植物組織培養(yǎng)第六章植物細(xì)胞培養(yǎng)-wenkub
2023-05-21 00:24:04 本頁(yè)面
【正文】 受酶?jìng)?，不?huì)發(fā)生質(zhì)壁分離。掌握植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的意義和細(xì)胞株篩選方法，了解懸浮培養(yǎng)類型及方法，清楚細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的應(yīng)用。 具有單細(xì)胞分離和培養(yǎng)基本能力，具備細(xì)胞懸浮成批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)。 不適用于所有植物 酶解法：利用果膠酶處理葉片，使細(xì)胞間的中膠層發(fā)生降解，分離出具有代謝活性的細(xì)胞。 （ 2）無菌條件下，愈傷組織塊安放在培養(yǎng)瓶中，在愈傷組織上放約 1厘米平方的無菌濾紙片。 （二）微室培養(yǎng)法 人工制造一個(gè)小室（載玻片和蓋玻片），將單細(xì)胞培養(yǎng)在小室中的少量培養(yǎng)基上，使其分裂增殖成細(xì)胞團(tuán)的方法。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞、原生質(zhì)體及融合產(chǎn)物的培養(yǎng)。 建立在愈傷組織的液體培養(yǎng)技術(shù)基礎(chǔ)上。 單細(xì)胞懸浮液的制備 愈傷組織轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中 —— 4r/min轉(zhuǎn)床培養(yǎng) 10d—— 140m 140m的細(xì)胞篩過篩 —— 使細(xì)胞密度達(dá)到 10 個(gè) /ml左右 —— 得單細(xì)胞懸浮液。 （ 3）接種在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng) 2周。 它是進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞分裂的生理生化研究常用的培養(yǎng)方法。 （ 4）成批培養(yǎng)結(jié)束后，若要進(jìn)行下一批培養(yǎng)，必須另外進(jìn)行繼代培養(yǎng)，其方法是用注射器吸取一定量的含單細(xì)胞和小細(xì)胞團(tuán)的懸浮培養(yǎng)物，并移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶里，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。 在培養(yǎng)過程中，以不斷抽取懸浮培養(yǎng)物并注入等量新鮮培養(yǎng)基，使培養(yǎng)物不斷得到養(yǎng)分補(bǔ)充，保持其恒定體積的培養(yǎng)。 （ 3）適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。 懸浮在排除液中的細(xì)胞經(jīng)機(jī)械方法收集后再放回培養(yǎng)系統(tǒng)中，因此在這樣培養(yǎng)方式中，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞密度不斷增加。但實(shí)際所需的時(shí)間和接種量應(yīng)視不同細(xì)胞系而定。 為了加速細(xì)胞增殖， 有的甚至在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末就 進(jìn)行繼代。當(dāng)細(xì)胞受到這些化學(xué)藥物處理后，由于這些核苷酸類似物的存在阻止了 DNA的合成，細(xì)胞周期只能進(jìn)行到 G1期，細(xì)胞都滯留在 G1期和 S期的邊界，當(dāng)把這些抑制劑除去后，細(xì)胞就進(jìn)入同步分裂。 五、影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素 細(xì)胞密度： 培養(yǎng)基的成分和起始細(xì)胞密度對(duì)單細(xì)胞培養(yǎng)成敗有影響。加入 EDTA使鐵和其他金屬離子長(zhǎng)期處于可利用狀態(tài)。 細(xì)胞密實(shí)體積（ PCV）：以每 ml培養(yǎng)液中細(xì)胞總體積的 ml數(shù)表示。 （二）生產(chǎn)轉(zhuǎn)化 定義：利用生物系統(tǒng)通過水解、加氫、羥基化作用、氧化還原及脂化反應(yīng)，將有機(jī)分子轉(zhuǎn)化為新的化合物的過程。 目的：提高該種天然化合物在細(xì)胞中的產(chǎn)量。 二、突變體選擇 （ 2）間接選擇法（負(fù)選法） 適用于目標(biāo)表現(xiàn)型不具有選擇上的優(yōu)勢(shì)，即細(xì)胞未產(chǎn)生某種抗性物質(zhì)，而是產(chǎn)生了一種代謝形式或表現(xiàn)形式的性狀。 如果細(xì)胞含有硝酸還原酶，在培養(yǎng)基中加入 2080mmol/L氯酸鹽，此濃度氯酸鹽雖不足以殺活細(xì)胞，但氯酸鹽可被還原成亞氯酸鹽，使這些細(xì)胞被殺死，存活下來的只有硝酸還原酶確實(shí)的突變細(xì)胞。 利用培養(yǎng)過程中染色體的自發(fā)加倍現(xiàn)象，也可使單倍體細(xì)胞加倍，獲得純合二倍體植株，在遺傳育種上有重要意義。 二、人工種子的制備技術(shù) （二）成熟與干燥 ⑴： 繁殖體必須同步增殖并達(dá)到成熟方可用于人工種子的制備。但人工種子含水量大，常溫下易失水變干，因此人工種子的保存是目前研究的一個(gè)難題。 三、人工種子的貯藏與萌發(fā) 思考： 說明看護(hù)培養(yǎng)、平板培養(yǎng)的特點(diǎn) 什么是條件培養(yǎng)基？平板培養(yǎng)植板率怎樣計(jì)算 解釋：細(xì)胞懸浮培養(yǎng)、成批培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)、化學(xué)恒定法、濁度恒定法 說明細(xì)胞株篩選的方法 。
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