細(xì)胞培養(yǎng)基本知識ppt課件-文庫吧資料
2025-05-09 03:39本頁面
【正文】 方厘米，三角斜頸 ? 75平方厘米，正方斜頸 ? 75平方厘米，三角斜頸 ? 150平方厘米，正方斜頸 ? 細(xì)胞培養(yǎng)板 ? 6孔， ? 12孔， ? 24孔， ? 48孔 ? 96孔 ? 細(xì)胞培養(yǎng)皿 ? 35mm ? 60mm ? 100mm ? 凍存管 ? ? 2ml， ? 5ml ? 離心管 ? 15ml ? 50ml ? 細(xì)胞刮器 濾 器 大多數(shù)培養(yǎng)用液，如人工合成培養(yǎng)基、血清、酶液等均采用濾過法除菌。 細(xì)胞數(shù) /ml＝ 4大格細(xì)胞總數(shù) / 4 104 注意 ：壓線細(xì)胞只計(jì) 左側(cè) 和 上方 的。 ? 靜置 3分鐘。 細(xì)胞傳代方法 首次傳代注意事項(xiàng) ? 細(xì)胞生長密度不高時(shí)，不能急于傳代 ? 原代培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞需控制消化時(shí)間 ? 吹打已消化的細(xì)胞應(yīng)減少機(jī)械損傷 ? 首次傳代時(shí)細(xì)胞接種數(shù)量要多一些 ? 首次傳代培養(yǎng)的 pH應(yīng)偏低些 ? 小牛血清濃度可加大至 15%～ 20%左右 細(xì)胞計(jì)數(shù) ? 計(jì)數(shù)結(jié)果以每毫升細(xì)胞數(shù)表示 ? 細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法與血細(xì)胞計(jì)數(shù)相同 ? 血細(xì)胞計(jì)數(shù)器：手工計(jì)數(shù)細(xì)胞 ? Coulter計(jì)數(shù)儀：人工計(jì)數(shù) 細(xì)胞計(jì)數(shù)步驟 ? 將血球計(jì)數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。 3．貼壁生長細(xì)胞傳代 采用酶消化法傳代。 ? 停止期（平臺(tái)期） 細(xì)胞長滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂 機(jī)制：接觸抑制、密度依賴性 根據(jù)細(xì)胞生長的恃點(diǎn)，傳代方法有 3種： 1．懸浮生長細(xì)胞傳代 離心法傳代：離心（ 1000轉(zhuǎn) /分 ）去上清，沉淀物加新 培養(yǎng)液后再混勻傳代。 細(xì)胞株潛伏期一般為 6～ 24小時(shí)。 ? 吸附期 貼附底物，一般 24小時(shí)內(nèi)貼壁。 K562細(xì)胞 ： K562（人慢性紅白血病細(xì)胞株）； ：傳代后 2天； ：倒置顯微鏡 X10； ： RPMI1640+10%胎牛血清， 4mM Glutamine； ：懸浮生長，少數(shù)貼壁，喜愛成團(tuán)懸浮。 KU8
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