【正文】 cal Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號：文件標(biāo)題：尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。恥骨上皮膚經(jīng)碘酒消毒后，再以75％乙醇擦拭，用無菌注射器作膀胱穿刺，吸取尿液后排去注射器內(nèi)的空氣，針頭插于無菌橡皮塞上送檢。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。 兩側(cè)腎盂尿　由?？漆t(yī)生采集，左右側(cè)標(biāo)本必須標(biāo)明，避免混淆而誤診。11. 危急值報(bào)告直接涂片找到細(xì)菌或培養(yǎng)陽性均作危急值報(bào)告。經(jīng)培養(yǎng)48h，仍無細(xì)菌生長者，報(bào)告“培養(yǎng)2日無細(xì)菌生長”。根據(jù)染色及形態(tài)特征，常可初步提示細(xì)菌的種類。 標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置室溫，放置時(shí)間不應(yīng)超過2h，切勿放冰箱，否則影響檢出率。參考文獻(xiàn)1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號：文件標(biāo)題：腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。若從患者痰標(biāo)本中查見致病菌或條件致病菌，提示可能有呼吸道細(xì)菌感染。 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。 結(jié)核分枝桿菌涂片　參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)箱等。 痰涂片白細(xì)胞10／低倍視野，上皮細(xì)胞25／低倍視野。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　痰、咽拭、支氣管肺泡灌洗吸出液、支氣管沖洗液或刷子、肺穿刺等。 糞便標(biāo)本有很多雜菌，但不能由此認(rèn)為糞便標(biāo)本的采集就無需注意雜菌污染，為防止污染必須注意標(biāo)本的采集方法。
　　 艱難梭菌培養(yǎng)　取液狀糞便立即接種于環(huán)絲氨酸頭孢西丁果糖瓊脂（簡稱CCFA）平板上，并將糞便作102～106稀釋后定量接種。只有懷疑霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹瀉時(shí)，才作直接涂片檢查（觀察動力和菌群比例）。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、麥康凱平板、SS平板、TCBS平板及相關(guān)生化試劑等。
　　 直腸拭子　如不易獲得糞便時(shí)，或排便困難患者及嬰兒，可用直腸拭子采取，即以無菌棉拭用保存液或生理鹽水濕潤后，插入肛門內(nèi)4～5cm(幼兒2～3cm)輕輕轉(zhuǎn)動取出，插入卡布（CaryBlair）運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)或無菌容器內(nèi)送檢。10. 臨床意義各個(gè)部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）的細(xì)菌學(xué)檢查對于確定該部位是否有細(xì)菌感染具有重要的診斷價(jià)值。此法可提高陽性檢出率。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見質(zhì)量管理。如懷疑厭氧菌感染，應(yīng)做床邊接種或接種運(yùn)送培養(yǎng)基。將接種針垂直插入半固體培養(yǎng)基的中央，穿刺至培養(yǎng)基底部，然后沿原穿刺線退出接種針。每一區(qū)域的劃線應(yīng)接觸上一區(qū)域的接種線2～3次，使菌量逐漸減少，以形成單個(gè)菌落。 糞便或肛拭標(biāo)本接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記，取糞便膿血部位標(biāo)本根據(jù)檢驗(yàn)申請單要求選擇平板，立即接種。門診病人要同時(shí)登記住址、聯(lián)系電話等信息。失控者必須記錄失控情況并有相應(yīng)的糾正措施。 外觀檢查 合格培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)：完整、瓊脂附于平板底部，血平板應(yīng)不透明、沒有溶血情況，平板顏色好、濕潤，無干裂、無污染、無渾濁或沉淀、無凍傷、無過熱現(xiàn)象，瓊脂厚度至少3mm。下列試劑每進(jìn)一批新批號或貨號要求用陰性、陽性標(biāo)準(zhǔn)菌株評估其質(zhì)量（表21）。 生成微生物檢驗(yàn)標(biāo)本標(biāo)簽 護(hù)士應(yīng)在核對醫(yī)囑、病人信息和檢驗(yàn)申請信息后，按照〈〈微生物標(biāo)本檢驗(yàn)標(biāo)簽程序〉〉生成申請單和微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)簽，并將微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目標(biāo)簽正確張貼于標(biāo)本容器上。 室間質(zhì)控的檢測結(jié)果和反饋結(jié)果均記錄于室間質(zhì)控記錄表，根據(jù)反饋結(jié)果分析室間質(zhì)控的狀態(tài)，如有不合格結(jié)果應(yīng)先向負(fù)責(zé)人和主任報(bào)告，然后查找原因，撰寫錯(cuò)誤評估報(bào)告，制定糾正措施并培訓(xùn)員工，避免常規(guī)工作和質(zhì)控再次發(fā)生同樣錯(cuò)誤。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號：文件標(biāo)題：室間質(zhì)量控制管理程序文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：室間質(zhì)量控制管理程序1. 目的 規(guī)范室間質(zhì)量控制管理程序，確保檢驗(yàn)質(zhì)量。詳情參見《儀器管理程序》。 要求制定儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。參見《記錄管理程序》。 檢驗(yàn)人員執(zhí)行質(zhì)量管理程序。7． 儀器、電器設(shè)備，要有專人保管，并做好有關(guān)的記錄；易燃物品乙醇應(yīng)妥善保管，遠(yuǎn)離火源，若出現(xiàn)著火情況，應(yīng)立即用濕布將其覆蓋。2． 工作人員在工作過程中發(fā)生皮膚破損、化學(xué)試劑燒傷皮膚、眼睛或者病原微生物的感染等必須有做相應(yīng)的處理，上報(bào)醫(yī)務(wù)科，并做記錄。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號：文件標(biāo)題：微生物實(shí)驗(yàn)廢棄物處理制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：微生物實(shí)驗(yàn)廢棄物處理制度1． 微生物實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本、玻片等大多有病原微生物必須進(jìn)行滅菌處理后丟棄。、持物鉗、鑷子等的消毒液要定期更換。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的標(biāo)本、菌株等感染物必須消毒滅菌處理。，并用肥皂和清水洗凈。、編號及試驗(yàn)記錄。 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號：文件標(biāo)題：紫外線消毒制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：紫外線消毒制度1． 微生物實(shí)驗(yàn)室每天工作結(jié)束后需對環(huán)境進(jìn)進(jìn)行紫外線消毒40分鐘以上，并做好記錄。 培養(yǎng)基質(zhì)量控制參見《室內(nèi)質(zhì)量控制管理程序》。 培養(yǎng)基 成品培養(yǎng)基 由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)評估、訂購。冰箱應(yīng)每天記錄溫度以監(jiān)控存放條件是否符合要求。記錄驗(yàn)收結(jié)果，并在試劑外包裝上標(biāo)明接收時(shí)間及接收人員簽名，保存質(zhì)量保證書。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號：文件標(biāo)題：微生物實(shí)驗(yàn)室試劑的管理制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：微生物實(shí)驗(yàn)室試劑管理制度目的規(guī)范微生物實(shí)驗(yàn)室試劑的管理程序，保證試驗(yàn)質(zhì)量。3. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不能高聲談笑，不準(zhǔn)吸煙、飲食，不要用手指觸摸頭、面等部位以免造成污染。8. 保持室內(nèi)清潔衛(wèi)生。二、檢驗(yàn)科在生物安全防范管理工作中應(yīng)達(dá)到以下要求：1. 細(xì)菌室工作人員須穿工作服，戴工作帽，必要時(shí)穿隔離衣、戴口罩、手套。2. 開展醫(yī)院感染病原微生物的培養(yǎng)、分離鑒定、藥敏試驗(yàn)及特殊病原體的耐藥性監(jiān)測，定期總結(jié)、分析，向有關(guān)部門反饋，并向全院公布。5. 無菌物品如棉簽、棉球、紗布及其容器應(yīng)在有效期內(nèi)使用，開啟后使用時(shí)間不得超過24小時(shí)。9. 菌種、毒種按《病原微生物實(shí)驗(yàn)室安全管理?xiàng)l例》進(jìn)行管理。5. 實(shí)驗(yàn)室每天用紫外線進(jìn)行消毒空氣，作好記錄，并定期檢測；接種環(huán)（針）使用后應(yīng)立即在火焰燈上燒灼滅菌；沾有活菌的玻片、試管等玻璃制品應(yīng)立即放在鋼精鍋內(nèi)統(tǒng)一高壓滅菌；檢測剩余的標(biāo)本及接觸過微生物的平板、鑒定板（條）等塑料制品均用黃色塑料袋裝好，置黃色桶內(nèi)，統(tǒng)一滅菌處理。試劑檔案內(nèi)容包括：試劑名稱、批號、數(shù)量、生產(chǎn)商、接收日期、失效日期、儲存條件、試劑說明書、相關(guān)質(zhì)控文件及接收人員簽字等。出現(xiàn)與上述情況不符時(shí)，應(yīng)立即通知實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，并暫停使用。不符合要求時(shí)應(yīng)拒收。 每月月底清點(diǎn)試劑，清除過期試劑，預(yù)購下月需要使用的試劑。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號：文件標(biāo)題：微生物實(shí)驗(yàn)室安全工作制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：微生物實(shí)驗(yàn)室安全工作制度。，應(yīng)立即用過氧乙酸消毒或浸于3%來蘇兒溶液中510分，再用肥皂洗手并沖洗干凈；如誤入口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并用1:1000高錳酸鉀溶液或3%雙氧水漱口，根據(jù)實(shí)際情況服用有關(guān)藥物。2． 一般藥敏實(shí)驗(yàn)用的標(biāo)準(zhǔn)菌ATCC2592ATCC25923和ATCC27853,菌種保管應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，保存于冰箱中，確保菌種安全。，必要資料和書籍帶入后，應(yīng)遠(yuǎn)離操作臺。，應(yīng)立即用肥皂洗手并沖洗干凈，再外用消毒藥水，如誤入口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并用1:1000高錳酸鉀溶液或3%雙氧水漱口，必要時(shí)根據(jù)實(shí)際情況服用有關(guān)藥物。2． 盡可能應(yīng)用一次性注射器，用過的針頭，禁止折彎、剪斷、重新蓋帽、從注射器取下，禁止用手直接操作，用過的針頭必須直接放入防穿透的容器盒中。3． 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不能高聲談笑，不準(zhǔn)吸煙、飲食，不要用手指觸摸頭、面等部位以免造成污染。 10. 工作結(jié)束后，用500g/L含氯消毒劑溶液消毒工作臺面；工作人員雙手應(yīng)用肥皂、 流水清洗三遍以上，關(guān)好窗戶、檢查好電源后，方可離開實(shí)驗(yàn)室。 操作規(guī)程 規(guī)定檢驗(yàn)申請、標(biāo)本采集開始到發(fā)出檢測結(jié)果報(bào)告為止的全過程的操作規(guī)程和管理程序。 對標(biāo)本質(zhì)量進(jìn)行評估。 按制造商的要求檢測并記錄儀器的運(yùn)行情況，定期進(jìn)行校準(zhǔn)。 所有試劑（包括染液和抗血清）應(yīng)有標(biāo)簽，用陰、陽對照質(zhì)控，合理保存，在有效期內(nèi)使用并做好記錄。 4． 程序 微生物室所開設(shè)的檢測項(xiàng)目應(yīng)參加實(shí)驗(yàn)室間比對計(jì)劃。江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號：文件標(biāo)題：室內(nèi)質(zhì)量控制管理程序文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：室內(nèi)質(zhì)量控制管理程序1． 目的規(guī)范微生物實(shí)驗(yàn)室管理程序，確保臨床報(bào)告的質(zhì)量。 樣本的接收 樣本接收人員應(yīng)嚴(yán)格按照〈〈標(biāo)本接收、標(biāo)識程序〉〉、〈〈標(biāo)本拒收程序〉〉對樣本接收或拒收，并記錄。 缺陷或失效試劑只能用于培訓(xùn)員工業(yè)務(wù)能力，否則報(bào)廢處理。35`C培養(yǎng)24小時(shí)后觀察是否有細(xì)菌生長，無細(xì)菌生長為合格。3. 職責(zé) 由微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員進(jìn)行分級報(bào)告。、巧克力瓊脂平板、中國藍(lán)平板的第一區(qū)，然后用接種環(huán)劃第二、第三區(qū)...。2. 范圍微生物室所有標(biāo)本的接種。 斜面接種法 此法主要用于鑒定或保存菌種，或觀察細(xì)菌的某些生化特性和動力。 液體培養(yǎng)基接種法用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標(biāo)本。 標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置室溫，放置時(shí)間不應(yīng)超過2h。漿液性標(biāo)本先離心（3000r／min，15min），取沉淀物涂片作革蘭染色，觀察有無細(xì)菌，以及細(xì)菌的形態(tài)。7. 操作流程穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液等）厭氧培養(yǎng)多功能體液培養(yǎng)瓶或血培養(yǎng)瓶離心厭氧血瓊脂平板35℃厭氧環(huán)境培養(yǎng)24～48h有菌生長沉淀物涂片、染色培養(yǎng)2