植物組織培養(yǎng)六-文庫吧資料
2025-01-20 05:05本頁面
【正文】 高，次生物質(zhì)的合成大為增強(qiáng)，同時(shí)占地面積大為減小。不過它占地面積大，累積次生代謝物較多的滴液區(qū)所占比例不高；而且在這密封的體系中氧氣的供應(yīng)時(shí)常成為限制因子，經(jīng)常還得附加提供無菌空氣的設(shè)備。無菌液罐被緊固定在培養(yǎng)床的上方，通過管道向下滴注培養(yǎng)液。本系統(tǒng)由培養(yǎng)、液罐和動(dòng)泵等構(gòu)成。 固定化培養(yǎng)系統(tǒng)細(xì)胞固定化培養(yǎng)技術(shù)按照其支持物不同可以分為兩大類： 包埋式固定化培養(yǎng)系統(tǒng) ：支持物多采用瓊脂、瓊脂糖、藻酸鹽、聚丙烯酰胺等； 附著式固定化培養(yǎng)系統(tǒng) ：支持物采用尼龍網(wǎng)、聚氨酯泡沫、中空纖維等材料。 氣壓攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) 考慮到機(jī)械攪拌式反應(yīng)器的剪切作用難以避免，同時(shí)攪拌器轉(zhuǎn)動(dòng)的中軸往往是容易使培養(yǎng)物污染的部位，因此， 發(fā)展出空氣提升式生物反應(yīng)器，但其缺點(diǎn)是攪拌不均勻。 n 因?yàn)橹参锛?xì)胞生長周期長，需要隨時(shí)補(bǔ)充水分和營養(yǎng)，因此必須 設(shè)計(jì)加液裝置 ； n 由于植物細(xì)胞的生理活動(dòng)需要新鮮空氣，且細(xì)胞代謝也可能產(chǎn)生有害氣體，所以必須設(shè)計(jì) 通氣裝置 ；為便于取樣觀察，一般還設(shè)計(jì) 有取樣口。 植物細(xì)胞培養(yǎng)需要解決的問題（ 1）氧和二氧化碳的控制，過多氧過少氧均不利于生長；（ 2）營養(yǎng)物的供應(yīng)；（ 3）細(xì)胞密度過高引起細(xì)胞團(tuán)聚甚至分化（ 4）培養(yǎng)過程中細(xì)胞分化的防止，（ 5）細(xì)胞培養(yǎng)中微生物的去除；（ 6）細(xì)胞壁脆性的存在要求培養(yǎng)體系剪切力要??；二 .培養(yǎng)系統(tǒng)n n 提高生產(chǎn)效率 保護(hù)生態(tài)環(huán)境 主要用作食品的調(diào)味劑，化妝行業(yè)用于制作護(hù)膚品和洗發(fā)香波等，美容院用作換膚液。有些是生物毒素的主要來源，可以用于殺蟲、殺菌，而對(duì)環(huán)境和人畜無害，是理想的環(huán)保產(chǎn)品。 李時(shí)珍（ 1593）在《本草綱目》中所開列的 1892種藥物絕大多數(shù)是植物藥物，目前仍有約 25％的法定藥品來自植物。1. 植物產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的類型? 植物次生產(chǎn)物種類繁多（據(jù)保守估計(jì)已超過 2萬種），根據(jù)分子結(jié)構(gòu)不同大致分為：? 酚類化合物－黃酮類? 單酚類? 醌 類（苯醌、萘醌、蒽醌）? 萜類化合物－三萜皂甙? 甾體皂甙? 單萜、倍半萜、二萜? 含氮化合物－生物堿（真生物堿、偽生物堿、原生物堿）? 胺類（伯、仲、叔、季胺）? 非蛋白質(zhì)氨基酸? 多炔類、有機(jī)酸等n 2． 植物次生代謝產(chǎn)物在醫(yī)藥、食品、輕化工業(yè)等領(lǐng)域具有重要意義。? B、與植物的栽培不同，而與發(fā)酵工業(yè)相似， 是獨(dú)立眾多的外界環(huán)境因素（包括天氣、地理、季節(jié)、寄生物等）的生產(chǎn)過程。 所以把這一技術(shù)認(rèn)為是植物細(xì)胞的 “ 發(fā)酵工程 ” 。4. 植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)與次生代謝 產(chǎn)物生產(chǎn)一 . 概述 二 . 培養(yǎng)系統(tǒng) 三 . 植物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)四 . 提高細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的途徑 五 . 細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)中的有關(guān)技術(shù)問題 n 一、概述? 植物次生代謝產(chǎn)物是指植物中一大類并非植物生長發(fā)育所必需的小分子有機(jī)化合物，其產(chǎn)生和分布通常有種屬、器官組織和生長發(fā)育期的特異性。其它單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)A飼養(yǎng)層培養(yǎng)基技術(shù) 將飼養(yǎng)細(xì)胞先用射線輻射處理，然后將飼養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)細(xì)胞混合植板，經(jīng)過照射的細(xì)胞對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞起到一個(gè)飼養(yǎng)作用。微室培養(yǎng)概念： 人工制造一個(gè)小室，將單細(xì)胞培養(yǎng)在小室中的少量培養(yǎng)基上，使其分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)的方法，稱微室培養(yǎng)。二是感光法 ，在暗室的紅光下將一印相紙放于欲計(jì)數(shù)的培養(yǎng)皿下，其上放一光源使培養(yǎng)皿中細(xì)胞團(tuán)印到相紙上，沖洗照片計(jì)數(shù)。植板率評(píng)估 ：它以能長出細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞在接種單細(xì)胞中所占的比例來表示。單細(xì)胞懸浮液的制備：分離的單細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)基洗滌 2次以后，調(diào)整密度為 510 5/ml植板： 將 1份已調(diào)整好密度的單細(xì)胞懸浮液與 4份35℃ 的固體培養(yǎng)基充分混合均勻，然后均勻的平鋪與培養(yǎng)皿中，其厚度為 12mm。 單細(xì)胞的分離：一般采用酶分離法，小細(xì)胞團(tuán)不能超過 6個(gè)細(xì)胞，因此過濾時(shí)網(wǎng)篩的網(wǎng)眼要選擇合適。排除體細(xì)胞的干擾利于對(duì)細(xì)胞活動(dòng)跟蹤觀察二、單細(xì)胞培養(yǎng)的方法細(xì)胞平板培養(yǎng) 概念：將制備好的單細(xì)胞懸浮液，按照一定的細(xì)胞密度，接種在 1mm左右的薄層固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，稱之為平板培養(yǎng)3. 單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)一、植物單細(xì)胞培養(yǎng)的意義建立單細(xì)胞無性系 懸浮培養(yǎng)細(xì)胞間細(xì)胞間在遺傳、生理和生化上存在差異，這些差異反映在它們的產(chǎn)量、品質(zhì)、抗病蟲性和抗逆性等方面。用于處理的細(xì)胞系最好處于對(duì)數(shù)生長期。3）有絲分裂阻抑 用秋水仙素處理指數(shù)生長的懸浮培養(yǎng)物，濃度一般控制在 %，處理時(shí)間以 46小時(shí)為宜? 無論何種細(xì)胞同步化處理，對(duì)細(xì)胞本身或多或少都有一定的傷害。2）抑制劑法 通過一些 DNA 合成抑制劑處理細(xì)胞，使細(xì)胞停留在 DNA 合成前期，當(dāng)解除抑制后，即可獲得處于同一細(xì)胞周期的細(xì)胞。 同一培養(yǎng)體系中，細(xì)胞不同步使懸浮細(xì)胞的分裂、代謝以及生理、生化狀態(tài)等更趨復(fù)雜化，所以人們一直希望通過一定的技術(shù)途徑，使同一培養(yǎng)體系中的細(xì)胞能保持相對(duì)一致的細(xì)胞學(xué)和生理學(xué)狀態(tài)，工作中常用的處理方法：物理方法1）分選法 通過細(xì)胞體積大小分級(jí)，直接將處于相同周期的細(xì)胞進(jìn)行分選，然后將同一狀態(tài)的細(xì)胞繼代培養(yǎng)于同一培養(yǎng)體系中。 n n 起始愈傷組織的質(zhì)量 ：松散性好、增殖快、再生能力強(qiáng)。 n 細(xì)胞生長迅速，懸浮細(xì)胞的生長量一般 2～ 3天甚至更短時(shí)間便可增加一倍。 n 均一性好，細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同。 一般用孚爾根染色法，先將組織用1molHCl在 60℃ 水解后染色，常規(guī)鏡檢，統(tǒng)計(jì) 500個(gè)細(xì)胞，計(jì)算。細(xì)胞的干重和鮮重一般以每毫升懸浮培養(yǎng)物的重量表示。D、細(xì)胞的干重和鮮重 ：將一定量的細(xì)胞懸浮液加到預(yù)先稱重的尼龍布上，用水沖洗并抽濾除去細(xì)胞粘著的多余水滴，然后稱重，兩者差就是細(xì)胞的鮮重?？捎?5%~8%鉻酸或 %的果膠酶對(duì)細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行處理生長速率 pP=（ lnxlnX0） /tX為 t時(shí)間的細(xì)胞密度， X0為起始細(xì)胞密度B、細(xì)胞大小的測(cè)定技術(shù) （用顯微測(cè)微計(jì)）C、細(xì)胞體積 ：將一定量
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