植物組織培養(yǎng)第六章植物細(xì)胞培養(yǎng)-文庫(kù)吧資料
2025-05-18 00:24本頁(yè)面
【正文】 節(jié) 植物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用 一、植物次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn) 二、突變體選擇 三、誘導(dǎo)多變體 （一 ）生產(chǎn)天然的植物成分 通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)可得到大量合成的植物次生化合物，如生物堿 、 抗菌劑、抗血平、橡膠、類固醇、糖類衍生物、天然色素等很多物質(zhì) . 一、植物次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn) ● 海巴戟的植物體內(nèi) —— 蒽醌 ● 胡蘿卜愈傷組織 —— 紫紅色、橙紅色、綠色、黃白色 4種愈傷 組織株系 ● 紫草 —— 紫草色素 ● 長(zhǎng)春花細(xì)胞和愈傷組織培養(yǎng)物 —— 利血平和阿馬靈 ● 三七的愈傷組織培養(yǎng)物 —— 三七皂苷（含量達(dá)干重的 %） ● 三分三的愈傷組織中 —— 茛菪堿 （含量可達(dá)干重的 % 一、植物次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn) 問(wèn)題： ，有些細(xì)胞培養(yǎng)物不能產(chǎn)生天然化合物或者比正常的植株產(chǎn)量低 原因： （ 1） 培養(yǎng)細(xì)胞與完整植株不同，培養(yǎng)的細(xì)胞缺少完整植株 所有的那種進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)的能力 （ 2）對(duì)于能夠促成這類天然產(chǎn)物合成的營(yíng)養(yǎng)條件和其他培養(yǎng)條件缺乏了解 已知：在培養(yǎng)細(xì)胞中生物堿的產(chǎn)量受培養(yǎng)物的生長(zhǎng)階段、培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件（光照、溫度）及細(xì)胞基因型等的影響。 細(xì)胞密實(shí)體積（ PCV）：以每 ml培養(yǎng)液中細(xì)胞總體積的 ml數(shù)表示。 二氧化碳對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)沒(méi)有太大影響，但在低密度細(xì)胞培養(yǎng)中，二氧化碳對(duì)于誘導(dǎo)細(xì)胞分裂可能有重要作用， 第三節(jié) 植物細(xì)胞生長(zhǎng)和活力的測(cè)定 一、懸浮培養(yǎng)中細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定 細(xì)胞計(jì)數(shù)：把 1份培養(yǎng)加入到 2份 8%三氯化鉻溶液中，在 70℃ 下加熱 215分鐘，然后將混合物冷卻，用力震蕩 10分鐘，用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。加入 EDTA使鐵和其他金屬離子長(zhǎng)期處于可利用狀態(tài)。 五、影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑： 細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)，常表現(xiàn)一種自然的聚集現(xiàn)象，加入 2， 4D，少量水解酶或酵母提取液，能夠增加細(xì)胞的分散度。 五、影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素 細(xì)胞密度： 培養(yǎng)基的成分和起始細(xì)胞密度對(duì)單細(xì)胞培養(yǎng)成敗有影響。 條件培養(yǎng)基適合單細(xì)胞和低密度細(xì)胞培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞受到這些化學(xué)藥物處理后，由于這些核苷酸類似物的存在阻止了 DNA的合成，細(xì)胞周期只能進(jìn)行到 G1期，細(xì)胞都滯留在 G1期和 S期的邊界，當(dāng)把這些抑制劑除去后，細(xì)胞就進(jìn)入同步分裂。 三、培養(yǎng)細(xì)胞的同步化 實(shí)現(xiàn)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞同步化的方法： 饑餓法： 先對(duì)細(xì)胞斷絕供應(yīng)一種進(jìn)行細(xì)胞分裂所必需的營(yíng)養(yǎng)成分或激素，使細(xì)胞停滯在 G1期或 G2期，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的饑餓后，當(dāng)重新在培養(yǎng)基中加入這種限制因子時(shí)，靜止細(xì)胞就會(huì)同時(shí)進(jìn)入分裂。 為了加速細(xì)胞增殖， 有的甚至在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末就 進(jìn)行繼代。 二、懸浮細(xì)胞的繼代 在懸浮培養(yǎng)中， 細(xì)胞剛進(jìn)入靜止期之初，細(xì)胞懸浮液達(dá)到最大量，就必須進(jìn)行繼代培養(yǎng) 。但實(shí)際所需的時(shí)間和接種量應(yīng)視不同細(xì)胞系而定。 在開放連續(xù)培養(yǎng)中，注入的新鮮培養(yǎng)液的容積與流出的培養(yǎng)液容積相等，其中細(xì)胞的密度也保持恒定，并通過(guò)調(diào)節(jié)流入和流出的速度，使細(xì)胞的生長(zhǎng)速度一直保持在一個(gè)穩(wěn)定狀態(tài)，流出的細(xì)胞相當(dāng)于培養(yǎng)
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