植物組織培養(yǎng)步驟-在線瀏覽
2024-08-14 22:32本頁面
【正文】 其他微生物。無處不在，無時(shí)不有，無孔不入。 無菌的范疇是：經(jīng)高溫灼燒或一定時(shí)間蒸煮過后的物體，經(jīng)其他物理或化學(xué)的滅菌方法處理后的物體（當(dāng)然這些方法必須已經(jīng)證明是有效的），高層大氣、巖石內(nèi)部、健康的動、植物的不與外部接觸的組織內(nèi)部，強(qiáng)酸強(qiáng)堿，化學(xué)元素滅菌劑等表面和內(nèi)部都是無菌的。 滅菌是指用物理或化學(xué)的方法，殺死物體表面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質(zhì)全部殺死。在這樣的條件下進(jìn)行的操作，就叫做無菌操作。要達(dá)到徹底滅菌的目的，必須根據(jù)不同的對象采取不同的切實(shí)有效的方法滅菌，才能保證培養(yǎng)時(shí)不受雜菌的影響，使試管苗能正常生長。這些方法和藥劑要根據(jù)工作中的不同材料不同目的適當(dāng)選用。高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。 關(guān)閥再通電后，開始計(jì)時(shí)，20分鐘。該表所列數(shù)字是徹底滅菌很保險(xiǎn)的數(shù)字，如果容器體積較大，但是放置的數(shù)量很少，也可以減少時(shí)間。接種室內(nèi)保持定期用1%3%的高錳酸鉀溶液對設(shè)備、墻壁、地板等進(jìn)行搽洗。無菌操作可按以下步驟進(jìn)行： ?。?）在接種4小時(shí)前用甲醛熏蒸接種室，并打開其內(nèi)紫外線燈進(jìn)行殺菌； ?。?）在接種前20分鐘，打開超凈工作臺的風(fēng)機(jī)以及臺上的紫外線燈； ?。?）接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實(shí)驗(yàn)服，并換穿拖鞋等； （4）上工作臺后，用酒精棉球搽拭雙手，特別是指甲處。 接種是將已消毒好的根、莖、葉等離體器官，經(jīng)切割或剪裁成小段或小塊，放入培養(yǎng)基的過程。 無菌接種步驟： ?。?）將初步洗滌及切割的材料放入燒杯，帶入超凈臺上，用消毒劑滅菌，再用無菌水沖洗，最后瀝去水分，取出放置在滅過菌的紗布上或?yàn)V紙上。；莖切成含有一個(gè)節(jié)的小段。在接種過程中要經(jīng)常灼燒接種器械，防止交叉污染。具體操作過程（以試管為例）是：先解開包口紙，將試管幾乎水平拿著，使試管口靠近酒精燈火焰，并將管口在火焰上方轉(zhuǎn)動，使管口里外灼燒數(shù)秒鐘。然后用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內(nèi)，輕輕插入培養(yǎng)基上。至于材料放置方法除莖尖、莖段要正放（尖端向上）外，其他尚無統(tǒng)一要求。并用棉塞，塞好后，包上包口紙，包口紙里面也要過火。 培養(yǎng)方法 （1）固體培養(yǎng)法 即用瓊脂固化培養(yǎng)基來培養(yǎng)植物材料的方法。雖然該方法設(shè)備簡單，易行，但養(yǎng)分分布不均，生長速度不均衡，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。由于液體中氧氣含量較少，所以通常需要通過攪動或振動培養(yǎng)液的方法以確保氧氣的供給，采用往復(fù)式搖床或旋轉(zhuǎn)式搖床進(jìn)行培養(yǎng)，其速度一般為50100r/min，這種定期浸沒的方法，既能使培養(yǎng)基均一，又能保證氧氣的供給。即接種某些外植體后，最初的幾代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)建立的無性繁殖系包括：莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。在幾個(gè)月內(nèi)可以將這種叢生苗的一個(gè)枝條轉(zhuǎn)接繼代，重復(fù)芽苗增殖的培養(yǎng)，并且迅速獲得多數(shù)的嫩莖。一些木本植物和少數(shù)草本植物也可以通過這種方式來進(jìn)行再生繁殖，如月季、茶花、菊花、香石竹等等。 適宜這種再生繁殖的植物，在采樣時(shí)，只能采用頂芽、側(cè)芽或帶有芽的莖切段，其他如種子萌發(fā)后取枝條也可以。它采用極其幼嫩的頂芽的莖尖分生組織作為外植體進(jìn)行接種。 用靠培養(yǎng)定芽得到的培養(yǎng)物一般是莖節(jié)較長，有直立向上的莖梢，擴(kuò)繁時(shí)主要用切割莖段法，如香石竹、矮牽牛、菊花等。 2）不定芽的發(fā)育 在培養(yǎng)中由外植體產(chǎn)生不定芽，通常首先要經(jīng)脫分化過程，形成愈傷組織的細(xì)胞。多數(shù)情況下它形成芽，后形成根。當(dāng)在試管培養(yǎng)的條件下，培養(yǎng)基中提供了營養(yǎng)，特別是提供了連續(xù)不斷植物激素的供應(yīng)，使植物形成不定芽的能力被大大地激發(fā)起來。在許多常規(guī)方法中不能無性繁殖的種類，在試管條件下卻能較容易地產(chǎn)生不定芽而再生，如柏科，松科，銀杏等一些植物。 在不定芽培養(yǎng)時(shí)，也常用誘導(dǎo)或分化培養(yǎng)基。 3）體細(xì)胞胚狀體的發(fā)生與發(fā)育 體細(xì)胞胚狀體類似于合子胚但又有所不同，它也通過球形，心形，魚雷形和子葉形的胚胎發(fā)育時(shí)期，最終發(fā)育成小苗。胚狀體可以從愈傷組織表面產(chǎn)生，也可從外植體表面已分化的細(xì)胞中產(chǎn)生，或從懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中產(chǎn)生。它的出現(xiàn)是由于植物組織中的多酚氧化酶被激活，而使細(xì)胞的代謝發(fā)生變化所致。 褐變的主要原因如下： a、植物品種 研究表明，在不同品種間的褐變現(xiàn)象是不同的。因此，在培養(yǎng)過程中應(yīng)該有所選擇，對不同的品種分別進(jìn)行處理。一般說來，處于幼齡期的植物材料褐變程度較淺，而從已經(jīng)成年的植株采收的外植體，由于含醌類物質(zhì)較多，因此褐變較為嚴(yán)重。 c、培養(yǎng)基成分 濃度過高的無機(jī)鹽會使某些觀賞植物的褐變程度增加，此外，細(xì)胞分裂素的水平過高也會刺激某些外植體的多酚氧化酶的活性，從而使褐變現(xiàn)象加深。 為了提高組織培養(yǎng)的成苗率，必須對外植體的褐變現(xiàn)象加以控制。 選擇合適的外植體 一般來說，最好選擇生長處于旺盛的外植體，這樣可以使褐變
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