細胞培養(yǎng)基本知識(編輯修改稿)
2024-09-11 20:39 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 KH2PO4 加水至 1000 ml PH值調(diào)至 ? 消化液 1. 胰蛋白酶 ： 主要用的是 ％ 胰蛋白酶液，胰蛋白酶是一種黃白色粉末，用無 Ca2+、 Mg2+的 PBS緩沖液配制，過濾除菌。它作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細胞骨架，從而使細胞分離。濃度越高，作用越強，但超過一定限度會損傷細胞。用含血清培養(yǎng)液終止其消化作用。 2. EDTA：是一種化學螯合劑，對細胞有一定的解離作用。毒性小、價格便宜、使用方便。 ：又稱羧肽酶，有膠原酶 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ 、Ⅳ 型及肝細胞專用膠原酶 5種，可根據(jù)制備不同組織細胞懸液選擇不同類型的膠原酶 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是維持體外細胞生存和生長的溶液，分 天然培養(yǎng)基和 合成培養(yǎng)基 。 1. 天然培養(yǎng)基： 有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。 優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好 缺點：來源受限，成分復(fù)雜，影響對某些實驗產(chǎn)物 的提取和實驗結(jié)果的分析，易發(fā)生支原體污染 。 2. 合成培養(yǎng)基： 是根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點：標準化生產(chǎn)，組分和含量相對固定，成本低 。 缺點：缺少某些成分，不能完全滿足體外細胞生長需要，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清） ? 常用血清有： 胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、馬血清等，其中以 胎牛血清 質(zhì)量最好。 ? 優(yōu)質(zhì)血清的標準： 透明，淡黃色，無沉淀物，無細菌、支原體、病毒污染。 血清中含有： 1. 多種蛋白質(zhì) （ 白蛋白 、 球蛋白 、 鐵蛋白等 ） 2. 多種金屬離子； 3. 激素； 4. 促貼附物質(zhì) ， 如纖粘蛋白 、 冷析球蛋白 、膠原等 。 5. 各種生長因子 6. 轉(zhuǎn)移蛋白 7. 不明成分 ? 一般說來．含 5％小牛血清的培養(yǎng)基對大多數(shù)細胞可以維持細胞不死．但支持細胞生長一般需加 10％血清． ? 對于血清支持細因生長的生物學效應(yīng)已得到證明，但對血清中的復(fù)雜成分至今尚未完全清楚。 ? 血清中不僅存在促細胞生長因子，同時也存在細胞生長抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞所反映的生物學特性是細胞和復(fù)雜血清因子的綜合反應(yīng)。 ? 在生長因子、蛋白質(zhì)工程、基因表達調(diào)控等研究領(lǐng)域，迫切需要用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞 ? 血清質(zhì)量好壞是
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