植物組織培養(yǎng)步驟-閱讀頁(yè)
2025-07-19 22:32本頁(yè)面
【正文】 現(xiàn)象明顯減輕。 使用抗氧化劑 在培養(yǎng)基中，使用半胱氨酸、抗壞血酸等抗氧化劑能夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。 連續(xù)轉(zhuǎn)移 對(duì)容易褐變的材料可間隔224小時(shí)的培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，這樣經(jīng)過(guò)連續(xù)處理710天后，褐變現(xiàn)象便會(huì)得到控制或大為減輕。 繼代培養(yǎng)是繼初代培養(yǎng)之后的連續(xù)數(shù)代的擴(kuò)繁殖培養(yǎng)過(guò)程。繼代培養(yǎng)的后代是按幾何級(jí)數(shù)增加的過(guò)程。 繼代培養(yǎng)中擴(kuò)繁的方法包括：切割莖段、分離芽叢、分離胚狀體、分離原球莖等。這種方法簡(jiǎn)便易行，能保持母種特性。培養(yǎng)基常是分化培養(yǎng)基。可先切成芽叢小塊，放入MS培養(yǎng)基中，待到稍大時(shí)，再分離開(kāi)來(lái)繼續(xù)培養(yǎng)。 在快速繁殖中初代培養(yǎng)只是一個(gè)必經(jīng)的過(guò)程，而繼代培養(yǎng)則是經(jīng)常性不停的進(jìn)行過(guò)程。從某種意義上講，增殖只是儲(chǔ)備母株，而生根才是增殖材料的分流，生產(chǎn)出成品。它的出現(xiàn)會(huì)使試管苗生長(zhǎng)緩慢、繁殖系數(shù)有所下降。 因?yàn)槌霈F(xiàn)玻璃化的嫩莖不宜誘導(dǎo)生根，因此，使繁殖系數(shù)大為降低。當(dāng)培養(yǎng)基上細(xì)胞分裂素水平較高時(shí)，也容易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。 呈現(xiàn)玻璃化的試管苗，其莖、葉表面無(wú)蠟質(zhì)，體內(nèi)的極性化合物水平較高，細(xì)胞持水力差，植株蒸騰作用強(qiáng)，無(wú)法進(jìn)行正常移栽。 生根培養(yǎng) 當(dāng)材料增殖到一定數(shù)量后，就要使部分培養(yǎng)物分流到生根培養(yǎng)階段。根培養(yǎng)是使無(wú)根苗生根的過(guò)程，這個(gè)過(guò)程目的是使生出的不定根濃密而粗壯。 誘導(dǎo)生根可以采用下列方法 a、將新梢基部浸入50或100*106IBA溶液中處理48小時(shí)； b、在含有生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)46天 c、直接移入含有生長(zhǎng)素的生根培養(yǎng)基中。而第三種對(duì)幼根的生長(zhǎng)有抑制作用。不過(guò)這種方法比較可行。延長(zhǎng)在增殖培養(yǎng)基中的培養(yǎng)時(shí)間；有意降低一些增殖倍率，減少細(xì)胞分裂素的用量（即將增殖與生根合并為一步）；切割粗壯的嫩枝在營(yíng)養(yǎng)缽中直接生根，此方法則沒(méi)有生根階段。 另外少數(shù)植物生根比較困難時(shí)，則需要在培養(yǎng)基中放置濾紙橋，使其略高于液面，靠濾紙的吸水性供應(yīng)水和營(yíng)養(yǎng)，從而誘發(fā)生根。但因經(jīng)胚狀體發(fā)育的苗數(shù)特別多，并且個(gè)體較小，所以也常需要一個(gè)低濃度或沒(méi)有植物激素的培養(yǎng)基培養(yǎng)的階段，以便壯苗生根。通常不同植物的適宜馴化溫度不同。實(shí)踐證明植物生長(zhǎng)的溫度過(guò)高不但會(huì)牽涉到蒸騰加強(qiáng)。溫度過(guò)低使幼苗生長(zhǎng)遲緩，或不易成活。移植到試管外的植物苗光強(qiáng)度應(yīng)比移植前培養(yǎng)有所提高，并可適應(yīng)強(qiáng)度較高的漫射光，（約4000lx左右），以維持光合作用所需光照強(qiáng)度。 五、馴化移栽 試管苗移栽是組織培養(yǎng)過(guò)程的重要環(huán)節(jié)，這個(gè)工作環(huán)節(jié)做不好，就會(huì)造成前功盡棄。 試管苗由于是在無(wú)菌、有營(yíng)養(yǎng)供給、適宜光照和溫度近100%的相對(duì)濕度環(huán)境條件下生長(zhǎng)的，因此，在生理、形態(tài)等方面都與自然條件生長(zhǎng)的小苗有著很大的差異。 從葉片上看，試管苗的角質(zhì)層不發(fā)達(dá)，葉片通常沒(méi)有表皮毛，或僅有較少表皮毛，甚至葉片上出現(xiàn)了大量的水孔，而且，氣孔的數(shù)量、大小也往往超過(guò)普通苗。因此，為了改善試管苗的上述不良生理、形態(tài)特點(diǎn)，則必須經(jīng)過(guò)與外界相適應(yīng)的馴化處理，通常采取的措施有：對(duì)外界要增加濕度、減弱光照；對(duì)試管內(nèi)要通透氣體、增施二氧化碳肥料、逐步降低空氣濕度等。為了提高其成活率，在培養(yǎng)基質(zhì)中可摻入75%的百菌清可濕性粉劑200500倍液，以進(jìn)行滅菌處理。為了增加粘著力和一定的肥力可配合草炭土或腐殖土。也可用砂子：草炭土或腐殖土為1：1。或用至少小時(shí)烘烤來(lái)消滅其中的微生物。以下介紹幾種常見(jiàn)的試管苗栽培基質(zhì)。粗砂即平常所說(shuō)的河砂，其顆粒直徑為12mm。河砂的特點(diǎn)是排水性強(qiáng)，但保水蓄肥能力較差，一般不單獨(dú)用來(lái)直接栽種試管苗。 ?。?）腐殖土 腐殖土是由植物落葉經(jīng)腐爛所形成。腐葉上含有大量的礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)、有機(jī)物質(zhì)，它通常不能單獨(dú)使用。 （4）容器 栽培容器可用6*6cm10*10cm的軟塑料缽，也可用育苗盤。 移栽前的準(zhǔn)備 移栽前可將培養(yǎng)物不開(kāi)口移到自然光照下鍛煉23天，讓試管苗接受強(qiáng)光的照射，使其長(zhǎng)得壯實(shí)起來(lái)，然后再開(kāi)口練苗12天，經(jīng)受較低濕度的處理，以適應(yīng)將來(lái)自然濕度的條件。但要輕輕除去，應(yīng)避免造成傷根。栽后輕澆薄水。保證空氣濕度達(dá)90%以上。在移栽后57天內(nèi)，應(yīng)給予較高的空氣濕度條件，使葉面的水分蒸發(fā)減少，盡量接近培養(yǎng)瓶的條件，讓小苗始終保持挺拔的狀態(tài)。當(dāng)57天后，發(fā)現(xiàn)小苗有生長(zhǎng)趨勢(shì)，可逐漸降低濕度，減少噴水次數(shù)，將拱棚兩端打開(kāi)通風(fēng)，使小苗適應(yīng)濕度較小的條件。 ?。?）防止菌類滋生。所以應(yīng)對(duì)基質(zhì)進(jìn)行高壓滅菌或鴻烤滅菌。在移苗時(shí)盡量少傷苗，傷口過(guò)多，根損傷過(guò)多，都是造成死苗的原因。 ?。?）一定的溫、光條件。溫度過(guò)低會(huì)使幼苗生長(zhǎng)遲緩，或不易成活。 另外在光照管理的初期可用較弱的光照，如在小拱棚上加蓋遮陽(yáng)網(wǎng)或報(bào)紙等，以防陽(yáng)光灼傷小苗和增加水分的蒸發(fā)。促進(jìn)光合產(chǎn)物的積累，增強(qiáng)抗性，促其成活。 要選擇適當(dāng)?shù)念w粒狀基質(zhì)，保證良好的通氣作用。 綜上所述，試管苗在移栽的過(guò)程中，只要把水分平衡、適宜的介質(zhì)、控制雜菌和適宜的光、溫條件控制好，試管苗是很容易
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