【正文】 種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。以接種針挑取細(xì)菌培養(yǎng)物，插入半固體培養(yǎng)基的中央，穿刺至培養(yǎng)基底部，然后沿原穿刺線退出接種針。將接種針垂直插入半固體培養(yǎng)基的中央，穿刺至培養(yǎng)基底部，然后沿原穿刺線退出接種針。用接種針（環(huán)）伸入菌種管內(nèi)挑取移種之菌落。用左手握住菌種管和斜面培養(yǎng)管底部，右手持接種針（環(huán)）。將滅菌生理鹽水適量稀釋（通常作10－1～10－5稀釋）的標(biāo)本1ml，置于滅菌平皿內(nèi)，注入已熔化并冷卻至50℃左右的培養(yǎng)基15ml，混勻，待冷卻后，倒置。每一區(qū)域的劃線應(yīng)接觸上一區(qū)域的接種線2～3次，使菌量逐漸減少，以形成單個(gè)菌落。用接種環(huán)先將標(biāo)本涂布在平板第一區(qū)并作數(shù)次劃線，再在二、三……區(qū)依次用接種環(huán)劃線。3. 職責(zé)微生物檢驗(yàn)人員嚴(yán)格執(zhí)行本程序。參考文獻(xiàn)1 周庭銀編著，臨床微生物學(xué)診斷與圖解（第二版）.上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,20072 葉應(yīng)嫵，王毓三，：東南大學(xué)出版社，2006 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：標(biāo)本接種標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：標(biāo)本接種標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的 規(guī)范標(biāo)本接種標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 糞便或肛拭標(biāo)本接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記，取糞便膿血部位標(biāo)本根據(jù)檢驗(yàn)申請(qǐng)單要求選擇平板，立即接種。接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記，置孵育箱培養(yǎng)。 3 同時(shí)做痰涂片鏡檢 咽拭子標(biāo)本 涂布于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、麥康凱平板的第一區(qū)，然后用接種環(huán)劃第二、第三區(qū)...。 痰標(biāo)本、登記后的痰標(biāo)本，加入痰消化劑或無(wú)菌生理鹽水處理。門診病人要同時(shí)登記住址、聯(lián)系電話等信息。 三級(jí)報(bào)告 報(bào)告細(xì)菌種屬、藥敏實(shí)驗(yàn)、結(jié)果評(píng)價(jià)和建議。4. 程序 一級(jí)報(bào)告 陽(yáng)性報(bào)警血培養(yǎng)瓶應(yīng)進(jìn)行涂片革蘭染色，將涂片結(jié)果電話（或其他方式）通知臨床。2. 范圍 血液、骨髓標(biāo)本。失控者必須記錄失控情況并有相應(yīng)的糾正措施。培養(yǎng)2448小時(shí)。 生長(zhǎng)試驗(yàn)及生化反應(yīng)試驗(yàn) 質(zhì)控菌株（表22，23）35`C培養(yǎng)24小時(shí)。 無(wú)菌試驗(yàn) 抽檢培養(yǎng)基數(shù)量：100塊以內(nèi)，隨機(jī)抽檢5%；100塊以上可隨機(jī)取10塊平皿或10支試管培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)。 外觀檢查 合格培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)：完整、瓊脂附于平板底部，血平板應(yīng)不透明、沒(méi)有溶血情況，平板顏色好、濕潤(rùn)，無(wú)干裂、無(wú)污染、無(wú)渾濁或沉淀、無(wú)凍傷、無(wú)過(guò)熱現(xiàn)象，瓊脂厚度至少3mm。每個(gè)批號(hào)和（或）每次購(gòu)買時(shí)，應(yīng)進(jìn)行外觀檢查并記錄。培訓(xùn)試劑應(yīng)明顯標(biāo)記“僅供培訓(xùn)使用”，并與檢驗(yàn)試劑分開放置。 無(wú)廠商特別說(shuō)明時(shí)，不同批號(hào)的試劑不可混用。下列試劑每進(jìn)一批新批號(hào)或貨號(hào)要求用陰性、陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)菌株評(píng)估其質(zhì)量（表21）。已經(jīng)檢驗(yàn)的樣本應(yīng)在保證其性能穩(wěn)定的條件下，將樣本以適當(dāng)?shù)姆绞奖Ａ舻揭?guī)定時(shí)間內(nèi)，以便能在出具結(jié)果報(bào)告后可以復(fù)查，或做補(bǔ)充檢驗(yàn)。 微生物檢驗(yàn)標(biāo)本信息輸入 微生物實(shí)驗(yàn)室接種崗位檢驗(yàn)人員嚴(yán)格按照〈〈微生物標(biāo)本檢驗(yàn)信息輸入程序〉〉錄入、核對(duì)病人信息和標(biāo)本信息等資料。 樣本采集和運(yùn)輸 樣本采集人員應(yīng)按照〈〈采集前病人識(shí)別程序〉〉確認(rèn)病人，按照〈〈標(biāo)本采集、運(yùn)送程序〉〉采集樣本，并在規(guī)定的時(shí)間和溫度范圍內(nèi)，使用指定的運(yùn)輸培養(yǎng)基，安全運(yùn)送到微生物室。 生成微生物檢驗(yàn)標(biāo)本標(biāo)簽 護(hù)士應(yīng)在核對(duì)醫(yī)囑、病人信息和檢驗(yàn)申請(qǐng)信息后，按照〈〈微生物標(biāo)本檢驗(yàn)標(biāo)簽程序〉〉生成申請(qǐng)單和微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)簽，并將微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)簽正確張貼于標(biāo)本容器上。4． 程序 分析前質(zhì)量管理 檢驗(yàn)申請(qǐng)單 臨床醫(yī)生應(yīng)按照〈〈微生物檢測(cè)項(xiàng)目申請(qǐng)程序〉〉申請(qǐng)臨床微生物檢測(cè)。2． 適用范圍微生物實(shí)驗(yàn)室的所有檢驗(yàn)項(xiàng)目。 結(jié)果上報(bào)截止日期之前嚴(yán)禁將質(zhì)控標(biāo)本送至其他單位代做。 室間質(zhì)控的檢測(cè)結(jié)果和反饋結(jié)果均記錄于室間質(zhì)控記錄表，根據(jù)反饋結(jié)果分析室間質(zhì)控的狀態(tài)，如有不合格結(jié)果應(yīng)先向負(fù)責(zé)人和主任報(bào)告，然后查找原因，撰寫錯(cuò)誤評(píng)估報(bào)告，制定糾正措施并培訓(xùn)員工，避免常規(guī)工作和質(zhì)控再次發(fā)生同樣錯(cuò)誤。 室間質(zhì)控樣本必須按實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作進(jìn)行，由進(jìn)行常規(guī)工作的檢驗(yàn)人員測(cè)試，必須使用實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢測(cè)方法和試劑，不得特殊對(duì)待。實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)計(jì)劃的項(xiàng)目，應(yīng)至少每6個(gè)月進(jìn)行一次性能評(píng)估，方法包括：與參考實(shí)驗(yàn)室或其他實(shí)驗(yàn)室分割標(biāo)本檢測(cè)；與本實(shí)驗(yàn)室建立的方法分割標(biāo)本檢測(cè)；分析純物質(zhì)、地方數(shù)據(jù)庫(kù)或臨床證實(shí)資料；其他適宜的和規(guī)定的方法。3. 職責(zé) 微生物檢驗(yàn)人員均須熟知并遵守本程序。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：室間質(zhì)量控制管理程序文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：室間質(zhì)量控制管理程序1. 目的 規(guī)范室間質(zhì)量控制管理程序，確保檢驗(yàn)質(zhì)量。 檢驗(yàn)過(guò)程的質(zhì)量控制 細(xì)菌分離和鑒定 根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康倪x擇培養(yǎng)基，選擇病原菌進(jìn)行鑒定。參見《試劑管理程序》。 商品化培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格驗(yàn)收，并保存質(zhì)控合格證明文件。詳情參見《儀器管理程序》。在儀器投入使用、修理或退役之前對(duì)其去污染。 要求制定定期維護(hù)、保養(yǎng)的計(jì)劃，維持儀器的安全工作狀態(tài)。操作者應(yīng)可以方便取閱儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程以及儀器維護(hù)信息。 要求制定儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。 每件儀器具有唯一性標(biāo)識(shí)。參見《標(biāo)本接收、標(biāo)識(shí)程序》、《樣本拒收程序》。參見《結(jié)果報(bào)告程序》。參見《記錄管理程序》。參見《微生物檢測(cè)項(xiàng)目申請(qǐng)程序》。 培訓(xùn)員工熟悉和掌握操作規(guī)程的管理程序。 人員 包括學(xué)歷、職稱等要求，員工的培訓(xùn)和工作能力評(píng)估。 檢驗(yàn)人員執(zhí)行質(zhì)量管理程序。 范圍適用于微生物實(shí)驗(yàn)室的各個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目。 ，以增強(qiáng)自身抵 抗力。9． 分離出甲類或乙類傳染病菌株，應(yīng)及時(shí)上報(bào)院感科，未經(jīng)上級(jí)同意不得帶出 實(shí)驗(yàn)室，并由專人處理。7． 儀器、電器設(shè)備，要有專人保管，并做好有關(guān)的記錄；易燃物品乙醇應(yīng)妥善保管，遠(yuǎn)離火源，若出現(xiàn)著火情況，應(yīng)立即用濕布將其覆蓋。5． 實(shí)驗(yàn)室每天用紫外線進(jìn)行消毒空氣，作好記錄，并定期檢測(cè)；接種環(huán)（針）使用后應(yīng)立即在火焰燈上燒灼滅菌；沾有活菌的玻片、試管等玻璃制品應(yīng)立即消毒滅菌；檢測(cè)剩余的標(biāo)本及接觸過(guò)微生物的平板、鑒定板（條）等塑料制品均用塑料袋裝好，置黃色桶內(nèi)，統(tǒng)一滅菌處理。如傳染物污染手部，要立即用500g/L含氯消毒劑浸泡，再用肥皂水和流水沖洗干凈。2． 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室要穿工作服，工作服要放在指定的地點(diǎn)，并經(jīng)常洗滌；生活用品不能帶入實(shí)驗(yàn)室。2． 工作人員在工作過(guò)程中發(fā)生皮膚破損、化學(xué)試劑燒傷皮膚、眼睛或者病原微生物的感染等必須有做相應(yīng)的處理，上報(bào)醫(yī)務(wù)科，并做記錄。4． 禁止用手處理破損的玻璃器具，裝有污染的針、利器及破損玻璃的容器在丟棄前必須滅菌。非一次性的利器放入厚壁容器中并運(yùn)送特定區(qū)域消毒，最好高壓消毒。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：尖銳器具安全使用制度文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：尖銳器具安全使用制度1． 除特殊情況下，禁止在實(shí)驗(yàn)室使用針、注射器及其它利器，盡可能使用塑料器材代替玻璃器材。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：微生物實(shí)驗(yàn)廢棄物處理制度文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：微生物實(shí)驗(yàn)廢棄物處理制度1． 微生物實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本、玻片等大多有病原微生物必須進(jìn)行滅菌處理后丟棄。特殊標(biāo)本（如腦脊液、前列腺液、白帶等）應(yīng)立即送檢并接種。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：微生物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本采集運(yùn)輸制度文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：微生物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本采集運(yùn)輸制度1． 病原微生物的培養(yǎng)必須到微生物實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)取無(wú)菌器皿、血培養(yǎng)增菌液瓶等留取標(biāo)本。如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。、持物鉗、鑷子等的消毒液要定期更換。（細(xì)菌、支原體、真菌等培養(yǎng)物），不管標(biāo)本陽(yáng)性或陰性均用1000g/L含氯消毒劑浸泡消毒液浸泡后，經(jīng)煮沸消毒，才能清洗或丟棄。、蓋片、平皿、試管等用1000g/L含氯消毒劑浸泡消毒液浸泡，經(jīng)煮沸后清洗或丟棄。 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：微生物實(shí)驗(yàn)室消毒隔離措施制度文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：微生物實(shí)驗(yàn)室消毒隔離措施制度，上班前、下班后開紫外燈（40分鐘）進(jìn)行空氣消毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的標(biāo)本、菌株等感染物必須消毒滅菌處理。4． 各種菌種應(yīng)按規(guī)定時(shí)間接種，一般在接種三次后作一次全面的鑒定，注意菌種有無(wú)污染及變異，如發(fā)現(xiàn)變異時(shí)，應(yīng)及時(shí)更換。保管人員變動(dòng)時(shí)，必須嚴(yán)格交接手續(xù)。 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：病原微生物保存制度文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：病原微生物保存制度1． 據(jù)《病原微生物安全條例》要求實(shí)驗(yàn)室不能保存高致性病原微生物菌（毒）種。，并用肥皂和清水洗凈。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必須遠(yuǎn)離火源，妥善保存。，如污染了實(shí)驗(yàn)臺(tái)或地面，應(yīng)用3%來(lái)蘇兒覆蓋其上半小時(shí)，然后清洗；如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。，接種環(huán)用完后應(yīng)立即火焰滅菌，沾菌吸管、玻片等用后應(yīng)浸泡在消毒液內(nèi)。、編號(hào)及試驗(yàn)記錄。盡量減少室內(nèi)活動(dòng)，以免引起風(fēng)動(dòng)，無(wú)關(guān)人員禁入。，并做好實(shí)驗(yàn)前的各項(xiàng)準(zhǔn)備工作。3． 紫外線燈管每月用無(wú)水酒精擦拭；每半年由院感科對(duì)紫外線燈管進(jìn)行紫外線強(qiáng)度（消毒效果）測(cè)試，并標(biāo)明測(cè)試。 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：紫外線消毒制度文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：紫外線消毒制度1． 微生物實(shí)驗(yàn)室每天工作結(jié)束后需對(duì)環(huán)境進(jìn)進(jìn)行紫外線消毒40分鐘以上，并做好記錄。培養(yǎng)基：每周準(zhǔn)備好下一周培養(yǎng)基的用量，保證實(shí)驗(yàn)室正常進(jìn)行。藥敏紙片：常見葡萄球菌藥敏紙片定為剩支紙片時(shí)預(yù)定下一批；常見腸桿菌科藥敏紙片定剩紙片時(shí)預(yù)定下一批。 設(shè)置試劑警戒線應(yīng)當(dāng)考慮到：試劑供貨周期的長(zhǎng)短；試劑有效期長(zhǎng)短；質(zhì)控試驗(yàn)需要的時(shí)間（要保證新進(jìn)試劑一旦失控時(shí)，實(shí)驗(yàn)室仍有足夠試劑保證試驗(yàn)的正常進(jìn)行）。 培養(yǎng)基質(zhì)量控制參見《室內(nèi)質(zhì)量控制管理程序》。高壓滅菌時(shí)須貼指示帶監(jiān)測(cè)滅菌效果。 驗(yàn)收后應(yīng)記錄培養(yǎng)基總數(shù)、批號(hào)、生產(chǎn)日期、失效日期及接收人員簽名。 驗(yàn)收時(shí)應(yīng)注意培養(yǎng)基是否有標(biāo)識(shí)(包括培養(yǎng)基名稱、批號(hào)、生產(chǎn)日期、失效日期)，包裝是否完整，培養(yǎng)基是否破損、污染，外觀是否良好（良好培養(yǎng)基應(yīng)該是表面平滑，水分，顏色、厚度適宜，無(wú)污染）等。 培養(yǎng)基 成品培養(yǎng)基 由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)評(píng)估、訂購(gòu)。當(dāng)試劑存放量接近警戒線時(shí)，應(yīng)及時(shí)通知負(fù)責(zé)人訂購(gòu)下一批試劑。使用抗血清時(shí)應(yīng)注意效價(jià)、透明度與色澤，如有渾濁或沉淀表示已污染，應(yīng)立即停用。 試劑使用 使用前，工作人員應(yīng)確認(rèn)：試劑處于有效期內(nèi)、質(zhì)控合格、標(biāo)識(shí)明確、儲(chǔ)存條件正確、存放合理。冰箱應(yīng)每天記錄溫度以監(jiān)控存放條件是否符合要求。 試劑儲(chǔ)存 所有試劑應(yīng)按產(chǎn)商要求儲(chǔ)存以防損壞、降解、污染。 試劑標(biāo)識(shí) 所有試劑須有標(biāo)識(shí),并張貼于試劑醒