【正文】 (2)分離培養(yǎng) 將處理后痰標本分別劃區(qū)接種于血平板、巧克 力平板和麥康凱平板 ／中國蘭平板， 35℃ 孵育，血平板和巧克力平板需置 5％ CO2 環(huán)境，詳見檢驗流程圖 1。亦可加液化劑后用旋轉(zhuǎn)混勻器攪拌混勻， 3000r／ rain 離心 l0min，棄上清液，取沉淀物接種培養(yǎng)基。 實驗室 主 題 文件編號 W003 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 下呼吸道感染 細菌學檢驗 操作規(guī)范 第 23 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 表 3 痰涂片顯微鏡細胞學檢查判別標本合格的標準 分類 細胞數(shù) /低倍鏡 備注 白細胞 鱗狀上皮細胞 A 25 10 合格可用于細菌培養(yǎng) B 25 10~25 尚合格可用于細菌培養(yǎng) C 10 25 不合格，重送標本 近年來推薦簡單的方法是痰標本涂片鏡檢 10 個白細胞／低倍鏡時，就可判斷是合格并可用于細菌培養(yǎng)的標本，尤其是白細胞減少的患者一。 雙份標本 同時同部位或同一天兩份相同檢測的標本 (應(yīng)與申請醫(yī)師協(xié)商處理 )。 肉眼觀察 痰標本呈水樣或唾液樣，拒收。下呼吸道標本驗收與拒收見表 2。 2．支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環(huán)甲膜穿刺經(jīng)氣管吸引法、經(jīng)胸壁針穿刺吸引 法和支氣管肺泡灌洗法均由臨床醫(yī)生按相應(yīng)操作規(guī)程采集，但必須注意采集標本時盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。盡可能在用抗菌藥物之前采集標本。醫(yī)院獲得性肺炎常見的病原菌有銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、陰溝腸桿菌、克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、金黃色葡萄球菌、念球菌等 。 實驗室 主 題 文件編號 W003 廣東省汕尾逸 輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 下呼吸道感染 細菌學檢驗 操作規(guī)范 第 21 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 下呼吸道感染細菌學檢驗操作規(guī)范 一、相關(guān)臨床知識 臨床通常將正常人喉以上部位稱 之為上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而氣管以下包括氣管、支氣管和肺泡稱下呼吸道，通常無菌。 121℃ 滅菌 15 分鐘。 將上述兩液趁熱混合，調(diào)正 pH 至 ，以紗布過濾，按每瓶 100mi分裝高壓滅菌， 20 分鐘。 加入 20mllsoVitaleX(必須提前置室溫 30 分鐘 )，混合均勻 (即 TsoVitaleX之終濃度為 1％ ) 傾注平板。 配方二 將 proteose No． 3agar(Difco)90g(雙倍量 )加於 1000ml 蒸餾水中，加熱攪拌，完全混合。 待凝固后，抽樣于 37℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時行無菌試驗，如無細菌生長置冰箱中備用。 配方二 按商品標示，稱血瓊脂基礎(chǔ) [tryptlc． Soy agar(TSA)或 TSA(EH)TSA No． 2或 bloodagarbase， Difco]，溶于適量蒸餾水中。 直接用導(dǎo)尿管頭劃線培養(yǎng)。 五、尿培養(yǎng)檢驗中常見的錯誤：以下是尿培養(yǎng)檢驗中經(jīng)常容易出現(xiàn)的錯誤，在工作中應(yīng)予以避免。 尿 pH 或 ，細菌發(fā)育受阻。而對一個實驗室而言，使用統(tǒng)一的標準對實驗結(jié)果進行解釋，如果標準制定過松，將會造成不必要的資源浪費和抗生素濫用；制定過嚴，將有可能導(dǎo)致尿路感染的漏診，所以每個實驗室應(yīng)在與臨床醫(yī)師密切合作的基礎(chǔ)實驗室 主 題 文件編號 W002 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 尿路感染細菌學 檢查規(guī)范 第 18 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 上，根據(jù)不同的培養(yǎng)情況制定不同的解釋標準。 三、關(guān)于尿培養(yǎng)檢驗培養(yǎng)基選擇：沒有一種“好方法”可以適合所有尿道病原體的培養(yǎng)，所以應(yīng)該根據(jù)標本來源及臨床診斷選擇適合的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。直接劃線接種法的關(guān)鍵是應(yīng)保證接種量的準確性，可 使用定量接種環(huán)，方法是將接種環(huán)校準后，以垂直方向持拿，使圈環(huán)剛好浸入尿液表面 ，不可使尿液碰到環(huán)上方的白金絲，在使用接種環(huán)定量接種時應(yīng)定期對接種環(huán)校準。 關(guān)于尿路感染細菌學檢查的技術(shù)說明 一、關(guān)于尿培養(yǎng)標本的采集；用于收集尿培養(yǎng)標本的方法有多種，其中恥骨上膀胱穿刺法是評估膀胱內(nèi)細菌感染的“金標準”，直接導(dǎo)尿法也能準確地反映膀胱感染情況，但這兩種方法，均需臨床醫(yī)師操作，給患者帶來一定的痛苦，不易為患者接受，同時也可能將外源性細菌引入膀胱，導(dǎo)致并發(fā)感染，應(yīng)慎重使用。1 無菌生長 (1000CFU／ m1)”。細菌鑒定見 M16，藥敏試驗見 M5。 104 無明確意義，僅報告菌落數(shù)及革蘭染色特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長， 510179。l 接種量者，將平板菌落數(shù)乘以 103(CFU／ m1)；(2)采用 100181。 特殊培養(yǎng)：對懷疑有苛氧菌感染者應(yīng)采用恥骨上膀胱穿刺法或?qū)蚍ú杉瘶颖?，加種一塊巧克力平板，置 5％ CO2 環(huán)境中培養(yǎng) 48h。 一般培養(yǎng)：將收集標本的容器輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，用定量接種環(huán)或無菌微量加樣器取尿液 10181。對信息不全者應(yīng)設(shè)法和臨床醫(yī)師取得聯(lián)系，在沒有獲得可靠信息之前，任何標本都不能隨意丟棄。不能采集收集袋中的尿液。但因?qū)蚬艿氖褂?，可引入下尿道細菌，?dǎo)致繼發(fā)感染，應(yīng)慎重使用。 恥骨上膀胱穿刺法 嚴格按無菌操作，使用注射器直接從恥骨上經(jīng)皮穿入膀胱，吸取尿液。 (二 )標本采集方法 注意盡量采集晨尿標本，應(yīng)保證尿液在膀胱內(nèi)停留 4h以上。 (四 )臨床表現(xiàn) 尿路感染典型的臨床表現(xiàn)是發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難和恥骨上壓痛。菌血癥病人，血液中的細菌可通過血流進入腎臟，引起感染。女性尿道寬而短，且尿道口距肛門較近而常被糞便細菌污染，故更易感染；此外，女性陰道菌群也是尿路感染病原菌的又一個主要來源。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染 (腎盂腎炎 )及下尿路感染 (膀胱炎 )，男性還可出現(xiàn)前列腺炎。血培養(yǎng)操作規(guī)范，上海科學技術(shù)出版社， 2020， 1— 3l 實驗室 主 題 文件編號 W002 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 尿路感染細菌學 檢查規(guī)范 第 14 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 尿路感 染細菌學檢查規(guī)范 一、相關(guān)臨床知識 (一 )概述 尿道感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。 Blood Cultures III， CumlteehlB， Amerman Soclety fOr Mlcrobi010gy， 1997；1－ 21。 無菌馬血或羊血 50 一 60ml。 無菌馬血或羊血 50～ 60ml。對于分離一些生長緩慢，營養(yǎng)要求苛刻的革蘭陰性 桿菌 (如嗜沫嗜血桿菌、人心桿菌、伴放線放線桿菌、嚙蝕艾肯氏菌、金氏金氏菌、軍團菌屬、 Quintana 巴爾通體和布魯菌屬等 )，應(yīng)延長培養(yǎng) 2— 4 周，然后傳種特殊的培養(yǎng)基。實際上，大多數(shù)需氧血培養(yǎng)瓶，孵 育 5～ 7 天，可提供充足的營養(yǎng)使白念珠菌生長良好。然而傳代培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中需要補充鹽酸一磷酸吡哆醛 (％ )或 L 半胱氨酸 (％至 ％ )或二者皆有，否則營養(yǎng)變異鏈球菌不能生長。無菌生長，將培養(yǎng)瓶傾斜，使肉湯流過瓊脂表面。 3．布魯菌屬：通常將血液接種至含有雙相培養(yǎng)基的卡斯塔涅達培養(yǎng)瓶(Castaneda bottles)中進行培養(yǎng)。 BACTEC 12B培養(yǎng)基會抑制某些鳥分枝桿菌復(fù)合體的生長， BACTEC 13A 培養(yǎng)基專門用于分離血液中的分枝桿菌，接種的血量為 5ml，它避免了處理裂解一離心血培養(yǎng)物時所遇到的潛在危險性。 附 錄 附一：血培養(yǎng)特殊致病菌的處理 1．分枝桿菌：從血液中分離培養(yǎng)分枝桿菌需特殊培養(yǎng)基，通常局限于免疫抑制和 AIDS 的患者。同時記錄報告的日期，時間，內(nèi)容以及接受報告人的姓名。在使用雙相培養(yǎng)基進行血培養(yǎng)時，如有菌落生長可直接進行組菌鑒定和標準抗菌藥物敏感試驗。 X：選擇的培養(yǎng)基。 2．血培養(yǎng)瓶處理：血培養(yǎng)每天至少檢查一次，注意微生物生長可視信號，對 48～ 2h未生長的培養(yǎng)瓶應(yīng)轉(zhuǎn)種，行需氧培養(yǎng)。處理方法：立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報告標本不合格的具體理由，建議補做血培養(yǎng)。如發(fā)現(xiàn)可視信號提示有微生物生長，應(yīng)該立即直接涂片鏡檢 和劃線轉(zhuǎn)種。 三、標本驗收 1．血培養(yǎng)瓶驗收 1)檢查培養(yǎng)瓶是否有滲漏、破裂或明顯污染。 4)可疑細菌性心內(nèi)膜炎，在 l～ 2h內(nèi)采集 3 份血標本，如果 24h 后陰性，再采集 3 份以上的血標本。對間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前 ～ 1h采血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)燒后 lh 進行。立即送檢，切勿冷藏。 4．靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種程序 實驗室 主 題 文件編號 W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 9 頁 共 137 頁 第 1 版 第 0次修改 撰寫日期： 2020． 05． 10． 起 草 人 操 作 人 批 準 人 生效日期 1)在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動，可戴乳膠手套固定靜脈，不可接觸穿刺點。 對碘過敏的患者，用 70％酒精消毒 60s，待酒精揮發(fā)干燥后采血。對入院危重感染患者在未進行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應(yīng)及時采集血培養(yǎng)。 二、血標本采集和運送 1．采血指征：一般患者出現(xiàn)以下一種體癥時可作為采血的重要指征：發(fā)熱(≥ 38℃ )或低溫 (≤ 36℃ )，寒戰(zhàn)，白細胞增多 (計數(shù)大于 10， 000179。間歇性菌血癥 (Intermittent bacteremia)常發(fā)生于腹腔、骨盆、腎周、肝臟、前列腺及其它部位未能及時引流的膿腫。血液，臨床細菌學基礎(chǔ)實驗室程序，人民衛(wèi)生出版社， 1997； 19—22。 注意：如果基礎(chǔ)培養(yǎng)過熱不能加入馬血或羊血，馬血或羊血使用前一定要作無菌試驗，加血液量取決于紅細胞與血漿比。 注意：如果基礎(chǔ)培養(yǎng)過熱不能加入馬血或羊血，馬血或羊血使用前一定要作無菌試驗，加血液量取決于紅細胞與血漿比。伯氏柯克斯體或衣原體引起的心內(nèi)膜炎通常進行血清學診斷。陰性的真菌血培養(yǎng)應(yīng)于 22～ 30℃孵育 4 周后發(fā)終報告。 5．真菌：多種方法可提高血液中真菌的檢出率，包括使用需氧血培養(yǎng)瓶、雙相培養(yǎng)基、裂解 離心技術(shù)和特殊營養(yǎng)的肉湯培養(yǎng)基 (如腦心浸液波肉湯等 )。 4．營養(yǎng)變異鏈球菌：該種細菌的生長需要補充琉醇復(fù)合物和維生素 B6。液相培養(yǎng)基采用不含瓊脂的相同培養(yǎng)基基礎(chǔ)，當培養(yǎng)瓶內(nèi)瓊脂凝固后，再以無菌手續(xù)將液相培養(yǎng)基基礎(chǔ)傾入瓶內(nèi)即可。含 10％蔗糖或甘露醇滲透壓恒定的培養(yǎng)基，適合培養(yǎng)細胞壁缺陷的細菌。 2．裂解 離心、 BACTEC 12B 或 13A， Bact／ Alert(r)MP 培養(yǎng)基均可用于分離培養(yǎng)分枝桿菌。 中級報告：報告直接抗菌藥物敏感試驗結(jié)果和細菌種屬的初步鑒定結(jié)果 最終報告：報告細菌種屬名和標準抗菌藥物敏感試驗結(jié)果 2．陰性報告：普通血培養(yǎng) 3 天無細菌生長可（電話）報告為：“ 72h 培養(yǎng)未見細菌生長”，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至 7 天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長，可發(fā)補充 /最終報告。 細菌鑒定見 M16，藥敏試驗見 M5。 X：選擇的培養(yǎng)基。 2．血培養(yǎng)瓶處理：密切微生物生長可視信號，對 48～ 72h未生長的培養(yǎng)瓶應(yīng)轉(zhuǎn)種，行需氧培養(yǎng)。 2)補做培養(yǎng)瓶：血標本采集后放置 12h 以上 (手工法除外 )，用不適當類型的培養(yǎng)瓶收集標本，用過期的培養(yǎng)瓶收集標本，采血量不足等。 4)對于延遲送檢的血培養(yǎng)瓶注意肉眼觀察微生物生長可視信號：培 養(yǎng)瓶內(nèi)是否有絮狀物、混濁、溶血、凝塊、薄膜、產(chǎn)氣、白色顆粒等。 6．標本運送 采血后應(yīng)該立即送檢， 置 35℃～ 37℃孵箱中，切勿冷藏。 實驗室 主 題 文件編號 W001 廣東省汕尾逸輝基金醫(yī)院 檢驗科臨床微生物室 血培養(yǎng)操作規(guī)范 第 4 頁