動植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶(編輯修改稿)
2025-06-22 03:59 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 無機鹽濃度低，高 Mg(II)、 B(III)，適用于生根培養(yǎng) ? KM8P 培養(yǎng)基 – 有機成分種類齊全，用于原生質(zhì)體培養(yǎng) –培養(yǎng)基配制 ? 配制母液，使用時按需要稀釋 –工藝條件及其控制 ? 溫度 – 室溫范圍（ 25 oC左右） – 最適產(chǎn)酶溫度和最適生長溫度不同 ? pH – 微酸性（ pH 5～ 6） – 細(xì)胞培養(yǎng)時， pH一般變化不大 ? 溶解氧 – 植物細(xì)胞需氧量不高，供氧不宜過量 – 對剪切力敏感，通風(fēng)攪拌不宜太劇烈 –工藝條件及其控制 ? 光照 – 光照對植物細(xì)胞的生長和產(chǎn)物合成具有重要影響（植物特色） – 光照有時也抑制產(chǎn)物合成 ? 添加前體 – 前體：處于目的代謝物代謝途徑上游的物質(zhì) – 添加前體相對于添加了反應(yīng)的底物 ? 刺激劑（ elector） – 引導(dǎo)物質(zhì)朝特定的代謝方向進(jìn)行，強化次級代謝產(chǎn)物的生物合成 – 常用微生物細(xì)胞壁碎片和胞外酶 –產(chǎn)酶實例 —— 大蒜細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn) SOD ? 超氧化物歧化酶（ superoxide dismutase， SOD， EC ） – 生物體內(nèi)清除超氧化物陰離子自由基（ O2）的重要金屬酶類 – SOD 和過氧化氫酶 (catalase)、過氧化物酶 (peroxidase，POD) 一起構(gòu)成了生物體內(nèi)重要的酶促反應(yīng)防御體系，從而維護生物體內(nèi)細(xì)胞正常的生理代謝和生化反應(yīng) –產(chǎn)酶實例 —— 大蒜細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn) SOD ? 大蒜愈傷組織的誘導(dǎo) – 選取結(jié)實、飽滿、無病蟲害的大蒜蒜瓣，去除外皮 – 先用 70% 乙醇消毒 20 s，再用 %升汞消毒 10 min，然后無菌水漂洗 3次 – 在無菌條件下，切成 cm3 的小塊，植入含有 3 mg/L 2,4D和 mg/L 6BA 的半固體 MS 培養(yǎng)基中 – 25 oC， 600 lux， 12 h/d光照條件下培養(yǎng) 18天，誘導(dǎo)得到愈傷組織，每 18天繼代一次 –產(chǎn)酶實例 —— 大蒜細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn) SOD ? 大蒜細(xì)胞懸浮培養(yǎng) – 將上述在半固體 MS 培養(yǎng)基上培養(yǎng) 18天的愈傷組織，在無菌條件下轉(zhuǎn)入含有 3 mg/L 2,4D 和 mg/L 6BA 的液體 MS 培養(yǎng)基中，加入滅菌的玻璃珠， 25 oC， 600 lux， 12 h/d光照條件下振蕩培養(yǎng) 10～ 12天，使愈傷組織分散成為小細(xì)胞團或單細(xì)胞 – 無菌條件下，經(jīng)過篩網(wǎng)將小細(xì)胞團或單細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有 3 mg/L 2,4D和 mg/L 6BA 的液體 MS 培養(yǎng)基中， 25 oC，600 lux， 12 h/d光照條件下振蕩培養(yǎng) 18天 ? SOD 分離純化 – 收集細(xì)胞，破碎，用 pH 磷酸鹽緩沖液提取 – 1907年， Harrison 開創(chuàng)了動物組織培養(yǎng)的先河 ? 從蝌蚪的脊索中分離出神經(jīng)組織，放在青蛙的凝固的淋巴液中培養(yǎng)，蝌蚪的神經(jīng)組織存活了數(shù)周，并且從神經(jīng)細(xì)胞中長出了神經(jīng)纖維 – 1950s， Earle 用動物細(xì)胞培養(yǎng)制取病毒疫苗 – 1967年，動物細(xì)胞貼壁培養(yǎng)微載體開發(fā) – 1975年，雜交瘤技術(shù) –動物細(xì)胞可產(chǎn)生較高價值的物質(zhì) ? 激素、疫苗、單克隆抗體、酶 動物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶 –動物細(xì)胞結(jié)構(gòu) –動物細(xì)胞特性 ? 沒有細(xì)胞壁，細(xì)胞脆弱（區(qū)別于植物和微生物） ? 體積比微生物細(xì)胞大幾千倍，但稍小于植物細(xì)胞 ? 在肌體內(nèi)相互粘連，以群體形式存在 ? 在培養(yǎng)時具有群體效應(yīng)、貼壁依賴性、接觸抑制性、功能全能性 ? 營養(yǎng)要求復(fù)雜（血清培養(yǎng)基） –動物細(xì)胞培養(yǎng)的特點 ? 主要用于生產(chǎn)蛋白質(zhì) ? 生長緩慢 ? 容易受污染（細(xì)菌、支原體），培養(yǎng)過程中需添加抗生素 ? 對剪切力特別敏感（胞外缺少保護結(jié)構(gòu)） ? 大部分具有貼壁依賴性 —— 貼壁培養(yǎng) ? 培養(yǎng)基成分復(fù)雜，價格高昂
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