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淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)ppt課件(編輯修改稿)

2025-06-01 01:54 本頁(yè)面

　

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 1次（吸管 1）（滴管 2） .離心之前計(jì)數(shù)細(xì)胞 ? 棄上清 ,加入完全培養(yǎng)基（吸管 2） ,重懸細(xì)胞（滴管 2） .將細(xì)胞濃度調(diào)整為2*106個(gè) /ml. 將細(xì)胞加入 96孔板（加樣槍?zhuān)?,100ul/孔 ? A組：加入不同濃度的 ConA,100ul/孔 .每個(gè)濃度為 2復(fù)孔 .留 2個(gè)孔僅加入培養(yǎng)基，作為空白對(duì)照 . B組：加入 100ul ConA(10ug/ml),則終濃度為 5ug/ .設(shè)空白對(duì)照 . 實(shí)驗(yàn)步驟 LOGO ? A組：置培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 66h,加入 MTT溶液 20ul/孔 ,繼續(xù)培養(yǎng) 6hr后 ,去掉上清 ,加入 DMSO100ul/孔 ,棄分混勻 ,測(cè)OD570nm值 . B組：置培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 66h，制備流式標(biāo)本，上機(jī)檢測(cè) 細(xì)胞數(shù) /ml＝ 4大格中細(xì)胞總數(shù) 4 104 稀釋倍數(shù) LOGO ConA的倍比稀釋 10ug/ml 5ug/ml 450181。L 440181。L 220181。L 220181。L Original sample tube tube 1 tube 2 220181。L LOGO ?注意無(wú)菌操作 ?操作中盡可能短時(shí)間內(nèi)完成，以減少死細(xì)胞數(shù) ?將稀釋血加于分離液時(shí)，動(dòng)作要輕柔 ?離心時(shí)，加速度與減速度要均勻平穩(wěn)，不能用離心機(jī)“剎車(chē)”檔 ?分離不同種屬動(dòng)物的 PBMC要用不同的淋巴細(xì)胞分離液 ?細(xì)胞數(shù)量、刺激劑濃度需

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