【正文】 1． 臨床微生物學(xué)的概念是什么？臨床微生物學(xué)是研究微生物的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、分類、生命活動規(guī)律的一門科學(xué)，包括細(xì)菌學(xué)、病毒學(xué)、真菌學(xué)等。是臨床醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)之一，指導(dǎo)感染性疾病的診斷、治療和預(yù)防。2．臨床微生物學(xué)實驗檢查大概分幾步驟？①從患者標(biāo)本分離培養(yǎng)微生物。②對標(biāo)本中分離到的微生物進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定。③進(jìn)行藥物敏感性試驗，解釋和預(yù)報結(jié)果。④階段性分析藥物敏感性實驗，預(yù)測耐藥趨勢，監(jiān)控和指導(dǎo)臨床合理用藥。3． 什么是感染性疾病及影響因素？凡是由病原微生物引起的疾病統(tǒng)稱為感染性疾病，而感染性疾病的發(fā)生主要與病原體的侵襲力及宿主的抵抗力密切相關(guān)。別外，臨床上抗生素的大量濫用，引起了正常菌群失調(diào)和大量耐藥菌株的出現(xiàn)，從而加重了機(jī)體的內(nèi)源性感染機(jī)率，這一定程度又加重了感染性疾病的發(fā)生。4． 臨床醫(yī)師主要需要從臨床微生物學(xué)實驗室得到什么？①能為臨床提供醫(yī)學(xué)決策的相關(guān)信息。②指導(dǎo)臨床正確收集標(biāo)本的原則。③安全及時的送檢標(biāo)本。④微生物的正確鑒定和藥物敏感性試驗結(jié)果。⑤能快速地報告實驗結(jié)果，并做出相關(guān)的結(jié)果解釋。⑥能及時反饋醫(yī)院內(nèi)細(xì)菌感染分布、耐藥狀況和流行趨勢等。 5． 臨床醫(yī)師應(yīng)如何避免感染性疾病的爆發(fā)流行？①遵循病原學(xué)診斷，避免無指癥用藥。②正確及時的采集標(biāo)本，按要求及時送檢微生物實驗室檢查。③重視實驗室的鑒定及藥敏結(jié)果，結(jié)合臨床患者病情合理使用抗生素。④注意經(jīng)驗性治療與靶向治療相結(jié)合，依據(jù)病原學(xué)診斷及時調(diào)整治療方案，改為針對性治療。⑤加強(qiáng)同臨床微生物實驗室交流溝通，積極配合實驗室做好院內(nèi)感染監(jiān)測、預(yù)防和控制工作。6． 臨床標(biāo)本采集的一般原則是什么？①在最適宜的時間收集標(biāo)本，最好在使用抗生素之前或感染急性期采集。②采集標(biāo)本要有代表性和針對性，不同情況應(yīng)區(qū)別對待，適宜地采取相應(yīng)的方法收集標(biāo)本，如尿液標(biāo)本疑為厭氧菌感染時，應(yīng)行恥骨上緣穿刺術(shù)取膀胱尿培養(yǎng)。③采集標(biāo)本必須來自實際感染的部位，嚴(yán)格無菌操作盡可能避免外源性污染。④收集標(biāo)本應(yīng)當(dāng)使用合適的收集器材、容器和培養(yǎng)基，以保證最大限度的發(fā)現(xiàn)微生物。⑤標(biāo)本采集、運送過程中要有專人負(fù)責(zé)，避免人為操作失誤。⑥采集標(biāo)本不僅要防止被污染，同時也要注意安全，防止傳播和自身感染。7．采集過程中需要加抗凝劑的標(biāo)本應(yīng)注意什么？對任何容易形成凝塊的標(biāo)本都應(yīng)使用抗凝劑，因為如微生物被已凝固的物質(zhì)包圍，生長較困難。另外，像胸水、腹水等液體標(biāo)本一旦凝固，很難接種培養(yǎng)，直接影響微生物的培養(yǎng)鑒定。目前，微生物學(xué)標(biāo)本最常用的抗凝劑是多聚茴香腦磺酸鈉SPS（Sodium polyanethol sulfonate），%(W/V)，否則會抑制一些奈瑟菌和厭氧性鏈球菌的生長。肝素也是常用抗凝劑之一，主要用于病毒培養(yǎng)，因為它能抑制革蘭氏陽性菌和酵母菌的生長。檸檬酸鹽和乙二胺四乙酸通常不用于微生物學(xué)標(biāo)本。8． 標(biāo)本運送過程中應(yīng)注意些什么？標(biāo)本采集后，除了要及時送檢外，另外在運送過程中要注意盡量保持標(biāo)本的原有性狀。對于不能及時送檢的要用專用運送培養(yǎng)基運送，而對一些含有脆弱細(xì)菌的標(biāo)本，需加入特別的保存劑。例如，尿液中加入硼酸能有效地抑制細(xì)菌生長，較好的保持尿液中菌落的數(shù)量；糞便中加入磷酸鹽緩沖液有助于保持糞便中像志賀菌、沙門菌等的脆弱細(xì)菌。此外，甲醛溶液、紹丁溶液有助于保存寄生蟲的滋養(yǎng)體和包囊，使其維持便于識別的形態(tài)。9． 如何采集血液標(biāo)本及注意事項？疑為菌血癥或敗血癥時，一般情況下應(yīng)在病人發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時采集，原則上應(yīng)在抗菌治療前盡早取血做細(xì)菌培養(yǎng)。若已用抗菌藥物或療效不佳時，在可能條件下停藥24小時后再做血培養(yǎng)。連續(xù)做血培養(yǎng)3次，各次采血應(yīng)在不同部位的血管穿刺，禁從靜脈插管內(nèi)抽血。當(dāng)骨髓炎時或長期使用抗菌藥物患者，抽取骨髓培養(yǎng)陽性率會遠(yuǎn)高于血液培養(yǎng)。對成人每瓶血培養(yǎng)應(yīng)采血8～10ml，嬰兒為1～2ml，兒童3～5 ml，骨髓為1～2 ml。如不能及時送檢，應(yīng)將已注血的培養(yǎng)瓶在室溫存放，并不得超過12小時。 注意事項：①不能用碘酒消毒瓶蓋，只需70％酒精消毒瓶蓋。②嚴(yán)格作好患者抽血部位的無菌操作。③同時作厭氧和需氧培養(yǎng)時應(yīng)先將標(biāo)本接種到厭氧瓶中，然后再注入需氧瓶，嚴(yán)格防止將空氣注入?yún)捬跗恐?。④如不能及時送檢應(yīng)于室溫存放，切勿放冰箱存放?！　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　? 　　　　　　　　　 　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　10．采集痰標(biāo)本時應(yīng)注意些什么？當(dāng)疑為呼吸道感染性疾病時，應(yīng)讓患者取晨痰送檢。取痰前用清水反復(fù)漱口后用力自氣管咳出第一口痰于滅菌容器內(nèi)，立即送檢。對于痰量少或無痰的患者可采用支氣管鏡或氣管穿刺法取得。為了避免污染菌的干擾，最好連查3次。注意事項：①采集標(biāo)本以清晨為佳，為減少口腔正常菌群污染標(biāo)本，采集前應(yīng)充分漱口。②取痰標(biāo)本應(yīng)是深部的痰液而不是唾液，否則會影響檢查結(jié)果。③作結(jié)核分枝桿菌檢查，痰量要多或留取24小時痰液，嬰兒肺結(jié)核要用胃管取痰。④約有1／4～1／2肺部感染患者可能發(fā)生菌血癥，應(yīng)同時作血培養(yǎng)。⑤ 對一些特殊患者可采用支氣管鏡采集法及氣管穿刺法取痰。11．如何采集尿液標(biāo)本及注意事項？臨床上有泌尿系統(tǒng)感染、腎結(jié)核、結(jié)石和無癥狀性菌尿等疾病指征時，通常應(yīng)采集晨起第一次尿液（中段尿）送檢。原則上應(yīng)選擇在抗菌治療前采集，若已用藥應(yīng)停藥一周后采集尿液送檢。采集標(biāo)本前，女性先以肥皂水清洗外陰部，再以滅菌水或1：1000高錳酸鉀水溶液沖洗尿道口，然后排尿棄去前段尿，留取中段尿10ml左右于無菌容器內(nèi)，立即加蓋送檢。男性先用肥皂水清洗尿道口，后用清水沖洗，就可采集中段尿。包皮過長者，為防止污染，可將包皮翻開沖洗，再取中段尿。疑為尿道炎時，可將最初3～4ml尿收集在滅菌容器中。如反復(fù)檢查為同一細(xì)菌，也應(yīng)考慮為病原菌。必要時可采用膀胱穿刺術(shù)取尿。注意事項：①尿液標(biāo)本的采集和培養(yǎng)中最大的問題是污染雜菌，故應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作。②尿液標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢（1－2小時內(nèi)），否則會影響細(xì)菌檢查的正確性。③多數(shù)藥物均通過尿液排泄，因此，無論用何種方法采集尿液均宜在用藥之前進(jìn)行。④尿液中不得含有防腐劑或消毒劑。⑤疑為結(jié)核分枝桿菌時，可用清潔容器，留24小時尿取其沉渣10～15 ml送檢。12．穿刺液包括哪些？采集中應(yīng)注意些什么？穿刺液主要包括腦脊液、膽汁、胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等。在正常人體中，上述體液均是無菌的，有感染的情況下檢出的細(xì)菌，應(yīng)視為病原菌，應(yīng)給予及時正確的治療。懷疑為腦膜炎的病人，用腰穿方法采集腦脊液2 ml左右，在常溫下15分鐘內(nèi)送檢。標(biāo)本不可置冰箱內(nèi)保存，否則會使病原菌死亡。膽汁及其它穿刺液采集到無菌針管或無菌試管內(nèi)立即送檢。注意事項：①標(biāo)本采集應(yīng)在用藥之前。②嚴(yán)格無菌操作，避免污染。③作腦脊液培養(yǎng)時，建議同時作血培養(yǎng)。④為防止穿刺液的凝固，最好在無菌試管中先加入滅菌肝素。13．創(chuàng)傷和化膿性標(biāo)本采集方法是什么？軟組織的急性化膿性炎癥、化膿性疾病、膿腫和創(chuàng)傷感染等疾病可根據(jù)臨床要求取標(biāo)本送檢。對開放性感染和已潰破的化膿灶，標(biāo)本采集前先用滅菌生理鹽水沖洗表面污染菌，再用滅菌拭子采取膿液及病灶深部的分泌物。如為慢性感染，污染嚴(yán)重，很難分離到致病菌，　　可取感染部位下的組織，研磨成組織勻漿后送檢。閉鎖性膿腫可行手術(shù)引流或穿刺法取標(biāo)　本于滅菌容器或滅菌注射器內(nèi)送檢。注意事項：①盡可能在用藥前采集標(biāo)本，采集前一定要作好清洗、消毒工作。②不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)放4℃保存；培養(yǎng)淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌的標(biāo)本除外。③深部膿腫常由包括厭氧菌在內(nèi)的混合細(xì)菌感染所致, 若有條件應(yīng)作厭氧菌培養(yǎng)，采集標(biāo)本應(yīng)遵守厭氧菌感染標(biāo)本的采集原則。14．糞便標(biāo)本培養(yǎng)應(yīng)如何采集？腹瀉為大便送檢的重要指征，嬰幼兒和小兒可見高熱驚厥。當(dāng)疑為細(xì)菌性痢疾、腸炎、腸結(jié)核和頑固性腹瀉時，應(yīng)在急性期采集，亦最好在用藥之前，以提高檢出率。腸熱癥患者應(yīng)在兩周以后采集。采用自然排便法或直腸拭子法，挑取有膿血，粘液部位的糞便2－3ｇ置于無菌容器中送檢。注意事項：①為提高檢出率，要采集新鮮糞便作培養(yǎng)。②腹瀉病人應(yīng)盡量在急性期采集標(biāo)本（3天以內(nèi)），以提高陽性率。③雖糞便含有多種雜菌，但應(yīng)盡量采用無菌容器。15．生殖道標(biāo)本的采集原則和注意事項是什么？ 當(dāng)疑為生殖道感染性疾病時，首先排除是否有不潔性交史，然后根據(jù)癥狀確定檢查方向。對于男性患者來講，先檢查尿道是否有膿性分泌物，再依次是前列腺液、精液。采集標(biāo)本時應(yīng)清洗尿道口，再用無菌拭子擦取尿道口膿性分泌物或深入尿道內(nèi)24厘米取分泌物，檢查精液患者應(yīng)禁欲5天以上，采用體外排精法射精于滅菌容器送檢。對于女性患者，先用窺器擴(kuò)張陰道，然后用滅菌棉拭子取陰道后穹隆處或?qū)m頸分泌物作培養(yǎng)或涂片鏡檢。注意事項：①生殖器是開放性器官，標(biāo)本采集過程中應(yīng)遵循無菌操作以減少雜菌污染。②陰道內(nèi)有大量正常菌群存在，采取宮頸標(biāo)本應(yīng)避免觸及陰道壁。③疑產(chǎn)婦有宮腔感染，待胎兒娩出后取宮腔分泌物，并同時取嬰兒耳拭子一同送檢。④沙眼衣原體在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，采集時盡可能多的取上皮細(xì)胞。16．哪些標(biāo)本不能作厭氧菌培養(yǎng)及如何運送標(biāo)本？痰、支氣管鏡采樣(無特殊保護(hù)套)、咽拭子、排出的尿及陰道拭子不能做厭氧菌培養(yǎng)，糞便標(biāo)本厭氧菌培養(yǎng)，只能做難辨梭菌的培養(yǎng)。在運送中最常用的是注射器運送法，此外還有無氧小瓶運送法、棉拭運送法、組織塊運送法、大量標(biāo)本運送法。標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送到實驗室，最遲不超過半小時。標(biāo)本不應(yīng)放在冰箱里，因為低溫對一些厭氧菌有害。17．細(xì)菌的超微形態(tài)及革蘭氏陽性和陰性菌的區(qū)別如何？細(xì)菌是一類原核細(xì)胞型微生物，體積微小，基本形態(tài)有球形、桿形和螺形三種。之所以稱原核是指其核則不是一個具體的結(jié)構(gòu)，沒有核膜。細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、核質(zhì)和胞漿顆粒等。除動物細(xì)胞無細(xì)胞壁外，各類生物的細(xì)胞具有不同的細(xì)胞壁。例如，植物的細(xì)胞壁由纖維素構(gòu)成，霉菌的細(xì)胞壁則為幾丁質(zhì)，細(xì)菌細(xì)胞壁的成分為肽聚糖、垣酸和脂多糖。革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁厚，肽聚糖骨架通過四肽側(cè)鏈和五肽橋連接成為三維空間。不含有芳香氨基酸和含硫氨基酸。革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁薄，除少量肽聚糖構(gòu)成細(xì)胞壁的內(nèi)層外，由大量脂多糖構(gòu)成其外層，并有脂蛋白形成鑲嵌結(jié)構(gòu)，其中含有芳香氨基酸和含硫基酸。18．細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)都有哪些？其功能是什么？細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)主要有鞭毛、菌毛、莢膜和芽胞。鞭毛是細(xì)菌的運動器官，由簡單的角蛋白–肌蛋白組成。菌毛分為普通菌毛及性菌毛兩種，普通菌毛能與宿主細(xì)胞表面的菌毛受體相結(jié)，發(fā)揮粘附作用，而性菌毛中空呈管狀，能在細(xì)菌之間通過接合傳遞遺傳物質(zhì)，故性菌毛與細(xì)菌的遺傳變異有關(guān)。莢膜是細(xì)胞壁外的一層多糖物質(zhì)具有抗原性，能抵抗機(jī)體吞噬細(xì)胞的吞噬作用。芽胞是某些細(xì)菌的繁殖體，在一定環(huán)境條件下，由于胞漿脫水濃縮而成一個圓形或卵圓形小體，具有多層膜結(jié)構(gòu)，對外界理化因素抵抗力強(qiáng)，可潛伏數(shù)年或幾十后重新繁殖生長。19．什么是L型細(xì)菌？其形成原因？L型細(xì)菌是一類細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌，形態(tài)各異大小不一，染色時不易著色，且著色不均勻，革蘭陽性菌和革蘭陰性菌均可形成，又稱為“原生質(zhì)體和原生質(zhì)球”，凡能破壞肽聚糖結(jié)構(gòu)都可誘導(dǎo)細(xì)菌形成L型，其表現(xiàn)為具有明顯的多形性，革蘭染色陰性，能通過細(xì)菌濾器，對滲透壓敏感。L型細(xì)菌的主要意義在于仍有致病性，能引起間質(zhì)性炎癥。而且是臨床上感染漏診的主要原因之一。20．脂多糖由哪幾部分組成？其功能是什么？脂多糖是由類脂和多糖組成，是革蘭陰性菌的內(nèi)毒素，包括類脂A、核心多糖和特異多糖等三部分。類脂A是內(nèi)毒素的毒性分子，與細(xì)菌的致病性有關(guān)，無種屬特異性，故不同的革蘭陰性菌感染時，其毒性大致相同。核心多糖具有細(xì)菌屬和組的特異性，同一屬和組的細(xì)菌，其核心多糖均相同。特異性多糖是脂多糖的最外層，構(gòu)成重要的菌體表面抗原，從而決定了種或型的特異性。21．如何才能更好的發(fā)現(xiàn)和鑒定微生物？首先，選擇適合特定標(biāo)本類型的初次培養(yǎng)基，為了發(fā)現(xiàn)所有潛在的重要致病菌，還應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)姆跤郎囟群蜌怏w。其次，對初次培養(yǎng)基上所發(fā)現(xiàn)的分離物應(yīng)確定它們進(jìn)一步鑒定的內(nèi)容。最后，在已鑒定的細(xì)菌中確定哪種要進(jìn)行抗微生物敏感性試驗。22．正常菌群的含義是什么？人自出生后，外界的微生物就逐漸進(jìn)入人體。在正常人體皮膚、粘膜及外界相通的各種通道（如口腔、鼻咽腔、腸道和泌尿道）等部位，存在著對人體無害的微生物群，包括細(xì)菌、真菌、螺旋體、支原體等。它們在與宿主的長期進(jìn)化過程中，微生物群的內(nèi)部及其與宿主之間互相依存、互相制約，形成一個能進(jìn)行物質(zhì)、能量及基因交流的動態(tài)平衡的生態(tài)系統(tǒng)習(xí)慣稱之為正常菌群（Normal flora）。正常菌群大部分是長期居留于人體的又稱為常居菌，也有少數(shù)微生物是暫時寄居的，稱為過路菌。23．正常菌群的生理作用是什么？①生物拮抗作用：正常菌群通過粘附和繁殖能形成一層自然菌膜,是一種非特異性的保護(hù)膜,可促機(jī)體抵抗致病微生物的侵襲及定植,從而對宿主起到一定程度的保護(hù)作用。正常菌群除與病原菌爭奪營養(yǎng)物質(zhì)和空間位置外，還可以通過其代謝產(chǎn)物以及產(chǎn)生抗生素、細(xì)菌素等起作用?？梢哉f正常菌群是人體防止外襲菌侵入的生物屏障。②刺激免疫應(yīng)答：正常菌群釋放的內(nèi)毒素等物質(zhì)可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)保持活躍狀態(tài)，是非特異免疫功能的一個不可缺少的組成部分。③合成維生素：有些微生物能合成維生素，如核黃素、生物素、葉酸、吡哆醇及維生素K等，供人體吸收利用。④降解食物殘渣：腸道中正常菌群可互相配合，降解末被人體消化食物殘渣，便于機(jī)體進(jìn)一步吸收。24．什么是條件致病菌和菌群失調(diào)？在一定條件下，正常菌群中的細(xì)菌也能使人患?。孩儆捎跈C(jī)體的防衛(wèi)功能減弱,引起自身感染。例如皮膚粘膜受傷（特別是大面積燒傷）、身體受涼、過度疲勞、長期消耗性疾病等，可導(dǎo)致正常菌群的自身感染；②由于正常菌群寄居部位的改變，發(fā)生了定位轉(zhuǎn)移，也可引起疾病。例如大腸桿菌進(jìn)入腹腔或泌尿道，可引起腹膜炎、泌尿道感染。因此，這些細(xì)菌稱為條件致病菌。在正常情況下，人體和正常菌群之間以及正常菌群中各細(xì)菌之間，保持一定的生態(tài)平衡。如果生態(tài)平衡失調(diào)，以至機(jī)體某一部位的正常菌群中各細(xì)菌的比例關(guān)系發(fā)生數(shù)量和質(zhì)量上的變化，稱為菌群失調(diào)。25．引起菌群失調(diào)的原因有哪些？ 菌群失調(diào)的常見誘因主要是抗生素、同位素、激素的不合理使用，另外患有慢性消耗性疾病時腸道、呼吸道、泌尿生殖道的功能失常也是重要原因。去除誘因后一般可使