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植物組織培養(yǎng)六-文庫吧資料

2025-01-20 05:05本頁面
  

【正文】 高,次生物質(zhì)的合成大為增強(qiáng),同時占地面積大為減小。不過它占地面積大,累積次生代謝物較多的滴液區(qū)所占比例不高;而且在這密封的體系中氧氣的供應(yīng)時常成為限制因子,經(jīng)常還得附加提供無菌空氣的設(shè)備。無菌液罐被緊固定在培養(yǎng)床的上方,通過管道向下滴注培養(yǎng)液。本系統(tǒng)由培養(yǎng)、液罐和動泵等構(gòu)成。 固定化培養(yǎng)系統(tǒng)細(xì)胞固定化培養(yǎng)技術(shù)按照其支持物不同可以分為兩大類: 包埋式固定化培養(yǎng)系統(tǒng) :支持物多采用瓊脂、瓊脂糖、藻酸鹽、聚丙烯酰胺等; 附著式固定化培養(yǎng)系統(tǒng) :支持物采用尼龍網(wǎng)、聚氨酯泡沫、中空纖維等材料。 氣壓攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) 考慮到機(jī)械攪拌式反應(yīng)器的剪切作用難以避免,同時攪拌器轉(zhuǎn)動的中軸往往是容易使培養(yǎng)物污染的部位,因此, 發(fā)展出空氣提升式生物反應(yīng)器,但其缺點是攪拌不均勻。 n 因為植物細(xì)胞生長周期長,需要隨時補(bǔ)充水分和營養(yǎng),因此必須 設(shè)計加液裝置 ; n 由于植物細(xì)胞的生理活動需要新鮮空氣,且細(xì)胞代謝也可能產(chǎn)生有害氣體,所以必須設(shè)計 通氣裝置 ;為便于取樣觀察,一般還設(shè)計 有取樣口。 植物細(xì)胞培養(yǎng)需要解決的問題( 1)氧和二氧化碳的控制,過多氧過少氧均不利于生長;( 2)營養(yǎng)物的供應(yīng);( 3)細(xì)胞密度過高引起細(xì)胞團(tuán)聚甚至分化( 4)培養(yǎng)過程中細(xì)胞分化的防止,( 5)細(xì)胞培養(yǎng)中微生物的去除;( 6)細(xì)胞壁脆性的存在要求培養(yǎng)體系剪切力要小;二 .培養(yǎng)系統(tǒng)n n 提高生產(chǎn)效率 保護(hù)生態(tài)環(huán)境 主要用作食品的調(diào)味劑,化妝行業(yè)用于制作護(hù)膚品和洗發(fā)香波等,美容院用作換膚液。有些是生物毒素的主要來源,可以用于殺蟲、殺菌,而對環(huán)境和人畜無害,是理想的環(huán)保產(chǎn)品。 李時珍( 1593)在《本草綱目》中所開列的 1892種藥物絕大多數(shù)是植物藥物,目前仍有約 25%的法定藥品來自植物。1. 植物產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的類型? 植物次生產(chǎn)物種類繁多(據(jù)保守估計已超過 2萬種),根據(jù)分子結(jié)構(gòu)不同大致分為:? 酚類化合物-黃酮類? 單酚類? 醌 類(苯醌、萘醌、蒽醌)? 萜類化合物-三萜皂甙? 甾體皂甙? 單萜、倍半萜、二萜? 含氮化合物-生物堿(真生物堿、偽生物堿、原生物堿)? 胺類(伯、仲、叔、季胺)? 非蛋白質(zhì)氨基酸? 多炔類、有機(jī)酸等n 2. 植物次生代謝產(chǎn)物在醫(yī)藥、食品、輕化工業(yè)等領(lǐng)域具有重要意義。? B、與植物的栽培不同,而與發(fā)酵工業(yè)相似, 是獨立眾多的外界環(huán)境因素(包括天氣、地理、季節(jié)、寄生物等)的生產(chǎn)過程。 所以把這一技術(shù)認(rèn)為是植物細(xì)胞的 “ 發(fā)酵工程 ” 。4. 植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)與次生代謝 產(chǎn)物生產(chǎn)一 . 概述 二 . 培養(yǎng)系統(tǒng) 三 . 植物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)要點四 . 提高細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的途徑 五 . 細(xì)胞規(guī)模化培養(yǎng)中的有關(guān)技術(shù)問題 n 一、概述? 植物次生代謝產(chǎn)物是指植物中一大類并非植物生長發(fā)育所必需的小分子有機(jī)化合物,其產(chǎn)生和分布通常有種屬、器官組織和生長發(fā)育期的特異性。其它單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)A飼養(yǎng)層培養(yǎng)基技術(shù) 將飼養(yǎng)細(xì)胞先用射線輻射處理,然后將飼養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)細(xì)胞混合植板,經(jīng)過照射的細(xì)胞對于培養(yǎng)細(xì)胞起到一個飼養(yǎng)作用。微室培養(yǎng)概念: 人工制造一個小室,將單細(xì)胞培養(yǎng)在小室中的少量培養(yǎng)基上,使其分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)的方法,稱微室培養(yǎng)。二是感光法 ,在暗室的紅光下將一印相紙放于欲計數(shù)的培養(yǎng)皿下,其上放一光源使培養(yǎng)皿中細(xì)胞團(tuán)印到相紙上,沖洗照片計數(shù)。植板率評估 :它以能長出細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞在接種單細(xì)胞中所占的比例來表示。單細(xì)胞懸浮液的制備:分離的單細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)基洗滌 2次以后,調(diào)整密度為 510 5/ml植板: 將 1份已調(diào)整好密度的單細(xì)胞懸浮液與 4份35℃ 的固體培養(yǎng)基充分混合均勻,然后均勻的平鋪與培養(yǎng)皿中,其厚度為 12mm。 單細(xì)胞的分離:一般采用酶分離法,小細(xì)胞團(tuán)不能超過 6個細(xì)胞,因此過濾時網(wǎng)篩的網(wǎng)眼要選擇合適。排除體細(xì)胞的干擾利于對細(xì)胞活動跟蹤觀察二、單細(xì)胞培養(yǎng)的方法細(xì)胞平板培養(yǎng) 概念:將制備好的單細(xì)胞懸浮液,按照一定的細(xì)胞密度,接種在 1mm左右的薄層固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),稱之為平板培養(yǎng)3. 單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)一、植物單細(xì)胞培養(yǎng)的意義建立單細(xì)胞無性系 懸浮培養(yǎng)細(xì)胞間細(xì)胞間在遺傳、生理和生化上存在差異,這些差異反映在它們的產(chǎn)量、品質(zhì)、抗病蟲性和抗逆性等方面。用于處理的細(xì)胞系最好處于對數(shù)生長期。3)有絲分裂阻抑 用秋水仙素處理指數(shù)生長的懸浮培養(yǎng)物,濃度一般控制在 %,處理時間以 46小時為宜? 無論何種細(xì)胞同步化處理,對細(xì)胞本身或多或少都有一定的傷害。2)抑制劑法 通過一些 DNA 合成抑制劑處理細(xì)胞,使細(xì)胞停留在 DNA 合成前期,當(dāng)解除抑制后,即可獲得處于同一細(xì)胞周期的細(xì)胞。 同一培養(yǎng)體系中,細(xì)胞不同步使懸浮細(xì)胞的分裂、代謝以及生理、生化狀態(tài)等更趨復(fù)雜化,所以人們一直希望通過一定的技術(shù)途徑,使同一培養(yǎng)體系中的細(xì)胞能保持相對一致的細(xì)胞學(xué)和生理學(xué)狀態(tài),工作中常用的處理方法:物理方法1)分選法 通過細(xì)胞體積大小分級,直接將處于相同周期的細(xì)胞進(jìn)行分選,然后將同一狀態(tài)的細(xì)胞繼代培養(yǎng)于同一培養(yǎng)體系中。 n n 起始愈傷組織的質(zhì)量 :松散性好、增殖快、再生能力強(qiáng)。 n 細(xì)胞生長迅速,懸浮細(xì)胞的生長量一般 2~ 3天甚至更短時間便可增加一倍。 n 均一性好,細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同。 一般用孚爾根染色法,先將組織用1molHCl在 60℃ 水解后染色,常規(guī)鏡檢,統(tǒng)計 500個細(xì)胞,計算。細(xì)胞的干重和鮮重一般以每毫升懸浮培養(yǎng)物的重量表示。D、細(xì)胞的干重和鮮重 :將一定量的細(xì)胞懸浮液加到預(yù)先稱重的尼龍布上,用水沖洗并抽濾除去細(xì)胞粘著的多余水滴,然后稱重,兩者差就是細(xì)胞的鮮重??捎?5%~8%鉻酸或 %的果膠酶對細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行處理生長速率 pP=( lnxlnX0) /tX為 t時間的細(xì)胞密度, X0為起始細(xì)胞密度B、細(xì)胞大小的測定技術(shù) (用顯微測微計)C、細(xì)胞體積 :將一定量
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