植物組織培養(yǎng)第六章植物細(xì)胞培養(yǎng)(編輯修改稿)
2025-06-15 00:24 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 太長會引起細(xì)胞的大量死亡和解體。 為了加速細(xì)胞增殖， 有的甚至在對數(shù)生長期末就 進(jìn)行繼代。 三、培養(yǎng)細(xì)胞的同步化 同步培養(yǎng)：在培養(yǎng)基中大多數(shù)細(xì)胞都能同時通過細(xì)胞周期的各個階段，同步性的程度以百分百分?jǐn)?shù)表示。 三、培養(yǎng)細(xì)胞的同步化 實現(xiàn)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞同步化的方法： 饑餓法： 先對細(xì)胞斷絕供應(yīng)一種進(jìn)行細(xì)胞分裂所必需的營養(yǎng)成分或激素，使細(xì)胞停滯在 G1期或 G2期，經(jīng)過一段時間的饑餓后，當(dāng)重新在培養(yǎng)基中加入這種限制因子時，靜止細(xì)胞就會同時進(jìn)入分裂。 三、培養(yǎng)細(xì)胞的同步化 抑制法： 使用 DNA合成抑制劑，也可使細(xì)胞培養(yǎng)同步化。當(dāng)細(xì)胞受到這些化學(xué)藥物處理后，由于這些核苷酸類似物的存在阻止了 DNA的合成，細(xì)胞周期只能進(jìn)行到 G1期，細(xì)胞都滯留在 G1期和 S期的邊界，當(dāng)把這些抑制劑除去后，細(xì)胞就進(jìn)入同步分裂。 為了改善液體培養(yǎng)基中材料的通氣狀況，需進(jìn)行培養(yǎng)基的不斷振蕩： （ 1）旋轉(zhuǎn)培養(yǎng) （ 2）往返振蕩培養(yǎng) （ 3）旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng) （ 4）攪動振蕩培養(yǎng) 四、培養(yǎng)基的振蕩 培養(yǎng)基成分： N6， MS， B5適合單子葉植物細(xì)胞， MS， B5， LS， SL適合雙子葉植物細(xì)胞。 條件培養(yǎng)基適合單細(xì)胞和低密度細(xì)胞培養(yǎng)。 需要硝態(tài)氮、銨態(tài)氮、無機磷濃度更高。 五、影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素 細(xì)胞密度： 培養(yǎng)基的成分和起始細(xì)胞密度對單細(xì)胞培養(yǎng)成敗有影響。 起始密度： 細(xì)胞培養(yǎng)最低的有效密度，即能使細(xì)胞分裂、增殖的最低接種量，低于這個密度細(xì)胞不能分裂，甚至很快解體死亡。 五、影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素 植物生長調(diào)節(jié)劑： 細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時，常表現(xiàn)一種自然的聚集現(xiàn)象，加入 2， 4D，少量水解酶或酵母提取液，能夠增加細(xì)胞的分散度。 PH和二氧化碳濃度 在懸浮培養(yǎng)時， PH變動相當(dāng)大。加入 EDTA使鐵和其他金屬離子長期處于可利用狀態(tài)。硝態(tài)氮和銨態(tài)氮之間進(jìn)行調(diào)整可作為穩(wěn)定 PH的一種方法。 二氧化碳對細(xì)胞培養(yǎng)沒有太大影響，但在低密度細(xì)胞培養(yǎng)中，二氧化碳對于誘導(dǎo)細(xì)胞分裂可能有重要作用， 第三節(jié) 植物細(xì)胞生長和活力的測定 一、懸浮培養(yǎng)中細(xì)胞生長的測定 細(xì)胞計數(shù)：把 1份培養(yǎng)加入到 2份 8%三氯化鉻溶液中，在 70℃ 下加熱 215分鐘，然后將混合物冷卻，用力震蕩 10分鐘，用血球計數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。 一、懸浮培養(yǎng)中細(xì)胞生長的測定 細(xì)胞總體積：將已知體積的均勻分散的懸浮液放入 1個 15ml刻度離心管中，在 2021g下離心5min，得到細(xì)胞沉積的體積。 細(xì)胞密實體積（ PCV）：以每 ml培養(yǎng)液中細(xì)胞總體積的 ml數(shù)表示。 細(xì)胞鮮重和干重： 細(xì)胞有絲分裂的指數(shù)：在一個細(xì)胞群體中，處于有絲分裂的細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)。 細(xì)胞植板率 =每個平板形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù) /每個平板接種的細(xì)胞總數(shù) 一、懸浮培養(yǎng)中細(xì)胞生長的測定 第三節(jié) 植物細(xì)胞生長和活力的測定 二、培養(yǎng)細(xì)胞活力的測定 TTC法 熒光素二乙酸法（ FDA法） 伊凡藍(lán)染色法 第四節(jié) 植物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用 一、植物次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn) 二、突變體選擇 三、誘導(dǎo)多變體 （一 ）生產(chǎn)天然的植物成分 通過細(xì)胞培養(yǎng)可得到大量合成的植物次生化合物，如生物堿 、 抗菌劑、抗血平、橡膠、類固醇、糖類衍生物、天然色素等很多物質(zhì) .
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