植物組織培養(yǎng)步驟-文庫吧資料
2025-07-10 22:32本頁面
【正文】 次幾乎完全相同，由于培養(yǎng)物在接近最良好的環(huán)境條件，營養(yǎng)供應和激素調控下，排除了其他生物的競爭，所以能夠按幾何級數(shù)增殖。若芽叢的芽較小。培養(yǎng)基常是MS基本培養(yǎng)基；分離芽叢適于由愈傷組織生出的芽叢。切割莖段常用于有伸長的莖梢、莖節(jié)較明顯的培養(yǎng)物。如果以2株苗為基礎，那么經10代將生成210株苗。旨在繁殖出相當數(shù)量的無根苗，最后能達到邊繁殖邊生根的目的。 (2)繼代培養(yǎng) 在初代培養(yǎng)的基礎上所獲得的芽、苗、胚狀體和原球莖等，數(shù)量都還不夠，它們需要進一步增殖，使之越來越多，從而發(fā)揮快速繁殖的優(yōu)勢。另外，%%的活性炭對防止褐變也有較為明顯的效果。 合適的培養(yǎng)條件 無機鹽成分、植物生長物質水平、適宜溫度、及時繼代培養(yǎng)均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象?？梢圆捎靡韵麓胧┓乐?、減輕褐變現(xiàn)象的發(fā)生。 d、培養(yǎng)條件不當 如果光照過強、溫度過高、培養(yǎng)時間過長等，均可使多酚氧化酶的活性提高，從而加速被培養(yǎng)的外植體的褐變程度。一般來說，幼嫩的組織在接種后褐變程度并不明顯，而老熟的組織在接種后褐變程度較為嚴重。 b、生理狀態(tài)由于外植體的生理狀態(tài)不同，所以在接種后褐變程度也有所不同。由于多酚氧化酶活性上的差異，因此，有些花卉品種的外植體在接種后較容易褐變，而有些花卉品種的外植體在接種后不容易褐變。在褐變過程中，會產生醌類物質，它們多呈棕褐色，當擴散到培養(yǎng)基后，就會抑制其他酶的活性，從而影響所接觸外植體的培養(yǎng)。 4）初代培養(yǎng)外植體的褐變 外植體褐變是指在接種后，其表面開始褐變，有時甚至會使整個培養(yǎng)基褐變的現(xiàn)象。但它是由體細胞發(fā)生的。用靠培養(yǎng)不定芽得到的培養(yǎng)物，一般采用芽叢進行繁殖，如非洲菊、草莓等。許多單子葉植物儲藏器官能強烈地發(fā)生不定芽，用百合鱗片的切塊就可大量形成不定鱗莖。許多種類的外植體表面幾乎全部為不定芽所覆蓋。 另一種方式是從器官中直接產生不定芽，有些植物具有從各個器官上長出不定芽的能力如矮牽牛、福祿考、懸鉤子等。然后，經再分化，即由這些分生組織形成器官原基，它在構成器官的縱軸上表現(xiàn)出單向的極性（這與胚狀體不同）。但特殊情況下也會生出不定芽，形成芽叢。在實際操作中，采用包括莖尖分生組織在內的一些組織來培養(yǎng)，這樣便保證了操作方便以及容易成活。 莖尖培養(yǎng)可看作是這方面較為特殊的一種方式。這種繁殖方式也稱作微型繁殖，它不經過發(fā)生愈傷組織而再生，所以是最能使無性系后代保持原品種的一種繁殖方式。然后將一部分嫩莖轉移到生根培養(yǎng)基上，就能得到可種植到土壤中去的完整小植株。根據(jù)初代培養(yǎng)時發(fā)育的方向可分為： 1）頂芽和腋芽的發(fā)育 采用外源的細胞分裂素，可促進使具有頂芽或沒有腋芽的休眠側芽啟動生長，從而形成一個微型的多枝多芽的小灌木叢狀的結構。初代培養(yǎng)時，常用誘導或分化培養(yǎng)基，即培養(yǎng)基中含有較多的細胞分裂素和少量的生長素。 培養(yǎng)步驟 ?。?）初代培養(yǎng) 初代培養(yǎng)旨在獲得無菌材料和無性繁殖系。 ?。?）液體培養(yǎng)法 即用不加固化劑的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)植物材料的方法。是現(xiàn)在最常用的方法。 四、培養(yǎng) 培養(yǎng)指把培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)室（有光照、溫度條件、無菌）里，使之生長，分裂和分化形成愈傷組織或進一步分化成再生植株的過程。接種完后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒種。若是葉片直接附在培養(yǎng)基上，以放13塊為宜。若用棉塞蓋口，可先在管口外面灼燒，去掉棉塞，再燒管口里面。 （3）用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養(yǎng)基上。微莖尖要剝成只含12片幼葉的莖尖大小等。 （2）材料吸干后，一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀，對材料進行適當?shù)那懈睢，F(xiàn)將接種前后的程序連貫地介紹。然后搽拭工作臺面； ?。?）先用酒精棉球搽拭接種工具，再將鑷子和剪刀從頭至尾過火一遍，然后反復過火尖端處，對培養(yǎng)皿要過火烤干； ?。?）接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等； ?。?）接種完畢后要清理干凈工作臺，可用紫外線燈滅菌30分鐘，若連續(xù)接種，每5天要大強度滅菌一次。除了使用前用紫外線和甲醛滅菌外，還可在使用期間用70%的酒精或3%的來蘇兒噴霧，使空氣中灰塵顆粒沉降下來。 三、接種 接種時由于有一個敞口的過程，所以是極易引起污染的時期，這一時期主要由空氣中的細菌和工作人員本身引起，接種室要嚴格進行空間消毒。 按容器大小不同，保壓時間有所不同，見表。常用方法是：關閉放氣閥，通電后，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關閉放氣閥。 注意完全排除鍋內空氣，使鍋內全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。鍋內溫度達121℃。 培養(yǎng)基用濕熱滅菌 培養(yǎng)基在制備后的24小時內完成滅菌工序。 常用的滅菌方法可分為物理的和化學的兩類，即：物理方法如干熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施；化學方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇水、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學藥品處理。 植物組織培養(yǎng)對無菌條件的
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