植物組織培養(yǎng)步驟-展示頁(yè)
2025-07-13 22:32本頁(yè)面
【正文】 要求是非常嚴(yán)格的，甚至超過(guò)微生物的培養(yǎng)要求，這是因?yàn)榕囵B(yǎng)基含有豐富的營(yíng)養(yǎng)，稍不小心就引起雜菌污染。與此相關(guān)的一個(gè)概念是消毒，它指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發(fā)生危害作用，顯然經(jīng)過(guò)消毒，許多細(xì)菌芽孢、霉菌厚垣孢子等不會(huì)完全殺死，即由于在消毒后的環(huán)境里和物品上還有活著的微生物，所以通過(guò)嚴(yán)格滅菌的操作空間（接種、超凈臺(tái)等）和使用的器皿，以及操作者的衣著和手都不帶任何活著的微生物。從以上可以看出：在地球表面無(wú)菌世界要比有菌世界小的多。在自然條件下忍耐力強(qiáng)，生活條件要求簡(jiǎn)單，繁殖力極強(qiáng)，條件適宜時(shí)便可大量滋生。菌的特點(diǎn)是：極小，肉眼看不見。依此觀點(diǎn)，無(wú)菌室等未處理的地方、超凈臺(tái)的表面、簡(jiǎn)單煮沸的培養(yǎng)基、我們使用的刀、剪在未處理之前、我們身體的整個(gè)外表及與外界相連的內(nèi)表，如整個(gè)消化道、呼吸道，即我們呼出的氣體、培養(yǎng)容器無(wú)論洗得多干凈等等都是有菌的。初學(xué)者要清楚有菌和無(wú)菌的范疇。 ?。?0）滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上令其冷卻凝固。無(wú)蓋的培養(yǎng)容器要用封口膜或牛皮紙封口，用橡皮筋或繩子扎緊。 ?。?）稱取5g左右瓊脂粉（質(zhì)量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂粉熔化。 1當(dāng)量HCL配制：。 ?。?）。 ?。?）按設(shè)計(jì)好的方案添加各種激素，由于激素的用量很小，而且激素對(duì)組培植物的生長(zhǎng)至關(guān)重要。 ?。?）一般稱取30g蔗糖倒入，攪拌溶解。 配制培養(yǎng)基 以配置1L MS培養(yǎng)基為例，按順序進(jìn)行如下操作： ?。?）先在燒杯中放入一些蒸餾水。 激素母液的配制 各種生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素要單獨(dú)配制，不能混合在一起，生長(zhǎng)素類一般要先用少量95%的酒精或1當(dāng)量的NaOH溶解，細(xì)胞分裂素一般要先用1當(dāng)量的鹽酸溶解，然后再加蒸餾水定容。7H2O 配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。 ?。?）配制MS鐵鹽母液 一般配制成100倍MS鐵鹽母液。 （3）配制MS有機(jī)母液 一般配制成100倍MS有機(jī)母液。5H2O CoCl26H2O 由于稱取量很小，如果天平精確度沒有達(dá)到萬(wàn)分之一，可先配成調(diào)整液。 CuSO46H2O ZnSO45H2O MnSO4 依次稱取 KI Na2MoO4倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。2H2O 44g MgSO4 配制幾種母液 ?。?）配制MS大量元素母液 一般將大量元素分別配制成100倍的母液，使用時(shí)再分別稀釋100倍。就目前國(guó)內(nèi)的情況看，大部分還是自己配制。組織培養(yǎng)的步驟一、培養(yǎng)基配制 配制培養(yǎng)基有兩種方法可以選擇，一是購(gòu)買培養(yǎng)基中所有化學(xué)藥品，按照需要自己配制；二是購(gòu)買商品的混合好的培養(yǎng)基基本成分粉劑，如MS、B5等。植物組織培養(yǎng)概念（廣義）又叫離體培養(yǎng)，原生質(zhì)體等，通過(guò)無(wú)菌操作，在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。 植物組織培養(yǎng)概念（狹義）指用植物各部分組織，也指在培養(yǎng)過(guò)程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過(guò)再分化形成再生植物。 自己配制可以節(jié)約費(fèi)用，但浪費(fèi)時(shí)間、人力、且有時(shí)由于藥品的質(zhì)量問(wèn)題，給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)麻煩。為了方便起見，現(xiàn)以MS培養(yǎng)基為例介紹配置培養(yǎng)基的主要過(guò)程。 分別稱取 NH4NO3 165g KH2PO4 17g KNO3 190g CaCl27H2O 37g 各自配成1L的母液。 ?。?）配制MS微量元素母液 一般將微量元素配制成100倍母液。2H2O H3BO3 CuSO4H2O CoCl27H2O 配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。5H2O和CoCl2 分別稱取 CuSO46H2O 各自配成100ml的調(diào)整液。 依次稱取 肌醇 10g 鹽酸硫胺素（VB1） 煙酸 甘氨酸 鹽酸吡哆醇（VB6） 配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。 依次稱取 EDTA二鈉 FeSO4 所以MS母液有5種大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有機(jī)母液和MS鐵鹽母液，共8種母液。一般取100mg配成100ml母液。 ?。?）分別取上面八種母液10ml倒入。 （4）加蒸餾水用量筒定溶至1L。所以有條件的話最好用微量可調(diào)移液器吸取，減少誤差。（有條件的話使用酸度計(jì)，比較精確） 可配1當(dāng)量的HCL和1當(dāng)量的NaOH用來(lái)調(diào)溶液PH值。 1當(dāng)量NaOH配制：稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。 ?。?）稍微冷卻后，分裝入培養(yǎng)容器中。 ?。?）放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右。 二、滅菌 滅菌是組織培養(yǎng)重要的工作之一。有菌的范疇是：凡是暴露在空氣中的物體，接觸自然水源的物體，至少它的表面都是有菌的。 這里所指的菌，包括細(xì)菌、真菌、放線菌、藻類及
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