【正文】 菌屬發(fā)酵濾液中提取，能與細(xì)菌核糖體30S亞基發(fā)生不可逆的結(jié)合，抑制MRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成，導(dǎo)致細(xì)菌死亡，同時該類抗生素還能依靠其離子的吸附作用，吸附在菌體的表面，造成細(xì)胞膜的損傷，導(dǎo)致膜的滲漏使胞內(nèi)的K+ 、嘌呤等重要生命物質(zhì)外漏，為殺菌類抗生素。他唑巴坦也是半合成酶抑制劑，其抑酶作用范圍廣，抑制作用優(yōu)于克拉維酸和舒巴坦。34．常用β內(nèi)酰胺酶抑制劑有哪些？又有何區(qū)別？β內(nèi)酰胺酶抑制劑與β內(nèi)酰胺酶有較高的親和性，以競爭性和不可逆的抑制方式發(fā)揮作用，與β內(nèi)酰胺類抗生素聯(lián)用能增強(qiáng)后者的抗菌活性。③質(zhì)粒介導(dǎo)的AMPC酶，常見于克雷伯菌、弗勞地枸椽酸桿菌、陰溝桿菌、奇異變形和蜂房哈夫尼菌等，表現(xiàn)對一代至三代頭孢菌素、頭霉素類、氨基糖苷類耐藥，但對碳青霉烯類、四代頭孢菌素和喹諾酮類敏感。④D群β內(nèi)酰胺酶為苯唑西林酶。31．β內(nèi)酰胺酶的分類及作用機(jī)制是什么？β內(nèi)酰胺酶是一群酶，根據(jù)分子學(xué)結(jié)構(gòu)可將其分為四群。③抗生素作用靶位的改變。?①細(xì)菌產(chǎn)生可破抗生素或使之失去抗菌作用的酶。④穿刺接種法：本法多用于雙糖、半固體或明膠等高層培養(yǎng)基的接種，由培養(yǎng)基中央刺到距管底約半厘米處，然后沿穿刺線退出接種針。常用指示劑有酚紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、溴酚紅、中性紅、中國藍(lán)、甲基紅、酸性復(fù)紅等。27．常用培養(yǎng)基有哪幾種？其成分主要是什么？常用培養(yǎng)基有普通培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和增菌培養(yǎng)基。如果生態(tài)平衡失調(diào)，以至機(jī)體某一部位的正常菌群中各細(xì)菌的比例關(guān)系發(fā)生數(shù)量和質(zhì)量上的變化，稱為菌群失調(diào)。例如皮膚粘膜受傷（特別是大面積燒傷）、身體受涼、過度疲勞、長期消耗性疾病等，可導(dǎo)致正常菌群的自身感染；②由于正常菌群寄居部位的改變，發(fā)生了定位轉(zhuǎn)移，也可引起疾病。②刺激免疫應(yīng)答：正常菌群釋放的內(nèi)毒素等物質(zhì)可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)保持活躍狀態(tài)，是非特異免疫功能的一個不可缺少的組成部分。正常菌群大部分是長期居留于人體的又稱為常居菌，也有少數(shù)微生物是暫時寄居的，稱為過路菌。最后，在已鑒定的細(xì)菌中確定哪種要進(jìn)行抗微生物敏感性試驗(yàn)。核心多糖具有細(xì)菌屬和組的特異性，同一屬和組的細(xì)菌，其核心多糖均相同。L型細(xì)菌的主要意義在于仍有致病性，能引起間質(zhì)性炎癥。菌毛分為普通菌毛及性菌毛兩種，普通菌毛能與宿主細(xì)胞表面的菌毛受體相結(jié)，發(fā)揮粘附作用，而性菌毛中空呈管狀，能在細(xì)菌之間通過接合傳遞遺傳物質(zhì)，故性菌毛與細(xì)菌的遺傳變異有關(guān)。不含有芳香氨基酸和含硫氨基酸。細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、核質(zhì)和胞漿顆粒等。標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送到實(shí)驗(yàn)室，最遲不超過半小時。③疑產(chǎn)婦有宮腔感染，待胎兒娩出后取宮腔分泌物，并同時取嬰兒耳拭子一同送檢。采集標(biāo)本時應(yīng)清洗尿道口，再用無菌拭子擦取尿道口膿性分泌物或深入尿道內(nèi)24厘米取分泌物，檢查精液患者應(yīng)禁欲5天以上，采用體外排精法射精于滅菌容器送檢。②腹瀉病人應(yīng)盡量在急性期采集標(biāo)本（3天以內(nèi)），以提高陽性率。當(dāng)疑為細(xì)菌性痢疾、腸炎、腸結(jié)核和頑固性腹瀉時，應(yīng)在急性期采集，亦最好在用藥之前，以提高檢出率。注意事項(xiàng)：①盡可能在用藥前采集標(biāo)本，采集前一定要作好清洗、消毒工作。13．創(chuàng)傷和化膿性標(biāo)本采集方法是什么？軟組織的急性化膿性炎癥、化膿性疾病、膿腫和創(chuàng)傷感染等疾病可根據(jù)臨床要求取標(biāo)本送檢。注意事項(xiàng)：①標(biāo)本采集應(yīng)在用藥之前。在正常人體中，上述體液均是無菌的，有感染的情況下檢出的細(xì)菌，應(yīng)視為病原菌，應(yīng)給予及時正確的治療。③多數(shù)藥物均通過尿液排泄，因此，無論用何種方法采集尿液均宜在用藥之前進(jìn)行。如反復(fù)檢查為同一細(xì)菌，也應(yīng)考慮為病原菌。采集標(biāo)本前，女性先以肥皂水清洗外陰部，再以滅菌水或1：1000高錳酸鉀水溶液沖洗尿道口，然后排尿棄去前段尿，留取中段尿10ml左右于無菌容器內(nèi)，立即加蓋送檢。④約有1／4～1／2肺部感染患者可能發(fā)生菌血癥，應(yīng)同時作血培養(yǎng)。為了避免污染菌的干擾，最好連查3次。④如不能及時送檢應(yīng)于室溫存放，切勿放冰箱存放。如不能及時送檢，應(yīng)將已注血的培養(yǎng)瓶在室溫存放，并不得超過12小時。若已用抗菌藥物或療效不佳時，在可能條件下停藥24小時后再做血培養(yǎng)。對于不能及時送檢的要用專用運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送，而對一些含有脆弱細(xì)菌的標(biāo)本，需加入特別的保存劑。目前，微生物學(xué)標(biāo)本最常用的抗凝劑是多聚茴香腦磺酸鈉SPS（Sodium polyanethol sulfonate），%(W/V)，否則會抑制一些奈瑟菌和厭氧性鏈球菌的生長。⑤標(biāo)本采集、運(yùn)送過程中要有專人負(fù)責(zé)，避免人為操作失誤。6． 臨床標(biāo)本采集的一般原則是什么？①在最適宜的時間收集標(biāo)本，最好在使用抗生素之前或感染急性期采集。②正確及時的采集標(biāo)本，按要求及時送檢微生物實(shí)驗(yàn)室檢查。④微生物的正確鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。別外，臨床上抗生素的大量濫用，引起了正常菌群失調(diào)和大量耐藥菌株的出現(xiàn)，從而加重了機(jī)體的內(nèi)源性感染機(jī)率，這一定程度又加重了感染性疾病的發(fā)生。②對標(biāo)本中分離到的微生物進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定。1． 臨床微生物學(xué)的概念是什么？臨床微生物學(xué)是研究微生物的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、分類、生命活動規(guī)律的一門科學(xué)，包括細(xì)菌學(xué)、病毒學(xué)、真菌學(xué)等。③進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，解釋和預(yù)報結(jié)果。4． 臨床醫(yī)師主要需要從臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室得到什么？①能為臨床提供醫(yī)學(xué)決策的相關(guān)信息。⑤能快速地報告實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并做出相關(guān)的結(jié)果解釋。③重視實(shí)驗(yàn)室的鑒定及藥敏結(jié)果，結(jié)合臨床患者病情合理使用抗生素。②采集標(biāo)本要有代表性和針對性，不同情況應(yīng)區(qū)別對待，適宜地采取相應(yīng)的方法收集標(biāo)本，如尿液標(biāo)本疑為厭氧菌感染時，應(yīng)行恥骨上緣穿刺術(shù)取膀胱尿培養(yǎng)。⑥采集標(biāo)本不僅要防止被污染，同時也要注意安全，防止傳播和自身感染。肝素也是常用抗凝劑之一，主要用于病毒培養(yǎng)，因?yàn)樗芤种聘锾m氏陽性菌和酵母菌的生長。例如，尿液中加入硼酸能有效地抑制細(xì)菌生長，較好的保持尿液中菌落的數(shù)量；糞便中加入磷酸鹽緩沖液有助于保持糞便中像志賀菌、沙門菌等的脆弱細(xì)菌。連續(xù)做血培養(yǎng)3次，各次采血應(yīng)在不同部位的血管穿刺，禁從靜脈插管內(nèi)抽血。 注意事項(xiàng)：①不能用碘酒消毒瓶蓋，只需70％酒精消毒瓶蓋?！　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　? 　　　　　　　　　 　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　10．采集痰標(biāo)本時應(yīng)注意些什么？當(dāng)疑為呼吸道感染性疾病時，應(yīng)讓患者取晨痰送檢。注意事項(xiàng)：①采集標(biāo)本以清晨為佳，為減少口腔正常菌群污染標(biāo)本，采集前應(yīng)充分漱口。⑤ 對一些特殊患者可采用支氣管鏡采集法及氣管穿刺法取痰。男性先用肥皂水清洗尿道口，后用清水沖洗，就可采集中段尿。必要時可采用膀胱穿刺術(shù)取尿。④尿液中不得含有防腐劑或消毒劑。懷疑為腦膜炎的病人，用腰穿方法采集腦脊液2 ml左右，在常溫下15分鐘內(nèi)送檢。②嚴(yán)格無菌操作，避免污染。對開放性感染和已潰破的化膿灶，標(biāo)本采集前先用滅菌生理鹽水沖洗表面污染菌，再用滅菌拭子采取膿液及病灶深部的分泌物。②不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)放4℃保存；培養(yǎng)淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌的標(biāo)本除外。腸熱癥患者應(yīng)在兩周以后采集。③雖糞便含有多種雜菌，但應(yīng)盡量采用無菌容器。對于女性患者，先用窺器擴(kuò)張陰道，然后用滅菌棉拭子取陰道后穹隆處或?qū)m頸分泌物作培養(yǎng)或涂片鏡檢。④沙眼衣原體在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，采集時盡可能多的取上皮細(xì)胞。標(biāo)本不應(yīng)放在冰箱里，因?yàn)榈蜏貙σ恍﹨捬蹙泻?。除動物?xì)胞無細(xì)胞壁外，各類生物的細(xì)胞具有不同的細(xì)胞壁。革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁薄，除少量肽聚糖構(gòu)成細(xì)胞壁的內(nèi)層外，由大量脂多糖構(gòu)成其外層，并有脂蛋白形成鑲嵌結(jié)構(gòu)，其中含有芳香氨基酸和含硫基酸。莢膜是細(xì)胞壁外的一層多糖物質(zhì)具有抗原性，能抵抗機(jī)體吞噬細(xì)胞的吞噬作用。而且是臨床上感染漏診的主要原因之一。特異性多糖是脂多糖的最外層，構(gòu)成重要的菌體表面抗原，從而決定了種或型的特異性。22．正常菌群的含義是什么？人自出生后，外界的微生物就逐漸進(jìn)入人體。23．正常菌群的生理作用是什么？①生物拮抗作用：正常菌群通過粘附和繁殖能形成一層自然菌膜,是一種非特異性的保護(hù)膜,可促機(jī)體抵抗致病微生物的侵襲及定植,從而對宿主起到一定程度的保護(hù)作用。③合成維生素：有些微生物能合成維生素，如核黃素、生物素、葉酸、吡哆醇及維生素K等，供人體吸收利用。例如大腸桿菌進(jìn)入腹腔或泌尿道，可引起腹膜炎、泌尿道感染。25．引起菌群失調(diào)的原因有哪些？ 菌群失調(diào)的常見誘因主要是抗生素、同位素、激素的不合理使用，另外患有慢性消耗性疾病時腸道、呼吸道、泌尿生殖道的功能失常也是重要原因。培養(yǎng)基的主要成分有氮源、碳源、無機(jī)鹽、水分及一些生長因子，它們主要為細(xì)菌的生長繁殖提供營養(yǎng)和生長環(huán)境。29．標(biāo)本接種技術(shù)有幾種？①平板接種法：初次接種成功后，連繼劃線或分四區(qū)劃線接種。⑤傾注培養(yǎng)法：該法常用液體標(biāo)本的細(xì)菌定量計(jì)數(shù)。如β內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類鈍化酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶等。如細(xì)菌的青霉素結(jié)合蛋白改變，導(dǎo)致對β內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥。①A群β內(nèi)酰胺酶為絲氨酸蛋白酶，主要作用于青霉素類藥物，編碼基因位于染色體或質(zhì)粒上，可從一個細(xì)菌轉(zhuǎn)移至另一個細(xì)菌。大量試驗(yàn)證實(shí)，β內(nèi)酰胺類抗生素和細(xì)胞壁前體的存在都可以誘導(dǎo)β內(nèi)酰胺酶的合成，其作用機(jī)制為β內(nèi)酰胺酶與催化細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖合成的青霉素結(jié)合蛋白空間結(jié)構(gòu)相似，可競爭性水解藥物β內(nèi)酰胺環(huán)使酰胺鍵斷裂而失去抗菌活性，其水解效率是細(xì)菌耐藥性的主要決定因子。④水解碳青霉烯類的β內(nèi)酰胺酶，常見銅綠、鮑曼等非發(fā)酵菌屬，表現(xiàn)以碳青霉烯類和單環(huán)β內(nèi)酰胺類抗生素為代表的多重耐藥。常用β內(nèi)酰胺酶抑制劑有克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦。35．β內(nèi)酰胺類抗生素的作用機(jī)制是什么？青霉素類乃至整個β內(nèi)酰胺類抗生素的作用機(jī)制是阻斷肽聚糖合成的最后階段即肽聚糖鏈的組裝和三維結(jié)構(gòu)的構(gòu)建。與細(xì)胞壁合成抑制藥物聯(lián)合使用時可產(chǎn)生協(xié)同作用，破壞細(xì)胞壁完整性，使藥物易于進(jìn)入菌體而達(dá)到核糖體作用靶位。作用機(jī)制是與肽聚糖合成中間產(chǎn)物D丙氨酰D丙氨酸末端形成復(fù)合物，可阻斷肽聚糖合成過程中轉(zhuǎn)糖基酶、轉(zhuǎn)肽酶及羧肽酶的作用，從而阻止了細(xì)胞壁的合成。②指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理選擇抗生素，可依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整經(jīng)驗(yàn)性治療于靶向治療。④最低殺菌濃度的測定。大的變異是一大段DNA作為一個整體重新排列，這種變化常由在染色體中可以獨(dú)立移動的特殊基因單位，即轉(zhuǎn)座子或插入序列產(chǎn)生。其中SCCmec可稱為抗生素耐藥島：它包含對甲氧西林產(chǎn)生耐藥的mecA基因，有的SCCmec還包含對非β內(nèi)酰胺抗生素和重金屬產(chǎn)生耐藥的質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子。② 高壓（） 滅菌15 分鐘，備用。（二） 氧化－發(fā)酵（O －F） 培養(yǎng)基（1）成分蛋白胨 2g氯化鈉 5gK2HPO4 葡萄糖 10g2g／L 溴麝香草酚藍(lán)溶液12 ml水1000 ml（2）制法① 將蛋白胨、鹽類加水溶解后，校正pH 。（三） 克氏鐵瓊脂（1）成分蛋白胨或多胨　20g牛肉膏 3g酵母浸膏 3g乳糖 10g葡萄糖 1g氯化鈉 5g拘櫞酸鐵銨 硫代硫酸鈉 瓊脂 14g酚紅 水1000 ml（2）制法① 將上述各成分（酚紅除外） 混合，加熱溶解，校正p H ，加入酚紅。加熱溶解，校正p H ，加入酚紅。（五） 胰蛋白胨水（1）成分胰胨或其他含色氨酸豐富的胨 1g氯化鈉 水100 ml（2）制法① 將胰胨、氯化鈉加入水后，加熱溶解，校正pH ～ ，分裝試管。② 高壓（） 滅菌15 分鐘即成。（3）用途 細(xì)菌構(gòu)櫞酸鹽及無機(jī)銨利用試驗(yàn)用。（3）用途 鑒別腸桿菌科及弧菌科細(xì)菌用。（十）Thornley 精氨酸培養(yǎng)基（1）成分L －蛋白胨 氯化鈉 K2HPO4 水100 ml（2）制法① 將上述成分（酚紅除外） 混合加熱溶解后，校正pH ～ ，加入酚紅混勻，分裝小試管。（十一） 甘油品紅培養(yǎng)基（1）成分牛肉膏10g蛋白胨20g水1000 ml甘油1 ml100g／L ml100g／L 無水亞硫酸鈉水溶液（新鮮配制） ml（2）制法① 將牛肉膏、蛋白胨、水加熱溶解后，校正pH ，加入甘油混勻。（十二） 馬尿酸鈉培養(yǎng)基（1）成分馬尿酸鈉　1g肉浸液（）100 ml（2）制法① 將馬尿酸鈉溶于肉浸液內(nèi)，分裝于小試管內(nèi)。細(xì)菌分解糖類后形成的代謝產(chǎn)物隨細(xì)菌種類而異，有的產(chǎn)酸，有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣。雙糖類有乳糖、麥芽糖、蕈糖等。（4）結(jié)果能分解糖產(chǎn)酸的細(xì)菌，培養(yǎng)基中指示劑是否呈現(xiàn)酸性反應(yīng)。可依據(jù)細(xì)菌分解糖的能力各異而區(qū)分和識別不同的細(xì)菌。能在無氧環(huán)境中不能分解葡萄糖，稱為氧化型。不分解葡萄糖的細(xì)菌稱產(chǎn)堿型。兩管培養(yǎng)基均變黃色為發(fā)酵型，若加液體石蠟的一管顏色不變而另一管變黃色為氧化型，兩管均不變色為產(chǎn)堿型。（三） 七葉苷水解試驗(yàn)（1）原理七葉苷經(jīng)細(xì)菌水解生成七葉素，七葉素能與培養(yǎng)基中構(gòu)櫞酸鐵的二價鐵離子結(jié)合生成黑色的化合物，使培養(yǎng)基變黑。也可用于革蘭氏陰性桿菌和厭氧菌的鑒別試驗(yàn)。試劑可用盧戈碘液或革蘭染液中的碘液。（五）β半乳糖苷酶試驗(yàn)（1）原理某些細(xì)菌具有β半乳糖苷酶，該酶可分解鄰－ 硝基苯－β－D － 半乳糖苷(ONPG)，生成黃色的鄰硝基酚。（4）應(yīng)用此試驗(yàn)是測定不發(fā)酵或遲發(fā)酵乳糖的細(xì)菌是否產(chǎn)生半乳糖苷酶。迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG 為陽性，如埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬。某些細(xì)菌雖能分解葡萄糖，但產(chǎn)酸量少，培養(yǎng)基酸堿度在pH 以上，加入甲基紅指示劑呈黃色。（3）結(jié)果紅色為陽性，橘紅色為弱陽性,黃色為陰性。（七） VP 試驗(yàn)（4）原理某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，并進(jìn)一步脫羧成為乙酰甲基甲醇。（3）試劑 ：氫氧化鉀40g 溶于水10 ml ，加肌酸0．3g 。在培養(yǎng)液2 ml ml ，置50℃水浴中2小時或37 ℃4小時，充分振搖，觀察結(jié)果。（5）結(jié)果 呈紅色為陽性。大腸埃希菌VP陰性而產(chǎn)氣腸桿菌陽性。將未接種的培養(yǎng)基在35℃培養(yǎng)，作為對照。（2）試劑柯凡克（Kovac）試劑：對二甲基氨基苯甲醛5g ，戊醇75 ml ，濃鹽酸50 ml 。（3）方法將細(xì)菌接種于蛋白陳水培養(yǎng)基中，置35℃培養(yǎng)1 ～2 天， ml ，試劑浮于培養(yǎng)基之上，使成兩層，即刻觀察結(jié)