【正文】 40．抗菌藥物敏感性試驗(AST)意義方法有哪些?AST的意義：①可預(yù)測抗菌治療效果，即AST試驗結(jié)果為敏感時，治療可能有效；試驗結(jié)果為耐藥時，治療一定失??；而中介意味著高于常規(guī)治療劑量或藥物濃度集中的生理部位可能有效。微生物的變異是其進(jìn)化基礎(chǔ)，變異有多種機制，小的變異包括堿基對的點突變，可以改變抗微生物藥物的作用靶點和干擾它們的活性。？（一） 糖發(fā)酵培養(yǎng)基（1）成分蛋白胨水或肉膏液（p ）100 ml所需糖、 ～16g／L ml（2）制法① 將上述各物質(zhì)加熱溶解后，分裝試管。（3）用途 測定細(xì)菌分解葡萄糖的代謝類型用。（3）用途 鑒別腸桿菌科細(xì)菌。② 高壓（） 滅菌15 分鐘后，趁熱取出置成斜面，備用。（3）用途　鑒定細(xì)菌能否產(chǎn)生尿素酶。（3）用途 鑒定沙門菌屬細(xì)菌用。常用的單糖類有：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖等。（5）應(yīng)用糖分解試驗是細(xì)菌生化試驗中最常用的生化反應(yīng)。兼性厭氧菌為發(fā)酵型細(xì)菌。葡萄球菌為發(fā)酵型而微球菌為氧化型。而瓊脂中沒分解的淀粉與碘作用產(chǎn)生藍(lán)色。通常在20 ～30 分鐘內(nèi)顯色。（六） 甲基紅試驗（1）原理細(xì)菌在糖代謝過程中,能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，并進(jìn)一步將丙酮酸代謝為乳酸、乙酸、甲酸等,使培養(yǎng)基的p H ，加入甲基紅指示劑即顯紅色。較常用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的區(qū)別，前者陽性，后者陰性。（4）方法a. 奧梅拉法：將細(xì)菌接種在上述培養(yǎng)基內(nèi)，置35℃ 培養(yǎng)48小時。本試驗陽性， 甲基紅試驗陰性，反之亦然。二 、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗（一） 吲哚（靛基質(zhì)） 試驗（1）原理有些具有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，吲哚可與對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色。注：有些細(xì)菌產(chǎn)生吲哚量少，需用乙醚或二甲苯提取后才能與試劑起反應(yīng)。沙門菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬硫化氫試驗陽性，但沙門菌屬中也有部分菌為陰性。若室溫較高， 培養(yǎng)基自行融化時，可在冰箱內(nèi)放置30 分鐘后取出觀察結(jié)果。滴加10％ 三氯化鐵4 ～5滴，由斜面培養(yǎng)物上方流下。（3）方法將細(xì)菌接種在上述含氨基酸的培養(yǎng)基及不含氨基酸的對照培養(yǎng)基中，接種后用無菌石蠟油覆蓋，高度至少5m m 。（2）方法將細(xì)菌穿刺接種在索恩利（Thornley）培養(yǎng)基，并封以滅菌石蠟油，在35℃培養(yǎng)1 ～4 天， 每天觀察培養(yǎng)基顏色變化。此外，也有助于假單胞菌、氣單胞菌的鑒定。（3）結(jié)果出現(xiàn)恒定的沉淀物為陽性，若有沉淀物出現(xiàn)，輕搖后就消失為陰性。在1分鐘內(nèi)見有大量氣泡產(chǎn)生，判為陽性結(jié)果。b 在濾紙上先滴加少許試劑a，再滴加等量的試劑b，然后涂抹待測菌，立即呈現(xiàn)藍(lán)色者為陽性，2分鐘無顏色變化為陰性。（2）試劑a 甲液： ；5 mol／L 乙酸100 ml 。如銅綠假單胞菌、嗜麥芽假單胞菌等假單胞菌可產(chǎn)生氮氣。葡萄球菌產(chǎn)生的凝固酶有兩種，一種是結(jié)合凝固酶， 結(jié)合在細(xì)胞壁上，可用玻片法測出。（3）應(yīng)用用于鑒定葡萄球菌的種，金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌為陽性結(jié)果，其他葡萄球菌為陰性。45．與人類感染相關(guān)的弧菌有哪些？01 群霍亂弧菌（V．cholerae O1 group）O139 群霍亂弧菌（V．cholerae group）非O1 群霍亂弧菌（V．cholerae non －O1group）副溶血性弧菌（V．parahaemolyticus）霍利斯弧菌（V．hollisae）擬態(tài)弧菌（V．minicus）河弧菌（V．fluvialis）創(chuàng)傷弧菌（V．vulnificus）溶藻弧菌（V．a(chǎn)lginolyticus）少女弧菌（V．damsela）麥?zhǔn)匣【╒．metschnikovii）辛辛那提弧菌（V．cincinnatiensis）弗尼斯弧菌（V．furnissii） 46．弧菌屬細(xì)菌的生物學(xué)特性是什么？本屬細(xì)菌為發(fā)酵型，革蘭染色陰性，形態(tài)呈直的、彎曲、月牙形或逗點形。營養(yǎng)要求不高，在普通瓊脂上生長良好?；魜y弧菌無論是古典生物型或E1 －tor 生物型均呈現(xiàn)極活潑的穿梭狀運動。同時，還原硝酸鹽成為亞硝酸鹽，兩種產(chǎn)物結(jié)合成亞硝酸吲哚。（3） 粘絲試驗（String Test）： ％去氧膽酸鈉水溶液與霍亂弧菌混勻制成濃懸液。古典生物型陰性，El Tor 生物型陽性。A亞單位分子量為21812 Da ，由240 個氨基酸組成，在成熟過程中由蛋白水解酶切割成A1和A2兩部分，以二硫鍵相連。在無鹽培養(yǎng)基上不能生長，氯化鈉含量超過8％不能生長。其種類主要可分為兩大類，一類是有芽胞的革蘭陽性梭菌，另一類是無芽胞的革蘭陽性及革蘭陰性的桿菌與球菌。②發(fā)生在粘膜附近的感染，口腔、腸道、鼻咽腔、陰道等粘膜，均有大量厭氧菌寄生，這些部分及其附近有破損，極易發(fā)生厭氧菌感染。采取標(biāo)本時應(yīng)盡量避免接觸空氣，多使用針筒抽取，減少標(biāo)本與空氣接觸的機會。胸腔：胸腔穿刺術(shù)。用無菌針筒抽取標(biāo)本后，排出空氣，針尖插入無菌橡皮塞， 隔絕空氣，即可運送到實驗室。B管裝有含還原劑的半固體培養(yǎng)基。60. 厭氧菌分離培養(yǎng)常用培養(yǎng)基有那些？①強化血瓊脂平板（B A P）：即布氏瓊脂或牛心、牛腦浸出液瓊脂為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，補加酵母浸膏（％）、動物血（5 ％ ～10 ％）、維生素k1 （／ml） 和氯化血紅素（5μg／ml）?？敲顾睾繛?5～100μg／ml ，萬古霉素為75μg／ml 。標(biāo)本直接涂片如發(fā)現(xiàn)革蘭陽性短粗鈍圓桿菌，同時白細(xì)胞很少或破碎，有莢膜、不見芽胞，可能即是該菌。為了便于在混合培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)厭氧菌，一般將標(biāo)本分3區(qū)劃線接種于平板上，在1 、2 區(qū)交界處，貼一張含5μg／片的甲硝唑紙片。例如產(chǎn)氣莢膜梭菌某些菌株可產(chǎn)生范圍較大的溶血圈或雙溶血圈。這種現(xiàn)象常發(fā)生在梭菌、消化鏈球菌和優(yōu)桿菌等屬，可用氫氧化鉀拉絲試驗協(xié)助判定。氧化酶陽性、精氨酸雙水解酶陽性，利用枸櫞酸鹽，對多粘菌素敏感。68. 腐敗謝瓦納拉菌生物學(xué)特性有哪些？該菌有3 個生物變種。最適生長溫度為30 ～35 ℃。而符合上述某些特性，但在O －F 基礎(chǔ)培養(yǎng)基中氧化葡萄糖、木糖，還原硝酸鹽和亞硝酸鹽，枸櫞酸鹽陽性，能在42 ℃生長，Cetrimide 瓊脂上生長，鑒定為木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種。73. 結(jié)核分枝桿菌如何分類?結(jié)核分枝桿菌（M ycobacteriu m tuberculosis ）復(fù)合群包括人結(jié)核分枝桿菌（M ．tuberculosis），牛分枝桿菌（M ．bovis）， 非洲分枝桿菌（M ．a(chǎn)fricanum ） 和田鼠分枝桿菌（M ．microti） 等，其中前三者對人類致病。結(jié)核分枝桿菌具有免疫佐劑作用，其細(xì)胞壁骨架、蠟質(zhì)D 和核酸等均有佐劑作用。②蛋白質(zhì)結(jié)核分枝桿菌含有多種蛋白質(zhì)成分。因其繁殖時成分枝狀生長故稱分枝桿菌。？糞產(chǎn)堿桿菌A．faecalis皮喬特產(chǎn)堿桿菌A．piechaudii糞產(chǎn)堿桿菌Ⅱ型A．faecalis type Ⅱ木糖氧化產(chǎn)堿桿菌A．xylosoxidans脫硝亞種subsp denitrificans木糖氧化亞種subsp．xylosoxidans？該屬菌為革蘭陰性短桿菌， ～ ～ ，周身鞭毛1 ～8 根， 有動力。69. 不動桿菌屬分幾類及生物學(xué)特性有哪些？該屬主要包括醋酸鈣不動桿菌（A．calcoaceticus）、洛菲不動桿菌（A．lwoffi）、溶血不動桿菌（A．haemolylius）、鮑曼不動桿菌（A．baumanii）、瓊氏不動桿菌（A．junii）、約翰遜不動桿菌（A．johnsonii）、耐放射線不動桿菌（）七種。該菌在血液瓊脂或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長迅速，SS 瓊脂受抑制，血液瓊脂生長菌落呈淡黃或棕色，有氨氣味，不溶血，但在菌落周圍變成綠色。假鼻疽假單胞菌、鼻疽假單胞菌是罕見的。63. 厭氧菌的革蘭染色應(yīng)注意些什么？因為某些厭氧菌具有特殊的菌體形態(tài)，可通過革蘭染色鏡下觀察作出初步鑒定。然后分別放入有氧、無氧和含5 ％～10 ％二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)48h 。同時應(yīng)接種一支液體培養(yǎng)基增菌用，如平板無菌生長時，可用液體培養(yǎng)重新轉(zhuǎn)種。除部分普通類桿菌和可變梭桿菌外，上述各菌還能水解七葉苷，故除菌落較大外，在菌落周圍還能形成棕黑色的暈。在普通血平板上，黑色菌落需4～5d 才出現(xiàn)，而在溶血平板上只需2～3d 。罐內(nèi)放人一團(tuán)用酸化硫酸銅（％ 的吐溫80 ， 加硫酸銅配制而成pH ～2）浸泡過的鋼絲絨，鋼絲絨用酸化硫酸銅浸泡過，其表面附有金屬銅，能迅速吸氧。（3）棉拭運送法一般不用，因棉拭子中有空氣不利于厭氧菌生長，但有時不得不用。？如采集標(biāo)本的部位有正常厭氧菌棲居，此等部位所培養(yǎng)出的厭氧菌，不一定是真正的致病菌，故下列標(biāo)本無送檢價值，不宜做厭氧菌培養(yǎng)：①鼻咽拭子；②齒齦拭子；③痰和氣管抽取物；④胃和腸道內(nèi)容物、肛拭，如果需要只能做難辨梭菌及肉毒桿菌；⑤接近皮膚和粘膜的分泌物；⑥褥瘡潰瘍及粘膜層表面；⑦排出的尿或?qū)?；⑧陰道或子宮拭子；⑨前列腺分泌物。標(biāo)本采集后，將針頭插入無菌橡皮塞或用專用培養(yǎng)基立即送檢，最遲不超過半小時。⑤分泌物涂片經(jīng)革蘭染色，鏡檢發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌， 而常規(guī)培養(yǎng)陰性者； 或在液體及半固體培養(yǎng)基深部長的細(xì)菌，均可能為厭氧菌感染。每克糞便含厭氧菌達(dá)1000 億個，皮膚、口腔、上呼吸道、女性生殖道的正常菌群中， 也有80 ％ ～90 ％是厭氧菌。但以兔血及以甘露醇為碳源的我妻（wagatsu ma）瓊脂培養(yǎng)基上產(chǎn)生β－ 溶血現(xiàn)象，稱為神奈川現(xiàn)象（Kanagawa phenomenon ，K P）。如治療不及時可造成嚴(yán)重休克或死亡。氯化鈉濃度高于6 ％則不生長。取被檢菌2 ～3h 的肉湯培養(yǎng)物，接種于平板表面，35℃18 ～24h 孵育后觀察有無細(xì)菌生長。將O/129(2,4 Diamino 6 ,Diisopropylpteridine ,2 ,4 二氨基6,7 二異丙基喋啶)藥敏紙片10μg及150μg的紙片貼在接種有待測菌的瓊脂平板上，35℃18 ～24h 孵育后，紙片周圍任何大小的抑菌環(huán)均表現(xiàn)為敏感。將稀釋血清滴加在潔凈的載玻片上，挑取可疑菌落混于血清內(nèi)，即刻(一般不超過10秒)出現(xiàn)肉眼可見的明顯凝集者為陽性，同時作生理鹽水對照試驗(陰性)。經(jīng)35℃4h ～6h 增菌后可在液體表面大量繁殖形成菌膜。鈉離子可刺激弧菌屬所有菌種生長。（2）方法將待測菌在DNA 瓊脂平板上做點狀接種，經(jīng)35℃培育過夜， 在平板加適量1 mol／L鹽酸。b 玻片法：取未稀釋的兔漿1滴及鹽水1滴分別置于清潔載玻片上，挑取試驗菌分別與鹽水及血漿混合，立即觀察結(jié)果。（2）方法將被檢細(xì)菌接種磷酸酚酞平板上，置35℃培養(yǎng)18 ～24 小時，在平板蓋內(nèi)加1 滴濃氨水熏蒸片刻。并觀察小倒管，如有氣泡產(chǎn)生，表示有氮氣產(chǎn)生。實驗時避免接觸含鐵的物質(zhì)。在本試驗中，氧化酶并不直接與氧化酶試劑起反應(yīng)，而是先使細(xì)胞色素C 氧化， 隨后此氧化型細(xì)胞色素C 再使對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。（2）方法 ml和等量的1％馬尿酸鈉溶液混合后， 于35℃ 培養(yǎng)2小時，加入0．2 ml茚三酮試劑混勻，出現(xiàn)紫色為陽性。（4）應(yīng)用本試驗有助于鑒別腸桿菌科細(xì)菌。（3）結(jié)果西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基斜面上有細(xì)菌生長，且培養(yǎng)基變藍(lán)色為陽性；培養(yǎng)7天無細(xì)菌生長，培養(yǎng)基顏色不變保持綠色為陰性。（5）應(yīng)用本實驗可以作為腸桿菌科細(xì)菌鑒定的重要方法，對鏈球菌和弧菌科細(xì)菌鑒定也有重要作用。變形桿菌屬、摩根菌屬及普羅菲登斯菌為強陽性，其他腸桿菌科細(xì)菌大多為陰性。（4）應(yīng)用根據(jù)細(xì)菌能否液化明膠，可有助于細(xì)菌的種、屬的鑒定。（3）應(yīng)用主要用于腸桿菌科的鑒定。每天觀察顏色變化。配法與柯凡克試劑相同。（2）方法將細(xì)菌接種于甘油復(fù)紅肉湯培養(yǎng)基，在35 ℃培養(yǎng)8天， 每天觀察結(jié)果。如為陰性應(yīng)繼續(xù)置37℃4小時再觀察。（2）培養(yǎng)基 葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。2天后取出部分菌液滴加2滴試劑，若為陰性結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)至4天再試。這兩種酶都是在乳糖存在的條件下誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生。（4）應(yīng)用某些細(xì)菌如白喉桿菌具有淀粉酶，本試驗呈陽性，可用此試驗鑒別細(xì)菌。（4）應(yīng)用 主要用于區(qū)分腸球菌、D群鏈球菌和其他鏈球菌，前兩者陽性。（3）結(jié)果培養(yǎng)基由綠色變黃表示細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，顏色不變表示不分解葡萄糖。（二） 氧化－發(fā)酵試驗（OF 試驗）（1）原理細(xì)菌在分解糖的過程中，根據(jù)有無分子氧參加，分為氧化型和發(fā)酵型。（3）方法 細(xì)菌經(jīng)分離純化后， 根據(jù)待檢菌的分解特性選擇合適的含糖培養(yǎng)基，將純種細(xì)菌接種該培養(yǎng)基中， 置溫箱內(nèi)培養(yǎng)數(shù)1824小時，取出觀察結(jié)果。?一 、碳水化合物的代謝試驗（一） 糖類發(fā)酵試驗（1）原理各種細(xì)菌含有不同的分解糖（醇、苷） 類的酶，分解糖類的能力各有不同，且不同細(xì)菌分解同一種糖的代謝產(chǎn)物也不一定相同。（3）用途 用于檢測細(xì)菌能否產(chǎn)生精氨酸雙水解酶，主要用于腸桿菌科，假單胞菌屬及非發(fā)酵菌的鑒定。③ 高壓（） 滅菌15 分鐘后，備用。（六） 葡萄糖蛋白胨水（1）成分蛋白胨 葡萄糖 磷酸氫二鉀 水100 ml（2）制法① 將上述成分混合于水中，加熱溶解后校正pH ～ ，分裝試管。（3）用途 鑒別腸桿菌科細(xì)菌（四） 三糖鐵瓊脂（1）成分多胨或胨 10g牛肉膏 3g氯化鈉 5g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g硫代硫酸鈉 硫酸亞鐵 瓊脂 15g水1000 ml4g／L 酚紅溶液6 ml（2）制法① 除酚紅外，將上述各成分混合。（3）用途 觀察細(xì)菌對糖、醇或苷發(fā)酵能力，用于鑒定細(xì)菌。這種現(xiàn)象發(fā)生的例子如葡萄球菌盒式染色體SCCmec在獲得性耐藥中發(fā)揮了很重要的作用。③結(jié)合擴(kuò)散法和稀釋法原理特點的E試驗。38．糖肽類抗生素的作用機制？肽類抗生素是由氨基酸通過肽鍵連接而成化合物，結(jié)構(gòu)上具有較大異源性，抗菌譜窄，但抗菌作用強，具有腎毒性不良反應(yīng)。他唑巴坦也是半合成酶抑制劑，其抑酶作用范圍