淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與分離(編輯修改稿)
2025-05-27 01:27 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 檢測(cè)與訊號(hào)處理系統(tǒng) 細(xì)胞流動(dòng)系統(tǒng)及氣壓流速控制系統(tǒng) 流式細(xì)胞分析儀 （ 4）磁珠分離術(shù) ? 磁珠分離術(shù)是將磁性材料顆粒表面進(jìn)行外理，微球的核心為小金屬顆粒，核心處包裹高分子材料（聚苯乙烯），可結(jié)合不同的生物大分子物質(zhì)（抗原、抗體、核酸等）， 若微球表面包被有免疫物質(zhì)則稱為免疫磁珠 ，其兼有免疫配基的性質(zhì)和磁響應(yīng)性質(zhì)，即在磁場(chǎng)中顯示磁性，移出磁場(chǎng)時(shí)磁性消除。 目前商品出售的磁珠有直徑為 1～ 5um等不同的規(guī)格，表面活性基團(tuán)有氨基（－ NH2）、羧基（－ COOH）和羥基（－ OH）等。 包被的免疫物質(zhì)有：一抗、二抗等。 ? 方法： 將包被有關(guān)抗體的磁珠與待分離細(xì)胞充分作用，這樣借助于抗體磁珠，將與相應(yīng)的細(xì)胞結(jié)合成： 細(xì)胞－抗體－磁珠復(fù)合物 ，該細(xì)胞在磁場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)與其他細(xì)胞產(chǎn)生明顯差別。 如采用層析的方法，將層析柱 放于強(qiáng)磁場(chǎng)中 ，與磁珠結(jié)合的細(xì)胞運(yùn)動(dòng)將受限，而未與磁珠結(jié)合的細(xì)胞將先被洗脫下出來(lái)。 再將該柱 移出磁場(chǎng) ，與磁珠結(jié)合的細(xì)胞也將被洗脫下來(lái)，達(dá)到分離目的。 單克隆抗體 CD3 羊抗鼠修飾磁球 Biomag 抗 CD3磁球 磁球結(jié)合 T細(xì)胞 加入 B和 T細(xì)胞中 負(fù)向選擇 正向選擇 磁架進(jìn)行分離 直接法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類 間接法對(duì) T細(xì)胞進(jìn)行分離 免疫磁珠法細(xì)胞分選過(guò)程 免 疫 磁 珠 細(xì) 胞 分 選 裝 置 （ 5）親和板結(jié)合分離法 原理：各種淋巴細(xì)胞亞群具有不同的抗性。 ① 分離 CD4+或 CD8+細(xì)胞，可用抗 CD4或CD8單克隆抗體吸附。 ②分離 B細(xì)胞用抗 Ig抗體。 ③分離有 C3受體的細(xì)胞用活化的 C3包被。 將相應(yīng)抗體結(jié)合 于塑料平板上 抗原陽(yáng)性的細(xì)胞 與相應(yīng)抗體結(jié)合 淋巴細(xì)胞的保存和活力測(cè)定 ? 分離細(xì)胞的保存 ? （ 1）短期保存 ? 用含有 10～ 20%滅活小牛血清的 Hanks、Tc19 RPMI 1640培養(yǎng)液可保存數(shù)周。 （ 2）長(zhǎng)期保存及復(fù)蘇 ? 保存：在保護(hù)劑 二甲基亞砜 中于液氮（ 196℃) 中保存。其過(guò)程是：先對(duì)需凍存的細(xì)胞作活細(xì)胞計(jì)數(shù)，低速離心后，取沉積細(xì)胞用含有 10%二甲亞砜的小牛血清配制成適當(dāng)濃度的細(xì)胞懸 液，分裝于凍存管內(nèi)，立即放入降溫過(guò)渡站 ( 80℃) 中，繼而進(jìn)行降溫 (196℃) 冷凍。 ? 復(fù)蘇：將其從液氮中取出，立即放入 40 ℃ 溫水中，融化后加入 10倍的培養(yǎng)液混勻，低速離心，洗去保護(hù)劑，再懸于新培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)并檢查細(xì)胞活力。 細(xì)胞活力的檢測(cè) 常用方法是 臺(tái)盼藍(lán)染色法 。這種染料不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故 活細(xì)胞不著色，死亡細(xì)胞 的細(xì)胞膜通透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞而使細(xì)胞 著色（藍(lán)色）。 淋巴細(xì)胞的培養(yǎng) ? 正常情況下，人外周血中是 沒(méi)有 分裂相細(xì)胞的，只有在異常情況下才能發(fā)現(xiàn)。外周血淋巴細(xì)胞一
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