【正文】 是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶。（3）應(yīng)用葡萄球菌和微球菌屬呈陽性，鏈球菌和腸球菌呈陰性。（2）方法挑取純培養(yǎng)菌落1接種環(huán)，置于潔凈的玻片上或小試管內(nèi)，滴加適量3％過氧化氫溶液。（4）應(yīng)用B群鏈球菌能分解馬尿酸鹽，呈陽性反應(yīng)，其他鏈球菌為陰性。氨、二氧化碳與殘留的茚三酮起反應(yīng)，形成紫色化合物。（4）應(yīng)用B群鏈球菌能分解馬尿酸鹽，呈陽性反應(yīng)，其他鏈球菌為陰性。（2）方法將細菌接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基中，置35℃ 培養(yǎng)48小時后，離心沉淀， ， ，立即混勻，經(jīng)10 ～15 分鐘觀察結(jié)果。克雷伯菌屬和亞利桑那菌為陽性，腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬有不同生物型反應(yīng)，其他菌屬為陰性。（3）結(jié)果培養(yǎng)基由綠色變成藍色為陽性，無顏色改變是陰性。（二） 丙二酸鹽利用試驗（1）原理細菌能利用丙二酸鹽作為惟一碳源時，則能分解丙二酸鈉生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性。埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬、耶爾森菌屬為陰性，枸櫞酸桿菌、沙門菌、克雷伯菌屬、沙雷菌為陽性?？率翔蹤此崤囵B(yǎng)基斜面變紅色為陽性，保持淡黃色不變色為陰性。（2）方法將細菌接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基的斜面上，在35℃培養(yǎng)1～4天，每天觀察培養(yǎng)基顏色變化。（3）結(jié)果培養(yǎng)基轉(zhuǎn)為紅色為陽性。氨和腐胺可使培養(yǎng)基變堿，酚紅指示劑隨之變紅色。（七） 精氨酸雙水解試驗（1）原理某些細菌可降解精氨酸為瓜氨酸和胺，瓜氨酸可降解為鳥氨酸、氨和二氧化碳。對照管應(yīng)為黃色。在35℃培養(yǎng)4日觀察結(jié)果。（2）培養(yǎng)基最常用的有3 種：賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基、鳥氨酸脫羧酶培養(yǎng)基、精氨酸脫羧酶培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基?？捎糜谀c桿菌科細菌的鑒定。（4）應(yīng)用本試驗特異性較高。立即觀察結(jié)果,延長反應(yīng)時間會引起退色。（2）方法將待檢細菌大量接種于苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基斜面,在35℃培養(yǎng)過夜。如陰溝腸桿菌、奇異變形桿菌、沙雷菌、銅綠假單胞菌等為陽性。明膠平板法菌落周圍出現(xiàn)透明帶為陽性。明膠平板法：在營養(yǎng)瓊脂中加入1 ％明膠傾注平板，可分成4 個區(qū)，每區(qū)劃線接種1種細菌，經(jīng)1 ～2 天培養(yǎng)，在培養(yǎng)基表面加氯化汞溶液（氫化汞12g ， 水80ml ，濃鹽酸16ml），在菌落周圍出現(xiàn)透明帶，表示細菌液化明膠。（2）方法將細菌接種于明膠培養(yǎng)基，在20℃ 培養(yǎng)7天，每天觀察結(jié)果。其中變形桿菌、克雷伯菌、摩氏摩根菌、和結(jié)腸耶爾森菌、雷極普羅菲登斯菌為陽性。（2）方法將細菌接種于尿素培養(yǎng)基，置35℃過夜培養(yǎng)觀察結(jié)果，陰性反應(yīng)者應(yīng)觀察4 天。此外，腐敗謝爾瓦菌是非發(fā)酵菌中唯一能產(chǎn)生硫化氫的細菌。（3）應(yīng)用主要用于腸桿菌鑒別。（3）結(jié)果醋酸鉛培養(yǎng)基變黑色為陽性，不變色為陰性。（2）方法將細菌接種于醋酸鉛培養(yǎng)基或克氏鐵、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基中，置35℃培養(yǎng)24～48小時，但惟赫夫尼亞菌需培養(yǎng)7天。如黃桿菌。（5）應(yīng)用主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。（3）方法將細菌接種于蛋白陳水培養(yǎng)基中，置35℃培養(yǎng)1 ～2 天， ml ，試劑浮于培養(yǎng)基之上，使成兩層，即刻觀察結(jié)果。歐氏（Ehrlich） 試劑：對二甲基氨基苯甲醛4g ，95 ％乙醇380 ml ，濃鹽酸80 ％ml 。（2）試劑柯凡克（Kovac）試劑：對二甲基氨基苯甲醛5g ，戊醇75 ml ，濃鹽酸50 ml 。（4）應(yīng)用 主要用于沙門菌屬菌種間的鑒別。將未接種的培養(yǎng)基在35℃培養(yǎng)，作為對照。（八） 甘油復(fù)紅試驗（1）原理細菌分解甘油產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧而為乙醛，乙醛與無色的復(fù)紅生成醌式化合物，顯紫紅色。大腸埃希菌VP陰性而產(chǎn)氣腸桿菌陽性?？蓞^(qū)別腸桿菌科細菌。（5）結(jié)果 呈紅色為陽性。在培養(yǎng)液2 ml 中加入貝立脫試劑甲液1 ml ml ，混合后置37℃中30分鐘觀察結(jié)果。在培養(yǎng)液2 ml ml ，置50℃水浴中2小時或37 ℃4小時，充分振搖，觀察結(jié)果。乙液：40 ％氫氧化鉀。（3）試劑 ：氫氧化鉀40g 溶于水10 ml ，加肌酸0．3g 。若培養(yǎng)基內(nèi)含胍基太少，可加入少量肌酸、肌酐等含胍基的化合物，可加速此反應(yīng)。（七） VP 試驗（4）原理某些細菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，并進一步脫羧成為乙酰甲基甲醇。沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、埃希菌屬為陽性，腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬為陰性。（3）結(jié)果紅色為陽性，橘紅色為弱陽性,黃色為陰性。（2）方法將細菌接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，置35 ℃培養(yǎng)2～4天。某些細菌雖能分解葡萄糖，但產(chǎn)酸量少，培養(yǎng)基酸堿度在pH 以上，加入甲基紅指示劑呈黃色?？捎帽驹囼炞鳛檫t緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定方法。迅速及遲緩分解乳糖的細菌ONPG 為陽性，如埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬。當缺乏滲透酶時，乳糖不能進入細胞，乳糖分解就不能進行。（4）應(yīng)用此試驗是測定不發(fā)酵或遲發(fā)酵乳糖的細菌是否產(chǎn)生半乳糖苷酶。（3）結(jié)果出現(xiàn)黃色為陽性反應(yīng)，不變色為陰性反應(yīng)。（五）β半乳糖苷酶試驗（1）原理某些細菌具有β半乳糖苷酶，該酶可分解鄰－ 硝基苯－β－D － 半乳糖苷(ONPG)，生成黃色的鄰硝基酚。（3）結(jié)果菌落周圍出現(xiàn)透明區(qū)，而其他部位培養(yǎng)基呈藍色為陽性。試劑可用盧戈碘液或革蘭染液中的碘液。加碘液后，菌落周圍形成無色透明區(qū)。也可用于革蘭氏陰性桿菌和厭氧菌的鑒別試驗。（3）結(jié)果 細菌生長并使培養(yǎng)基變黑為陽性。（三） 七葉苷水解試驗（1）原理七葉苷經(jīng)細菌水解生成七葉素，七葉素能與培養(yǎng)基中構(gòu)櫞酸鐵的二價鐵離子結(jié)合生成黑色的化合物，使培養(yǎng)基變黑。如腸桿菌科細菌都是發(fā)酵型細菌，絕大多數(shù)的非發(fā)酵菌為氧化型或產(chǎn)堿型細菌。兩管培養(yǎng)基均變黃色為發(fā)酵型，若加液體石蠟的一管顏色不變而另一管變黃色為氧化型，兩管均不變色為產(chǎn)堿型。然后將兩支培養(yǎng)管置35 ℃孵育48 小時后觀察結(jié)果。不分解葡萄糖的細菌稱產(chǎn)堿型。發(fā)酵型細菌在有氧和無氧的環(huán)境中都能分解葡萄糖。能在無氧環(huán)境中不能分解葡萄糖，稱為氧化型。腦膜炎球菌能分解葡萄糖和麥芽糖，而淋球菌只能分解葡萄糖，不分解麥芽糖。可依據(jù)細菌分解糖的能力各異而區(qū)分和識別不同的細菌。產(chǎn)氣可使半固體培養(yǎng)基內(nèi)或液體培養(yǎng)基中的倒置小管內(nèi)出現(xiàn)氣泡，固體培養(yǎng)基則出現(xiàn)裂痕。（4）結(jié)果能分解糖產(chǎn)酸的細菌，培養(yǎng)基中指示劑是否呈現(xiàn)酸性反應(yīng)。醇類包括甘露醇、甘油、側(cè)金盞花醇、衛(wèi)矛醇、山梨醇、肌醇等。雙糖類有乳糖、麥芽糖、蕈糖等。（2）種類種類很多。細菌分解糖類后形成的代謝產(chǎn)物隨細菌種類而異，有的產(chǎn)酸，有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣。（3）用途 鑒定B 群鏈球菌用。（十二） 馬尿酸鈉培養(yǎng)基（1）成分馬尿酸鈉　1g肉浸液（）100 ml（2）制法① 將馬尿酸鈉溶于肉浸液內(nèi)，分裝于小試管內(nèi)。③ 臨用時，加入堿性品紅及亞硫酸鈉液，分裝試管。（十一） 甘油品紅培養(yǎng)基（1）成分牛肉膏10g蛋白胨20g水1000 ml甘油1 ml100g／L ml100g／L 無水亞硫酸鈉水溶液（新鮮配制） ml（2）制法① 將牛肉膏、蛋白胨、水加熱溶解后，校正pH ，加入甘油混勻。③ 同時配制不含精氨酸的培養(yǎng)基作為對照。（十）Thornley 精氨酸培養(yǎng)基（1）成分L －蛋白胨 氯化鈉 K2HPO4 水100 ml（2）制法① 將上述成分（酚紅除外） 混合加熱溶解后，校正pH ～ ，加入酚紅混勻，分裝小試管。② 高壓（68．95kPa） 滅菌15 分鐘，備用。（3）用途 鑒別腸桿菌科及弧菌科細菌用。② 分裝小試管， ～ ml ，于每管內(nèi)加入液體石蠟一層（約5 m m）。（3）用途 細菌構(gòu)櫞酸鹽及無機銨利用試驗用。（七） 構(gòu)櫞酸鹽培養(yǎng)基（1）成分枸櫞酸鈉（含2 H2O） 硫酸鎂（含7 H2O） 磷酸二氫銨 磷酸氫二鉀 氯化鈉 瓊脂 2g水100 ml2g／L 溴麝香草酚藍乙醇溶液4 ml（2）制法① 將上述各成分（溴麝香草酚藍除外） 混合加熱溶解， 校正p H ，再加入指示劑混勻，分裝試管。② 高壓（） 滅菌15 分鐘即成。（3）用途 細菌靛基質(zhì)試驗用。（五） 胰蛋白胨水（1）成分胰胨或其他含色氨酸豐富的胨 1g氯化鈉 水100 ml（2）制法① 將胰胨、氯化鈉加入水后，加熱溶解，校正pH ～ ，分裝試管。③ 趁熱取出，置成底層較深的斜面，凝固后備用。加熱溶解，校正p H ，加入酚紅。③ 高壓（） 滅菌15 分鐘，趁熱取出，立即置成深底層斜面（斜面及底層約各占一半），凝固后備用。（三） 克氏鐵瓊脂（1）成分蛋白胨或多胨　20g牛肉膏 3g酵母浸膏 3g乳糖 10g葡萄糖 1g氯化鈉 5g拘櫞酸鐵銨 硫代硫酸鈉 瓊脂 14g酚紅 水1000 ml（2）制法① 將上述各成分（酚紅除外） 混合，加熱溶解，校正p H ，加入酚紅。③ 高壓（） 滅菌15 分鐘，使成高層瓊脂，備用。（二） 氧化－發(fā)酵（O －F） 培養(yǎng)基（1）成分蛋白胨 2g氯化鈉 5gK2HPO4 葡萄糖 10g2g／L 溴麝香草酚藍溶液12 ml水1000 ml（2）制法① 將蛋白胨、鹽類加水溶解后，校正pH 。④ 亦可制成半固體發(fā)酵管，即于上述成分中加入4 ～6g／L 的瓊脂，加熱溶化后分試管。② 高壓（） 滅菌15 分鐘，備用。這些機制使細菌具有能產(chǎn)生抗任何微生物藥物抗性的能力。其中SCCmec可稱為抗生素耐藥島：它包含對甲氧西林產(chǎn)生耐藥的mecA基因，有的SCCmec還包含對非β內(nèi)酰胺抗生素和重金屬產(chǎn)生耐藥的質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子。耐藥性可通水平或垂直傳插在不同種或同種間擴散。大的變異是一大段DNA作為一個整體重新排列，這種變化常由在染色體中可以獨立移動的特殊基因單位，即轉(zhuǎn)座子或插入序列產(chǎn)生。41．耐藥性的產(chǎn)生機理是什么？抗微生物藥物對微生物群體有很強的選擇壓力，使天然能耐受它們的微生物或經(jīng)誘導(dǎo)變異產(chǎn)生抗藥抗性的微生物存活下來。④最低殺菌濃度的測定。②測量含藥紙片周圍直徑大小的KB紙片瓊脂擴散法。②指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理選擇抗生素，可依據(jù)實驗結(jié)果調(diào)整經(jīng)驗性治療于靶向治療?，F(xiàn)常用有克拉霉素、阿齊霉素等抗菌活性強、抗菌譜廣的藥物。作用機制是與肽聚糖合成中間產(chǎn)物D丙氨酰D丙氨酸末端形成復(fù)合物，可阻斷肽聚糖合成過程中轉(zhuǎn)糖基酶、轉(zhuǎn)肽酶及羧肽酶的作用，從而阻止了細胞壁的合成。由于藥物拮抗了該酶干擾了細菌DNA復(fù)制、修復(fù)和重組，藥物還能通過革蘭陰性菌的外膜微孔和借助磷脂滲透作用進入細菌細胞，對繁殖期的細菌均有殺菌作用。與細胞壁合成抑制藥物聯(lián)合使用時可產(chǎn)生協(xié)同作用，破壞細胞壁完整性，使藥物易于進入菌體而達到核糖體作用靶位。不同的β內(nèi)酰胺類抗生素在不同程度上抑制上述酶的作用，從而抑制細菌細胞壁的完整性，使菌體形成絲狀體或球形體，最終溶解死亡。35．β內(nèi)酰胺類抗生素的作用機制是什么？青霉素類乃至整個β內(nèi)酰胺類抗生素的作用機制是阻斷肽聚糖合成的最后階段即肽聚糖鏈的組裝和三維結(jié)構(gòu)的構(gòu)建。舒巴坦是半合成的酶抑制劑，其抑酶作用和克拉維酸相似，但穿透革蘭陰性菌外膜能力差，可抑制由質(zhì)?；蛉旧w介導(dǎo)的β內(nèi)酰胺酶(Ⅰ型染色體介導(dǎo)酶除外)。常用β內(nèi)酰胺酶抑制劑有克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦。區(qū)分是TEMTEM2或SHV1的大量表達還是IRT，可用頭孢菌素敏感試驗鑒別，紙片法表型為阿莫西林和替卡西林耐藥，對阿莫西林/克拉維酸和替卡西林/克拉維酸中介或耐藥，而對頭孢菌素敏感。④水解碳青霉烯類的β內(nèi)酰胺酶，常見銅綠、鮑曼等非發(fā)酵菌屬，表現(xiàn)以碳青霉烯類和單環(huán)β內(nèi)酰胺類抗生素為代表的多重耐藥。②對β內(nèi)酰胺抑制劑敏感性下降的β內(nèi)酰胺酶，主要原因之一是菌株β內(nèi)酰胺酶的過度表達，另一機制就是產(chǎn)生誘導(dǎo)耐酶抑制劑的β內(nèi)酰胺酶，常表現(xiàn)對酶抑制劑復(fù)合藥的敏感性下降，而對第一代頭孢菌素敏感。大量試驗證實，β內(nèi)酰胺類抗生素和細胞壁前體的存在都可以誘導(dǎo)β內(nèi)酰胺酶的合成，其作用機制為β內(nèi)酰胺酶與催化細菌細胞壁肽聚糖合成的青霉素結(jié)合蛋白空間結(jié)構(gòu)相似，可競爭性水解藥物β內(nèi)酰胺環(huán)使酰胺鍵斷裂而失去抗菌活性，其水解效率是細菌耐藥性的主要決定因子。③C群β內(nèi)酰胺酶主要是頭孢菌素酶，存在于革蘭氏陰性菌染色體上，可被誘導(dǎo)或重組。①A群β內(nèi)酰胺酶為絲氨酸蛋白酶，主要作用于青霉素類藥物，編碼基因位于染色體或質(zhì)粒上，可從一個細菌轉(zhuǎn)移至另一個細菌。如在腸球菌培養(yǎng)基中加入亞葉酸，腸球菌利用亞葉酸后可對磺胺甲氧嘧啶由敏感轉(zhuǎn)為耐藥。如細菌的青霉素結(jié)合蛋白改變，導(dǎo)致對β內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥。主要表現(xiàn)：外膜通透性降低及藥物泵出系統(tǒng)。如β內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類鈍化酶、拓撲異構(gòu)酶等。1 ℃培養(yǎng)18 ～24 小時，做菌落計數(shù)。⑤傾注培養(yǎng)法：該法常用液體標本的細菌定量計數(shù)。 ③瓊脂斜面接種法：首先將接種針插入斜面正中，垂直刺入底部，抽出接種針令其在斜面瓊脂上作S形劃線。29．標本接種技術(shù)有幾種？①平板接種法：初次接種成功后，連繼劃線或分四區(qū)劃線接種。常用抑制劑有膽鹽、煌綠、玫瑰紅酸、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉、某些染料以及多種抗生素物質(zhì)。培養(yǎng)基的主要成分有氮源、碳源、無機鹽、水分及一些生長因子，它們主要為細菌的生長繁殖提供營養(yǎng)和生長環(huán)境。26．臨床上常見菌群失調(diào)癥有哪些？臨床上常見的菌群失調(diào)癥有：①耐藥性葡萄球菌繁殖成優(yōu)勢菌而發(fā)生腹瀉，偶爾發(fā)生致死性葡萄球菌膿毒血癥；②變形桿菌和假單胞菌生長旺盛并侵入組織發(fā)生腎炎或膀胱炎；③白色念珠菌大量繁殖，引起腸道、肛門或陰道感染，也可發(fā)展成全身感染；④艱難梭菌在結(jié)腸內(nèi)大量繁殖，并產(chǎn)生一種腸毒素及細菌毒素，導(dǎo)致假膜性腸炎。25．引起菌群失調(diào)的原因有哪些？ 菌群失調(diào)的常見誘因主要是抗生素、同位素、激素的不合理使用，另外患有慢性消耗性疾病時腸道、呼吸道、泌尿生殖道的功能失常也是重要原因。在正常情況下，人體和正常菌群之間以及正常菌群中各細菌之間，保持一定的生態(tài)平衡。例如大腸桿菌進入腹腔或泌尿道，可引起腹膜炎、泌尿道感染。24．什么是條件致病菌和菌群失調(diào)？在一定條件下，正常菌