細(xì)胞培養(yǎng)基本知識(更新版)
【正文】 Na2HPO4 3. 貼壁生長細(xì)胞傳代 ? 采用酶消化法傳代。 ? 貼壁期 ：細(xì)胞附著于底物上，游離期結(jié)束 ? 潛伏期 ：此時(shí)細(xì)胞有生長話動，而無細(xì)胞分裂。它包括：細(xì)胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)。 自動雙重純水蒸餾器 培養(yǎng)器皿 1. 一次性培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板：一般朔料培養(yǎng)器皿的細(xì)胞生長面帶負(fù)電荷，有利于大多數(shù)表面帶正電荷的細(xì)胞貼壁生長 2. 玻璃培養(yǎng)瓶、溶液瓶、移液管 常用玻璃器皿清洗 1. 浸泡：在 5%稀鹽酸溶液中浸泡 12h以上，以達(dá)到軟化器皿表面所附著物質(zhì)，并中和器皿表面的堿性物質(zhì)。細(xì)胞培養(yǎng)基本知識 細(xì)胞室 1. 準(zhǔn)備室：用于進(jìn)行培養(yǎng)器皿的清晰、包裝、培養(yǎng)物質(zhì)的準(zhǔn)備和消毒以及供應(yīng)物品的保藏等 . 2. 緩沖間：為了減少將外界污染源頭帶入培養(yǎng)室 3. 培養(yǎng)室：是專門用于進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)和各種無菌操作的實(shí)驗(yàn)室。 ③ 箱內(nèi)滅菌蒸餾水 3升，以保持箱內(nèi)濕度，避免培養(yǎng)液蒸發(fā) 。 細(xì)胞培養(yǎng)的概念 原代培養(yǎng)： 就是初次培養(yǎng)，即培養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)皿中就不再分割，任其生長繁殖而不更換生長器皿。此時(shí)細(xì)胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。 2. 半懸浮生長細(xì)胞傳代（ Hela細(xì)胞） ? 此類細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細(xì)胞從瓶壁脫落下來，進(jìn)行傳代。 ? 7. 將后者放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 ：又稱羧肽酶，有膠原酶 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ 、Ⅳ 型及肝細(xì)胞專用膠原酶 5種，可根據(jù)制備不同組織細(xì)胞懸液選擇不同類型的膠原酶 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是維持體外細(xì)胞生存和生長的溶液，分 天然培養(yǎng)基和 合成培養(yǎng)基 。 血清中含有： 1. 多種蛋白質(zhì) （ 白蛋白 、 球蛋白 、 鐵蛋白等 ） 2. 多種金屬離子； 3. 激素； 4. 促貼附物質(zhì) ， 如纖粘蛋白 、 冷析球蛋白 、膠原等 。培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升 100單位。 慢凍程序 ? 標(biāo)準(zhǔn)程序： 當(dāng)溫度在 25 ℃ 以上時(shí)， 1～ 2 ℃ /min 當(dāng)溫度達(dá) 25 ℃ 以下時(shí)， 5～ 10 ℃ /min 當(dāng)溫度達(dá) 100℃ 時(shí)，可迅速放入液氮中 ? 簡易程序： 將冷凍管（管口要朝上）放入紗布袋內(nèi)，紗布袋系以 線繩，通過線繩將 紗布袋固定于液氮罐罐口，按每分鐘溫度下降 1～ 2 ℃ 的速度，在 40分鐘內(nèi)降至液氮表面，停 30分鐘后，直接投人液氮中。 3. 低速離心 10分鐘。二甲亞砜 （ DMSO） 能溶解沉積在細(xì)胞中藍(lán)紫色結(jié)晶物，溶液顏色深淺與所含的藍(lán)紫色產(chǎn)物量
黨政相關(guān)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1