【正文】 腎臟排泌出來的尿液正常情況下是無菌的。 3． Barbara SR， Gall LW， Richard BThorftsoD JR， Divise HL， et al． SPecimen processing， Manual Of Clinical Microbiology(7? Editon)， ASM， Washlngton，DC， 1999， 64— 104． 4．主編：徐英春，倪語星，王金良，作者：趙銳，張小江，王輝，謝秀麗。 2． Vandepltte J， Engbaek K， Pio tP， Heuck CC 著，王登先，白念峰，史旭波等譯。 貯藏： 4℃， 30 天 質(zhì)控： 難辨羧菌 ATCCl3124：生長(zhǎng)，雙溶 血 脆弱擬桿菌 ATCC25285：生長(zhǎng) 主要參考文獻(xiàn) 1． Dunne JR， Frederick S Nolte， Michael L Wilson。 氯化血紅素 5mg 維生素 K 0． 5mg 制備方法： 加熱溶解上述成份，高壓 121℃， 15 分鐘，水浴冷卻至 50C，無菌手續(xù)加實(shí)驗(yàn)室 主 題 文件編號(hào) W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗(yàn)科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 13 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準(zhǔn) 人 生效日期 入脫纖維馬血 (或羊血 )，氯化血紅素和維生素 K。 貯藏： 4℃， 30 天 質(zhì)控： 肺炎鏈球菌 ATCC49619：生長(zhǎng)， α－溶血 化膿鏈球菌 ATCCl9615：生長(zhǎng)， β－溶血 金黃色葡萄球菌 ATCC25923：生長(zhǎng) 大腸桿菌 ATCC25922：生長(zhǎng) 2．厭氧血瓊脂培養(yǎng)基 (1000ml) 成份： 哥倫比亞瓊 脂基礎(chǔ) 39g 蒸餾水 950ml 調(diào) 177。 制備方法： 加熱溶解 上述成份，高壓 121℃， 15 分鐘，水浴冷卻至 50℃，無菌手續(xù)加入脫纖維馬血或羊血 50～ 60ml。 附二：主要培養(yǎng)基制備 1．血瓊脂培養(yǎng)基 (1000mi) 成份： 哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ) 39g 蒸餾水 950ml 177。如果懷疑真菌性心內(nèi)膜炎，應(yīng)進(jìn)行裂解一離心血培養(yǎng)。 6．心內(nèi)膜炎特殊致病菌：如果常規(guī)血培養(yǎng) 48h 陰性而臨床癥狀仍提示感染性心內(nèi)膜炎，臨床醫(yī)生和微生物學(xué)家應(yīng)考慮使用特殊的培養(yǎng)技術(shù)。然而對(duì)于非白念珠菌、光滑球擬酵母菌、新型隱球菌、莢膜組織胞漿菌和其它雙相真菌，使用裂解一離心技術(shù)可獲得最高的檢出率，通常采用霉菌抑制瓊脂 (1nhibitorymoldagar)，腦心浸液瓊脂和巧克力瓊脂與 Isolator 管結(jié)合使用。裂解一離心技術(shù)是一種分離真菌的有效方法，特別是對(duì)于營(yíng)養(yǎng)要求苛刻的雙相實(shí)驗(yàn)室 主 題 文件編號(hào) W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗(yàn)科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 12 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準(zhǔn) 人 生效日期 真菌。也可將血培養(yǎng)物傳種至血瓊脂乎板上，然后交叉劃線接種金黃色葡萄球菌，在金黃色葡萄球菌菌落周圍有營(yíng)養(yǎng)變異鏈球菌衛(wèi)星樣菌落。人血培養(yǎng)基中含有足夠的營(yíng)養(yǎng)成分使?fàn)I養(yǎng)變異鏈球菌生長(zhǎng) 。陰性血培養(yǎng)瓶應(yīng)延長(zhǎng)培養(yǎng)至 30 天后扔棄?？ㄋ顾_(dá)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi) CO2 濃度應(yīng)為 5％～ 10％， 35～ 37℃孵育，每 48h 觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)。固相培養(yǎng)基采用瓊脂補(bǔ)充到胰酶消化大豆瓊脂，胰蛋白胨瓊脂或布魯菌瓊脂，使瓊脂的終濃度為 2． 5％。該培養(yǎng)基也適合某些細(xì)胞壁完整的細(xì)菌生長(zhǎng)，因此在這類培養(yǎng)基中分離出某種細(xì)菌，并不意味著血液中一定有細(xì)菌 L 型。 2．細(xì)菌 L 型：血液中很少分離出細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌。將裂解一離心管中的沉淀物接種至 7Hll培養(yǎng)基中，如果記錄了采集的血標(biāo)本量，裂解一離心法可進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)定量分析。大多數(shù)播散性分枝桿菌感染是由鳥分枝桿菌復(fù)合體引起，通常出現(xiàn)于 CD4 細(xì)胞 100／ mm3 的 AIDS 患者。某些特殊致病 菌培養(yǎng)時(shí)間需延長(zhǎng)，詳見附錄。 中級(jí)報(bào)告：報(bào)告直接抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果和細(xì)菌種屬的初步鑒定結(jié)果 最終報(bào)告：報(bào)告細(xì)菌種屬名和標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果 2．陰性報(bào)告：普通血培養(yǎng) 3 天無細(xì)菌生長(zhǎng)可（電話）報(bào)告為：“ 72h 培養(yǎng)未見細(xì)菌生長(zhǎng)”，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至 7/5 天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，可發(fā)補(bǔ)充 /最終報(bào)告。報(bào)告之前，應(yīng)該回顧一下患者近期標(biāo)本微生物培養(yǎng)情況，這些結(jié)果有助于解釋感染微生物的來源。 細(xì)菌鑒定見 M16，藥敏試驗(yàn)見 M5。 革蘭染色為形態(tài)均一的細(xì)菌，根據(jù)革蘭染色結(jié)果選擇抗菌藥物進(jìn)行直接抗菌藥物敏感試驗(yàn)，同時(shí)轉(zhuǎn)種培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)菌落，立即作細(xì)菌鑒定和標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物敏感試驗(yàn)。 ☆有條件者選種。 b 增加真菌培養(yǎng)基 (如：沙保弱葡萄糖瓊脂 )和 30℃孵育； c：接種硫羥乙酸鹽肉湯中。 發(fā)現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)信號(hào)，應(yīng)無菌抽取培養(yǎng)物，涂片行革蘭染色，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌，盡快報(bào)告染色結(jié)果；根據(jù)染色特征，選擇合適的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種，見表 1。 五、實(shí)驗(yàn)室檢查 1．血培養(yǎng)操作過程 中應(yīng)注意生物安全防護(hù)。 實(shí)驗(yàn)室 主 題 文件編號(hào) W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗(yàn)科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 10 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準(zhǔn) 人 生效日期 四、儀器渝試劑 2． 儀器：恒溫培養(yǎng)箱。 2)補(bǔ)做培養(yǎng)瓶：血標(biāo)本采集后放置 12h 以上 (手工法除外 )，用不適當(dāng)類型的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本，用過期的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本，采血量不足等。 2．不合格血培養(yǎng)標(biāo)本的處理 1)拒收培養(yǎng)瓶：血培養(yǎng)瓶標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符，培養(yǎng)瓶破裂或明顯污染。 4)對(duì)于延遲送檢的血培養(yǎng)瓶注意肉眼觀察微生物生長(zhǎng)可視信號(hào)：培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)是否有絮狀物、混濁、溶血、凝塊、薄膜、產(chǎn)氣、白色顆粒等。 2)檢查瓶子上的標(biāo)簽與申請(qǐng)單是否相符。 7．標(biāo)本運(yùn)送 采血后應(yīng)該立即送檢，如不能立即送檢，需室溫保存或置 35℃～ 37℃孵箱中，切勿冷藏。入院前兩周內(nèi)接受抗菌藥物治療的患者，連續(xù)三天，每天采集 2 份。 3)可疑菌血癥或真菌血癥，但血培養(yǎng)持續(xù)陰性，應(yīng)改變血培養(yǎng)方法，以獲得罕見的或苛養(yǎng)的微生物。特殊的全身性和局部感染患者采血培養(yǎng)的建議： 1)可疑急 性原發(fā)性菌血癥、真菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎或肺炎，應(yīng)在不同部位采集 2～ 3 份血標(biāo)本。 6．血培養(yǎng)份數(shù)和采血時(shí)間 采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥之前進(jìn)行，在 24h內(nèi)采集 2～ 3份血培養(yǎng) (一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng) )。 5．采血量 成人采血量是 8～ l0ml，兒童 l～ 5ml。 3)血標(biāo)本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕混勻以防血液凝固。 2)用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭 (如果行第二次穿刺，應(yīng)換針頭 )直接注入血培養(yǎng)瓶，或嚴(yán)格按廠商推薦的方法采血。如果是自配帶塞子的三角瓶，此步驟可免去。 3．培養(yǎng)瓶 消毒程序 1)70％酒精擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用 60s。 3)70％酒精脫碘。 2．皮膚消毒程序：嚴(yán)格執(zhí)行以下三步法： 1） 70％酒精擦拭靜脈穿刺部位待 30s 以上。新生兒菌血癥，應(yīng)該增加尿液和腦脊液培養(yǎng)。 106/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞 )，皮膚粘膜出血，昏迷，多器官衰竭，血壓降低， CRP 升高及呼吸快，特殊患者 (如血液病 )出現(xiàn)粒細(xì)胞減少 (成熟的多形核白 細(xì)胞 1000179。菌血癥是臨床醫(yī)學(xué)急癥，引起菌血癥的細(xì)菌通常是多重耐藥菌，盡快采集血液進(jìn)行培養(yǎng) (血培養(yǎng) )和準(zhǔn)確的抗生素敏感試驗(yàn)報(bào)告對(duì)危重患者感染的診斷，治療和預(yù)后有重要的臨床意義，血培養(yǎng)是把靜脈穿刺獲得的血液接種到一個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)瓶中，用來發(fā)現(xiàn)、識(shí)別細(xì)菌或其它可培養(yǎng)分離的微生物。持續(xù)性菌血癥 (Continuousbacteremia)常見于感染性心內(nèi)膜炎、感染性動(dòng)脈瘤、血栓性靜脈炎和其它血管內(nèi)膜感染，亦常發(fā)生于傷寒熱和波浪熱的最初幾周。一過性菌血癥 (Transient bacteremia)常發(fā)生于對(duì)感染灶 (如膿腫、癤、蜂窩組織炎 )的外科處理、粘膜的創(chuàng)傷性操作 (如牙齒修復(fù)、膀胱鏡檢、尿道擴(kuò)張術(shù)、各種插管、引產(chǎn)和乙狀結(jié)腸鏡檢查 )和易污染的外科手術(shù) (如經(jīng)尿道的前列腺切除、陰道子宮切除術(shù)和燒傷感染的清創(chuàng)術(shù) )，亦可發(fā)生于全身或局部感染的早期 (如腦膜炎、肺炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、腹膜炎、膽囊炎、小腸結(jié)腸炎、外傷感染或手術(shù)感染 )。 3． Barbara SR， Gall LW， Richard BThorftsoD JR， Divise HL， et al． SPecimen processing， Manual Of Clinical Microbiology(7? Editon)， ASM， Washlngton，DC， 1999， 64— 104． 4．主編：徐英春，倪語星，王金良，作者：趙銳，張小江，王輝，謝秀麗。 2． Vandepltte J， Engbaek K， Pio tP， Heuck CC 著，王登先，白念峰，史旭波等譯。 貯藏： 4℃， 30 天 質(zhì)控： 難辨羧菌 ATCCl3124：生長(zhǎng)，雙溶血 脆弱擬桿菌 ATCC25285：生長(zhǎng) 主要參考文獻(xiàn) 1． Dunne JR， Frederick S Nolte， Michael L Wilson。 氯化血紅素 5mg 維生素 K 0． 5mg 制備方法： 加熱溶解上述成份，高壓 121℃， 15 分鐘，水浴冷卻至 50C，無菌手續(xù)加入脫纖維馬血 (或羊血 )，氯化血紅素和維生素 K。 貯藏： 4℃， 30 天 質(zhì)控： 肺炎鏈球菌 ATCC49619：生長(zhǎng)， α－溶血 化膿鏈球菌 ATCCl9615：生長(zhǎng)， β－溶血 金黃色葡萄球菌 ATCC25923：生長(zhǎng) 大腸桿菌 ATCC25922：生長(zhǎng) 2．厭氧血瓊脂培養(yǎng)基 (1000ml) 成份： 哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ) 39g 蒸餾水 950ml 調(diào) 177。 實(shí)驗(yàn)室 主 題 文件編號(hào) W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗(yàn)科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 7 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準(zhǔn) 人 生效日期 制備方法： 加熱溶解上述成份，高壓 121℃ ， 15 分鐘，水浴冷卻至 50℃，無菌手續(xù)加入脫纖維馬血或羊血 50～ 60ml。 附二：主要培養(yǎng)基制備 1．血瓊脂培養(yǎng)基 (1000mi) 成份： 哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ) 39g 蒸餾水 950ml 177。如果懷疑真菌性心內(nèi)膜炎，應(yīng)進(jìn)行裂解一離心血培養(yǎng)。 6．心內(nèi)膜炎特殊致病菌：如果常規(guī)血培養(yǎng) 48h 陰性而臨床癥狀仍提示感染性心內(nèi)膜炎，臨床醫(yī)生和微生物學(xué)家應(yīng)考慮使用特殊的培養(yǎng)技術(shù)。然而對(duì)于非白念珠菌、光滑球擬酵母菌、新型隱球菌、莢膜組織胞漿菌和其它雙相真菌，使用裂解 離心技術(shù)可獲得最高的檢出率，通常采用霉菌抑制瓊脂 (1nhibitorymoldagar)，腦心浸液瓊脂和巧克力瓊脂與 Isolator 管結(jié)合使用。裂解 離心技術(shù)是一種分離真菌的有效方法，特別是對(duì)于營(yíng)養(yǎng)要求苛刻的雙相真菌。也可將血培養(yǎng)物傳種至血瓊脂平板上，然后交叉劃線接種金黃色葡萄球菌，在金黃色葡萄球菌菌落周圍有營(yíng)養(yǎng)變異鏈球菌衛(wèi)星樣菌落。人血培養(yǎng)基中含有足夠的營(yíng)養(yǎng)成分使?fàn)I養(yǎng)變異鏈球菌生長(zhǎng)。陰性血培養(yǎng)瓶應(yīng)延長(zhǎng)培養(yǎng)至 30 天后扔棄。卡斯塔涅達(dá)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi) CO2 濃度應(yīng)為 5％～ 10％， 35～ 37℃孵育，每 48h 觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)。固相培 養(yǎng)基采用瓊脂補(bǔ)充到胰酶消化大豆瓊脂，胰蛋白胨瓊脂或布魯菌瓊脂，使瓊脂的終濃度為 ％。該培養(yǎng)基也適合某些細(xì)胞壁完整的細(xì)菌生長(zhǎng)，因此在這類培養(yǎng)基中分離出某種細(xì)菌，并不意味著血液中一定有細(xì)菌 L 型。 2．細(xì)菌 L 型：血液中很少分離出細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌。將裂解 離心管中的沉淀物接種至 7Hll培養(yǎng)基中，如果記錄