植物組織培養(yǎng)第六章植物細胞培養(yǎng)-wenkub.com
2025-05-06 00:24 本頁面
【正文】 在培養(yǎng)基中加入脫落酸，可明顯提高胚狀體的質(zhì)量，增加成株率。 二、人工種子的制備技術 （三）人工種子的包裹 方法 1. 離子交換法 2. 干燥法 用 %的聚氯乙烯作為包裹介質(zhì)，然后使其干燥固化 3. 冷卻法 用 %的膠包埋，冷卻固化 二、人工種子的制備技術 因農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的季節(jié)性限制，要求人工種子能貯藏一定的時間，以適應生產(chǎn)的要求。 （一）胚狀體的誘導（胡蘿卜） 將胡蘿卜天然種子表面消毒，在無菌條件下發(fā)芽成無菌苗 → 切割下胚軸或子葉接種在含 2,～→ 將胚性愈傷組織懸浮在培養(yǎng)基中，誘導產(chǎn)生體細胞胚 → 每 7～ 10d更換一次培養(yǎng)液，震蕩培養(yǎng) → 擴大繁殖量或繼代培養(yǎng)。采用細胞培養(yǎng)方法可以達到這個目的。 亞氯酸鹽的毒性比氯酸鹽高幾百倍。 （ 1）直接選擇法：適用于抗性變異的細胞選擇 方法：在培養(yǎng)基中加入某種對正常細胞有毒害的物質(zhì)，當多數(shù)細胞死去以后，把少數(shù)能存活的細胞系分離出來，轉(zhuǎn)入含有同種毒素但濃度更高的培養(yǎng)基上，進一步檢驗這些細胞系的突變性質(zhì)。 （ 2）給細胞提供植物天然產(chǎn)物中間體。 問題： 解決：對能夠合成這些化合物的細胞進行不斷的篩選，選擇那 些穩(wěn)產(chǎn)和高產(chǎn)的細胞系。 一、懸浮培養(yǎng)中細胞生長的測定 細胞總體積：將已知體積的均勻分散的懸浮液放入 1個 15ml刻度離心管中，在 2021g下離心5min，得到細胞沉積的體積。 PH和二氧化碳濃度 在懸浮培養(yǎng)時， PH變動相當大。 需要硝態(tài)氮、銨態(tài)氮、無機磷濃度更高。 三、培養(yǎng)細胞的同步化 抑制法： 使用 DNA合成抑制劑，也可使細胞培養(yǎng)同步化。因為處在靜止期的細胞懸浮液保存時間太長會引起細胞的大量死亡和解體。 為了保持在開放連續(xù)培養(yǎng)中細胞增殖的穩(wěn)定性，采取的控制方法： （ 1）濁度恒定法 （ 2）化學恒定法 二、懸浮細胞的繼代 在懸浮培養(yǎng)中，為了保持一定的懸浮細胞增殖速度和增殖量， 應定期做繼代培養(yǎng)，最適的周期一般為 12周 。 封閉型連續(xù)培養(yǎng)： 在培養(yǎng)過程中，排除的舊培養(yǎng)基由加入的新鮮培養(yǎng)基進行補充，進出數(shù)量保持平衡，從而使培養(yǎng)系統(tǒng)中營養(yǎng)物質(zhì)的含量總是超過細胞生長的需要。細胞增殖速度快。 是利用特制的培養(yǎng)容器進行大規(guī)模細胞培養(yǎng)的一種方式。 （ 3）在整個培養(yǎng)過程中，細胞數(shù)目會不斷發(fā)生變化，呈現(xiàn)出明顯的慢 快 慢，最后增長停止的細胞生長周期。 一、培養(yǎng)類型和方法 （一）成批培養(yǎng) 指把細胞分數(shù)在一定容積的 培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，當培養(yǎng)物增殖到一定量時，轉(zhuǎn)接繼代，建立起單細胞培養(yǎng)物。 （ 2）用振蕩或酶法，游離出單個細胞或小細胞團。 愈傷組織誘導 材料自來水沖洗 —— 75%的乙醇擦洗 —— 將材料切成小塊（帶形成層） —— 接種到 MS+2,4D 2mg/L+CH 500mg/L+瓊脂 %,上 —— 得愈傷組織 —— 擴大繁殖。 第二節(jié) 細胞懸浮培養(yǎng) 細胞懸浮培養(yǎng)是 使離體的植物細胞懸浮在液體培養(yǎng)基中進行的無菌培養(yǎng)。 （三）平板培養(yǎng)法 平板培養(yǎng)法是把單個細胞與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合，并平鋪一薄層在培養(yǎng)皿底上的培養(yǎng)方法。 （ 4）恒溫培養(yǎng)。 （ 1）取處于活躍生長期約 1厘米大小愈傷組織塊。 特點：細胞不
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