植物組織培養(yǎng)六-在線瀏覽
2025-02-17 05:05本頁面
【正文】 重。E、有絲分裂指數(shù) 在一個(gè)細(xì)胞群體中，處于有絲分裂的細(xì)胞占總細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)稱為 有絲分裂指數(shù) ，指數(shù)越高，分裂進(jìn)行的速度越快。一個(gè)成功的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系必須滿足三個(gè)條件： n 懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細(xì)胞團(tuán)較小，一般在 30～ 50個(gè)細(xì)胞以下，在實(shí)際培養(yǎng)中很少有完全由單細(xì)胞組成的植物細(xì)胞懸浮系。懸浮系外觀為大小均一的小顆粒，培養(yǎng)基清澈透亮，細(xì)胞色澤呈鮮艷的乳白或淡黃色。 影響懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)的因素 ： n 其外觀一般是色澤呈鮮艷的乳白或淡黃色，呈細(xì)小顆粒狀，疏松易碎。接種細(xì)胞密度 ：接種初期的細(xì)胞密度過低往往使延遲期加長(zhǎng)，懸浮細(xì)胞的起始密度一般在 ～10 5個(gè)細(xì)胞 /毫升，低于這一密度則會(huì)使細(xì)胞生長(zhǎng)延遲。培養(yǎng)條件：方式、溫度、繼代周期 n 四、懸浮細(xì)胞的同步化細(xì)胞同步化是指同一懸浮培養(yǎng)體系的所有細(xì)胞都同時(shí)通過細(xì)胞周期的某一特定時(shí)期。懸浮液 47μm 膜過濾 濾液 31 μm 膜過濾 收集加入到 10%~18%的 Ficoll 加入等體積的培養(yǎng)基 網(wǎng)上細(xì)胞180g離心 5min 收集各細(xì)胞層的細(xì)胞 用培養(yǎng)基洗滌 分別接種2）冷處理法 ：低溫處理可以提高培養(yǎng)體系中細(xì)胞同步化的程度化學(xué)方法1）饑餓法懸浮培養(yǎng)細(xì)胞中，若斷絕供應(yīng)一種細(xì)胞分裂所必需的營(yíng)養(yǎng)成分或激素，使細(xì)胞停滯在 G1或 G2期，經(jīng)過一段時(shí)間的饑餓之后，當(dāng)在培養(yǎng)基中重新加入這種限制因子時(shí)，靜止細(xì)胞就會(huì)同步進(jìn)入分裂。 常用的抑制劑有 5氟脫氧尿苷， 5氨基尿嘧啶、羥基尿等。如果處理的細(xì)胞沒有足夠的生活力，不僅不能獲得理想的同步化效果，還可能造成細(xì)胞的大量死亡，因此在進(jìn)行同步化處理之前， 細(xì)胞必須進(jìn)行充分的活化培養(yǎng)。 167。如果能將高抗、高產(chǎn)、高品質(zhì)的細(xì)胞株篩選出來，無疑會(huì)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)效益。主要技術(shù)要點(diǎn) ：待植板后的培養(yǎng)基完全凝固后，用石蠟或 parafilm封口膜將培養(yǎng)皿封嚴(yán)以防污染在 25℃ 黑暗條件下培養(yǎng) 3周即可長(zhǎng)出肉眼可見的愈傷組織。 植板率 (％ )＝ (形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù) /接種的細(xì)胞數(shù))100 ％計(jì)算式中每個(gè)平板新形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù)的計(jì)數(shù)方法有兩種：一是直接計(jì)數(shù)法 ，注意計(jì)量時(shí)要掌握合適的時(shí)間，即細(xì)胞團(tuán)肉眼已能分辨，但尚未長(zhǎng)合到一起的時(shí)候。看護(hù)培養(yǎng)概念 ：用一塊愈傷組織或植物離體組織看護(hù)單細(xì)胞使其生長(zhǎng)增殖的一種單細(xì)胞培養(yǎng)方法。特點(diǎn)：（ 1）能在顯微鏡下追蹤單細(xì)胞分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)的全過程（ 2）培養(yǎng)基少，營(yíng)養(yǎng)和水分難以保持， pH值變動(dòng)幅度大，培養(yǎng)細(xì)胞僅能短期分裂。B雙層濾紙植板培養(yǎng)方法培養(yǎng)基飼養(yǎng)層細(xì)胞看護(hù)濾紙層轉(zhuǎn)移碟濾紙 培養(yǎng)細(xì)胞167。 次生產(chǎn)物在植物中的合成與分解過程稱為次生代謝。? A、有特殊的類似發(fā)酵工業(yè)反應(yīng)器的生產(chǎn)系統(tǒng)和回收工藝。? C、有較穩(wěn)定的產(chǎn)品的質(zhì)量和數(shù)量，可節(jié)省耕地，也可看作是一個(gè) “ 農(nóng)作物 ” 的儲(chǔ)存庫。 n 其藥物的有效成分均為次生產(chǎn)物。 產(chǎn)品成分 用途 年銷售額（億美元）長(zhǎng)春花堿（長(zhǎng)春花） 治療白血病 18～ 20（美國(guó)）阿嗎靈 循環(huán)系統(tǒng)障礙藥 5～ 25（全世界）奎寧（金雞納樹） 治療瘧疾 5～ 10（美國(guó)）致熱素 殺蟲劑 20（全世界）毛地黃 心臟病藥 20～ 55（美國(guó)） 許多植物次生代謝產(chǎn)物是優(yōu)良的食品添加劑和名貴化妝品原料。例如：從胡蘿卜、萬壽菊提取色素從黃菊提取芳香油梔子提取果酸 ：果酸含有大量的維生素，如維生素 C、檸檬酸等。 3．規(guī)?；?xì)胞培養(yǎng)是生產(chǎn)植物次生產(chǎn)物的理想途徑 發(fā)展新型生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)方式 生產(chǎn)周期 紫草寧含量（％ 干重） 完整植株 2～ 3年 1～ 2 植物細(xì)胞培養(yǎng) 3周 14 來自于植物體和細(xì)胞培養(yǎng)的紫草寧含量比較 植物細(xì)胞培養(yǎng)的特性1）植物細(xì)胞較微生物細(xì)胞大得多，有纖維素細(xì)胞壁．細(xì)胞耐拉不耐扭，抵抗剪切力差；2）培養(yǎng)過程生長(zhǎng)速度緩慢，易受微生物污染，需用抗生素；3）細(xì)胞生長(zhǎng)的中期及對(duì)數(shù)期．易凝聚為直徑達(dá) 350mm一 400mm的團(tuán)塊，懸浮培養(yǎng)較難；4)培養(yǎng)時(shí)需供氧，培養(yǎng)液粘度大：? 5)具有群體效應(yīng)；6)因?yàn)橛屑?xì)胞壁 , 培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物滯留于細(xì)胞內(nèi)，產(chǎn)量較低；7)細(xì)胞培養(yǎng)過程具有結(jié)構(gòu)與功能全能性 ,因而易分化 ,從而導(dǎo)致目的產(chǎn)物低于原植物體內(nèi)的濃度；8)懸浮培養(yǎng)中要求有一定的細(xì)胞濃度，否則不生長(zhǎng)（ 25000~50000個(gè) /ml）。機(jī)械攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) n 機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器通常是根據(jù)植物細(xì)胞的特性在微生物發(fā)酵罐的基礎(chǔ)上作如下改進(jìn)： n 攪拌裝置要減少剪切 ，一般改葉輪式為螺旋式。機(jī)械攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) 旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)系統(tǒng)一般用于產(chǎn)品中試或某些必需裂解細(xì)胞才能獲得目的產(chǎn)物的培養(yǎng)，其優(yōu)點(diǎn)是控制精確，處理靈活，缺點(diǎn)是培養(yǎng)體積較小。? 平床培養(yǎng)系統(tǒng) 。新鮮的細(xì)胞被固定在床底部由聚屏烯等材料編織成的無菌平墊上。培養(yǎng)床上的營(yíng)養(yǎng)液再通過動(dòng)泵循環(huán)送回中，本系統(tǒng)設(shè)備較簡(jiǎn)單，比懸浮培養(yǎng)體系能更有效地合成次生物質(zhì)。（ 2）立柱培養(yǎng)系統(tǒng)本方法將植物細(xì)胞與瓊脂或褐藻酸鈉混合，制成一個(gè)個(gè) 12 cm3的細(xì)胞團(tuán)塊，并將它們集中于無菌立柱中。 這一技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于： 由于細(xì)胞固定在支持物上，培養(yǎng)基可以不斷更換，可以從培養(yǎng)基中提取產(chǎn)物，免除了培養(yǎng)基中因含有過多的初生產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞代謝的反饋抑制，也由于細(xì)胞留在反應(yīng)器中，新的培養(yǎng)基可以再次利用這些細(xì)胞生產(chǎn)初生產(chǎn)物，從而節(jié)省了生產(chǎn)細(xì)胞所付出的時(shí)間和費(fèi)用；可以較容易地控制培養(yǎng)系統(tǒng)的理化環(huán)境，從而可以研究特定的 代謝途徑，并便于調(diào)節(jié)；? 植物細(xì)胞固定化培養(yǎng)時(shí)必
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