植物組織培養(yǎng)實驗-閱讀頁
2025-08-03 20:27本頁面
【正文】 持續(xù)滅菌時間內(nèi)定時用玻璃棒輕輕 攪動 ，以促進(jìn)植物材料各部分與消毒液充分接觸，驅(qū)除氣泡，使滅菌徹底。接著立即倒入適量無菌水，輕攪植物材料以清洗去除滅菌劑殘留。無菌水的清洗時間每次約 3 min；清洗 5次 。 逐一取出經(jīng)上述滅菌處理的植物材料，置于下面墊有經(jīng)滅菌處理的培養(yǎng)皿（或小白瓷碟）的無菌紗布或濾紙上，左手拿小鑷子，右手拿解剖刀，切除各切段或切塊上被滅菌劑毒壞的部分。在完成切割后，將解剖刀和 小鑷子在 95%乙醇中浸蘸一下 ，在酒精燈焰上灼燒滅菌之后放回原處，以便待 冷卻 后下一切割再用。 （ 九 ） 在完成了該第一只培養(yǎng)容器的外植體接種操作后 ， 用 70%乙醇對超凈工作臺的臺面進(jìn)行 擦拭滅菌 ，接著再進(jìn)行第二只培養(yǎng)容器的外植體接種及超凈臺臺面的滅菌 ， 直至全部完成 。 實驗四 枝芽增殖培養(yǎng)基的 設(shè)計與配制 一、實驗?zāi)康模? 學(xué)習(xí)、掌握枝芽增殖培養(yǎng)基的設(shè)計、配制方法。 （ 二 ） 分別加入一定量的 MS培養(yǎng)基貯備液 I、 II、 III和 IV及 NAA mg， 然后 1~5各小組再分別加入各自不同量的 BA（ ； ； ； 1及 mg） 。 定容至 500 mL。 擰緊瓶蓋 。 滅菌結(jié)束后從高壓滅菌器中取出 ， 置于平臺上冷卻 ， 備用 。 二、方法步驟： ? （ 一 ） 將經(jīng) 濕熱滅菌 裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器 、 接種用具等置于超凈臺上 ， 打開超凈臺的 紫外 燈 ， 滅菌處理 30 min。 ? （ 三 ） 點燃 酒精燈 ， 從裝有無菌苗的培養(yǎng)瓶中取出無菌苗 ， 置于無菌的培養(yǎng)皿中的無菌濾紙上 ， 用滅過菌的刀和鑷子配合操作 ， 從葉柄處切下 ， 將所有葉片去除 ， 只留下近莖部的一小段葉柄 。 ? (五 ） 打開培養(yǎng)容器蓋子 ， 將莖段按其自然極性方向垂直插入培養(yǎng)基 ， 蓋好培養(yǎng)容器蓋子 ， 置于超凈臺上適當(dāng)位置 。 如此操作 ， 直至完成 。 實驗六 根再生誘導(dǎo)培養(yǎng)基的 設(shè)計與配制 一、實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)、掌握 根再生誘導(dǎo)培養(yǎng)基 的設(shè)計、配制方法。 ? （ 二 ） 分別加入一定量的 MS培養(yǎng)基貯備液 I、 II、 III和 IV， 然后 1~5各小組再分別加入各自不同量的 NAA（ ； ； ；1及 mg） 。 補(bǔ)加蒸餾水至培養(yǎng)基的終體積 500 mL。 ? （ 五 ） 將滅過菌的裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器從高壓滅菌器中取出 ，置于平臺上冷卻 ，
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