? 采用酶消化法傳代。 ? 直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時，將上清培養(yǎng)液去除1/2一 2/3，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。 傳代的方法 根據(jù)細(xì)胞生長的恃點(diǎn)，傳代方法有 3種。 ? 停止期（平臺期） ：細(xì)胞長滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂。 ? 貼壁期 ：細(xì)胞附著于底物上，游離期結(jié)束 ? 潛伏期 ：此時細(xì)胞有生長話動，而無細(xì)胞分裂。 每代貼附生長細(xì)胞的生長過程 ? 游離期 ：細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)．也稱懸浮期。 ? 懸浮生長： 于懸浮狀態(tài)下即可生長，不需要貼附于支持物表面。 原代培養(yǎng)細(xì)胞的生命歸宿 ? 原代培養(yǎng)期 ? 傳代培養(yǎng)期 ? 衰退期 體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型 ? 貼附生長： 必須
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