植物細(xì)胞培養(yǎng)ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 02:17 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。 167。 一、植物單細(xì)胞培養(yǎng)的意義 建立單細(xì)胞無性系 懸浮培養(yǎng)細(xì)胞間細(xì)胞間在遺傳、生理和生化上存在差異，這些差異反映在它們的產(chǎn)量、品質(zhì)、抗病蟲性和抗逆性等方面。如果能將高抗、高產(chǎn)、高品質(zhì)的細(xì)胞株篩選出來，無疑會(huì)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)效益。 排除體細(xì)胞的干擾 利于對(duì)細(xì)胞活動(dòng)跟蹤觀察 二、單細(xì)胞培養(yǎng)的方法 細(xì)胞平板培養(yǎng) 概念：將制備好的單細(xì)胞懸浮液，按照一定的細(xì)胞密度，接種在 1mm左右的薄層固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，稱之為平板培養(yǎng) 主要技術(shù)要點(diǎn)： 單細(xì)胞的分離：一般采用酶分離法，小細(xì)胞團(tuán)不能超過 6個(gè)細(xì)胞，因此過濾時(shí)網(wǎng)篩的網(wǎng)眼要選擇合適。 單細(xì)胞懸浮液的制備：分離的單細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)基洗滌 2次以后，調(diào)整密度為 5 105/ml 植板：將 1份已調(diào)整好密度的單細(xì)胞懸浮液與 4份 35℃ 的固體培養(yǎng)基充分混合均勻，然后均勻的平鋪在培養(yǎng)皿中，其厚度為 12mm。 待植板后的培養(yǎng)基完全凝固后，用石蠟或parafilm封口膜將培養(yǎng)皿封嚴(yán)以防污染 在 25℃ 黑暗條件下培養(yǎng) 3周即可長(zhǎng)出肉眼可見的愈傷組織。 植板率評(píng)估：它以能長(zhǎng)出細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞在接種單細(xì)胞中所占的比例來表示。 植板率 (％ )＝ (形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù) /接種的細(xì)胞數(shù) ) 100％ 計(jì)算式中每個(gè)平板新形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù)的計(jì)數(shù)方法有兩種：一是直接計(jì)數(shù)法，注意計(jì)量時(shí)要掌握合適的時(shí)間，即細(xì)胞團(tuán)肉眼已能分辨，但尚未長(zhǎng)合到一起的時(shí)候。二是感光法，在暗室的紅光下將一印相紙放于欲計(jì)數(shù)的培養(yǎng)皿下，其上放一光源使培養(yǎng)皿中細(xì)胞團(tuán)印到相紙上，沖洗照片計(jì)數(shù)。 看護(hù)培養(yǎng) 概念：用一塊愈傷組織或植物離體組織看護(hù)單細(xì)胞使其生長(zhǎng)增殖的一種單細(xì)胞培養(yǎng)方法 微室培養(yǎng) 概念：人工制造一個(gè)小室，將單細(xì)胞培養(yǎng)在小室中的少量培養(yǎng)基上，使其分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)的方法，稱微室培養(yǎng)。 特點(diǎn)： （ 1）能在顯微鏡下追蹤單細(xì)胞分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)的全過程 （ 2）培養(yǎng)基少，營(yíng)養(yǎng)和水分難以保持，pH值變動(dòng)幅度大，培養(yǎng)細(xì)胞僅能短期分裂。 167。 一 . 概述 二 . 培養(yǎng)系統(tǒng) 三 . 植物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)技術(shù)要點(diǎn) 四 .提高細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的途徑 五 . 細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)中的有關(guān)技術(shù)問題 植物細(xì)胞培養(yǎng)的特性 植物細(xì)胞較微生物細(xì)胞大得多，有纖維素細(xì)胞．細(xì)胞耐拉不耐扭，抵抗剪切力差； 培養(yǎng)過程生長(zhǎng)速度緩慢，易受微生物污染，需用抗生素； 細(xì)胞生長(zhǎng)的中期及對(duì)數(shù)期．易凝聚為直徑達(dá) 350JJm一 400Pm的團(tuán)塊，懸浮培養(yǎng)較難； 培養(yǎng)時(shí)需供氧，培養(yǎng)液粘度大； 具有群體效應(yīng)； 因?yàn)橛屑?xì)胞壁 , 培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物滯留于細(xì)胞內(nèi)，產(chǎn)量較低； 細(xì)胞培養(yǎng)過程具有結(jié)構(gòu)與功能全能性 ,因而易分化 ,從而導(dǎo)致目的產(chǎn)物低于原植物體內(nèi)的濃度； 懸浮培養(yǎng)中要求有一定的細(xì)胞濃度，否則不生長(zhǎng)（ 25000~50000個(gè) /ML）。 植物細(xì)胞培養(yǎng)需要解決的問題 （ 1）氧和二氧化碳的控制，過多氧過少氧均不利于生長(zhǎng)； （ 2）營(yíng)養(yǎng)物的供應(yīng)； （ 3）細(xì)胞密度過高引起細(xì)胞團(tuán)聚甚至分化 （ 4）培養(yǎng)過程中細(xì)胞的分化的防止， （ 5）細(xì)胞取得中微生物的去除； （ 6）細(xì)胞壁脆性的存在要求培養(yǎng)體系剪切力要小； 二 .培養(yǎng)系統(tǒng) 懸浮培養(yǎng)系統(tǒng) 機(jī)械攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) 機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器通常是根據(jù)植物細(xì)胞的特性在微生物發(fā)酵罐的基礎(chǔ)上作如下改進(jìn)： 攪拌裝置要減少剪切，一般改葉輪式為螺旋式 因?yàn)橹参锛?xì)胞生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，需要隨時(shí)補(bǔ)充水分和營(yíng)養(yǎng)，因此必須設(shè)計(jì)加液裝置； 由于植物細(xì)胞的生理活動(dòng)需要新鮮空氣，且細(xì)胞代謝也可能產(chǎn)生有害氣體，所以必須設(shè)計(jì)通氣裝置； 為便于取樣觀察，一般還設(shè)計(jì)有取樣口 。 機(jī)械攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) 氣壓攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) 考慮到機(jī)械攪拌式反應(yīng)器的剪切作用難以避免，同時(shí)攪拌器轉(zhuǎn)動(dòng)的中軸往往是容易使培養(yǎng)物污染的部位，因此，發(fā)展出空氣提升式生物反應(yīng)器，但其缺點(diǎn)是攪拌不均勻 旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)系統(tǒng)： 一般用于產(chǎn)品中試或某些必需裂解細(xì)胞才能獲得目的產(chǎn)物的培養(yǎng)，其優(yōu)點(diǎn)是控制精確，處理靈活，缺點(diǎn)是培養(yǎng)體積較小。 固定化培養(yǎng)系統(tǒng) 細(xì)胞固定化培養(yǎng)技術(shù)按照其支持物不同可以分為兩大類： 包埋式固定化培養(yǎng)系統(tǒng)：支持物多采用瓊脂、瓊脂糖、藻酸鹽、聚丙烯酰胺等； 附著式固定化培養(yǎng)系統(tǒng)：支持
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1