【正文】 制度1． 加強(qiáng)學(xué)習(xí)，嚴(yán)格執(zhí)行生物安全制度，定期檢查。4． 感染物污染桌面或地面應(yīng)立即用500g/L含氯消毒劑消毒劑溶液覆蓋其上，經(jīng)30分鐘方可抹去，如工作服被病原微生物污染，應(yīng)立即脫下，進(jìn)行高壓滅菌處理。8． 易燃、易爆、劇毒化學(xué)物品要有專人保管。 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標(biāo)題：微生物實驗室質(zhì)量管理制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：微生物實驗室質(zhì)量管理制度 目的規(guī)范質(zhì)量管理程序，保證檢驗的質(zhì)量。程序 質(zhì)量管理內(nèi)容 包括人員、操作規(guī)程、申請單、報告和記錄、標(biāo)本、儀器、培養(yǎng)基、試劑、檢驗方法、質(zhì)量控制等。 申請單 申請單應(yīng)包含：病人信息、申請醫(yī)生姓名或工號、申請科室、申請項目、標(biāo)本種類、標(biāo)本采集和接收時間，必要時應(yīng)標(biāo)明臨床診斷、采樣部位、抗菌藥物的應(yīng)用情況、預(yù)期微生物的種類等。 結(jié)果報告應(yīng)包括檢驗結(jié)果、結(jié)果解釋等。 儀器質(zhì)量管理 儀器在安裝時及常規(guī)使用中應(yīng)滿足檢驗所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并具有達(dá)標(biāo)的證明文件。經(jīng)培訓(xùn)考核通過并經(jīng)實驗室授權(quán)的工作人員方可操作儀器。 一旦發(fā)現(xiàn)儀器故障，應(yīng)停止使用，清楚標(biāo)記后妥善存放至其被修復(fù)。 試劑的質(zhì)量管理 嚴(yán)格監(jiān)督自配培養(yǎng)基的質(zhì)量并做好記錄。 樣本的質(zhì)量控制，參見《樣本采集、運送程序》。2. 適用范圍 省臨床檢驗中心組織的微生物室間質(zhì)控。 質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗收 收到質(zhì)控物后由相關(guān)人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)本的有關(guān)說明對質(zhì)控物的數(shù)量、批號、包裝進(jìn)行驗收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求保存。 結(jié)果上報截止日期之前嚴(yán)禁與其他實驗室交流室間質(zhì)控的檢測結(jié)果。3． 職責(zé)實驗室檢驗人員均須熟知并遵守本程序。 樣本的采集手冊 實驗室應(yīng)制定樣本采集手冊，指導(dǎo)正確采集和處理樣本。 樣本儲存 微生物實驗室接種崗位檢驗人員按照〈〈微生物標(biāo)本檢驗前儲存程序〉〉正確儲存未能及時處理的標(biāo)本。 觸酶、氧化酶、凝固酶、β內(nèi)酰胺酶、Optochin； VITEK32細(xì)菌鑒定系統(tǒng)使用的每一種鑒定卡及相關(guān)試劑； 表21 常用試驗試劑質(zhì)量控制試劑 陽性對照 陰性對照 監(jiān)測頻率氧化酶 銅綠假單胞菌ATCC27853 大腸埃希菌ATCC25922 每次新配制時及使用中每個工作日觸酶 金黃色葡萄球菌ATCC25923 A群鏈球菌ATCC19615 每次新配制時及使用中每個工作日靛基質(zhì) 大腸埃希菌ATCC25922 肺炎克雷伯菌ATCC13883 1%蛋白胨水及靛基質(zhì)試劑：每次新配制時及使用中每個工作日直接用于檢測病人標(biāo)本有內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的抗原試驗如：金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑（每天或每次做質(zhì)控）；抗血清（至少每半年用陰、陽性質(zhì)控菌株做質(zhì)控）；革蘭染液（每周一次用陰、陽性質(zhì)控片做質(zhì)控）；抗酸染液（每次使用要求用陰、陽性質(zhì)控片做質(zhì)控）；自制試劑（每配制一批新試劑做質(zhì)控）； 平行試驗 新批號試劑使用前須用老試劑或參考材料平行試驗。 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 購買的有質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基 實驗室應(yīng)保存制造商所遵循的質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)，以及每批號產(chǎn)品完成無菌試驗、生長試驗、生化試驗及質(zhì)量控制性能的合格證明等文件；無質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基，每批號和（或）每次購買的產(chǎn)品應(yīng)檢測相應(yīng)的性能，包括生長試驗或與舊批號平行試驗、生長抑制試驗（適用時）、生化試驗（適用時）等。如發(fā)現(xiàn)與上述情況不符的培養(yǎng)基，應(yīng)不予使用。無菌生理鹽水1：100稀釋，每塊平板接種10ul（濃度相當(dāng)于10~310~4CFU/平板）。 表22 生化試驗用培養(yǎng)基的質(zhì)控 培養(yǎng)基 質(zhì)控菌株 鑒定標(biāo)準(zhǔn)克氏雙糖鐵培養(yǎng)基 大腸埃希菌ATCC49247 + / + 奇異變形桿菌ATCC49005 / +，H2S+ 福氏志賀菌 質(zhì)控菌株 / + 銅綠假單胞菌ATCC27853 / 1%蛋白胨水（靛基質(zhì)用） 大腸埃希菌ATCC25922 + 肺炎克雷伯菌ATCC13883 科瑪嘉念珠菌顯色平板 光滑念珠菌ATCC90030 紫色、光滑 白念珠菌ATCC90028 綠色 熱帶念珠菌ATCC981083 藍(lán)灰色 克柔念珠菌 質(zhì)控菌株 粉紅色、表面毛糙……. 表23 培養(yǎng)基的生長試驗質(zhì)控 培養(yǎng)基 質(zhì)控菌株 鑒定標(biāo)準(zhǔn)巧克力平板 流感嗜血桿菌ATCC49247 生長情況好血平板 金黃色葡萄球菌ATCC25923 中度到大量生長 A群鏈球菌ATCC19615 生長，β溶血 肺炎鏈球菌ATCC49619 生長，α溶血 大腸埃希菌ATCC25922 生長中國藍(lán)培養(yǎng)基 大腸埃希菌ATCC25922 生長，藍(lán)色菌落 奇異變形桿菌ATCC49005 部分抑制 鼠傷寒沙門菌ATCC14028 無色菌落 糞腸球菌ATCC29212 不生長 SS培養(yǎng)基 大腸埃希菌ATCC25922 部分或全部抑制 福氏志賀菌 質(zhì)控菌株 生長，無色菌落 鼠傷寒沙門菌ATCC14028 生長，有黑色中心……江西省新余市人民醫(yī)院檢驗科微生物實驗室版 本 號：文件標(biāo)題：血培養(yǎng)分級報告制度文件狀態(tài)：受控文件編號：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛民審 核 者：賀愛民發(fā) 放 號：血培養(yǎng)分級報告制度1. 目的 規(guī)范分級報告程序，及時、分級地向臨床報告結(jié)果。 二級報告 報告直接藥敏試驗結(jié)果。將血培養(yǎng)瓶置于全自動血培養(yǎng)儀中培養(yǎng)。、胸腹水等穿刺液床邊抽取體液標(biāo)本1～2ml注入多功能體液培養(yǎng)瓶或需氧血培養(yǎng)瓶，即送實驗室。 尿標(biāo)本接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記，將尿標(biāo)本混勻，用10μl定量接種環(huán)立即接種血瓊脂平板、中國藍(lán)平板，分離細(xì)菌和菌落計數(shù)。4. 程序此法多用于糞便等含菌量較多的標(biāo)本。 傾注平板法本法用于尿液等標(biāo)本的細(xì)菌計數(shù)。用右手小指與手掌、小指與無名指分別拔出兩管的棉塞，將管口通過火焰滅菌。 穿刺培養(yǎng)法此法用于保存菌種，觀察動力及某些生化反應(yīng)。2. 適用范圍穿刺液標(biāo)本培養(yǎng)。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)本標(biāo)識與化驗申請單不符。、多功能體液培養(yǎng)瓶、VITEK鑒定系統(tǒng)。6. 檢驗步驟接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記。 增菌分離培養(yǎng)法　將多功能體液培養(yǎng)瓶顛倒混勻使液體覆蓋整個固體面，然后置35℃孵育箱培養(yǎng)（固體面在上，液體在下）。
　　 厭氧菌培養(yǎng)　床邊接種或從厭氧運送培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種后，立即置厭氧環(huán)境中，35℃培養(yǎng)24～48h；挑取可疑菌落作耐氧試驗，確定為厭氧菌。9. 注意事項 標(biāo)本的采集一定要嚴(yán)格履行無菌操作技術(shù)，避免污染。正常穿刺液是無菌的，若從患者穿刺液中查見致病菌或條件致病菌則提示該部位有細(xì)菌感染。2. 適用范圍糞便培養(yǎng)。 糞便標(biāo)本應(yīng)該立即送檢，室溫保存不能超過2h，如不能及時送檢可以放入磷酸鹽甘油（）或轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基，但不能超過24h。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 糞便標(biāo)本放置時間超過2h。、革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。6. 檢驗步驟接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進(jìn)行編號、登記。 培養(yǎng)
　　 沙門志賀菌培養(yǎng)　參見《沙門菌屬檢驗操作規(guī)程》、《志賀菌屬檢驗操作規(guī)程》。
　　 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng)　參見《耶爾森菌屬檢驗操作規(guī)程》。35℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)48h后，選擇粗糙型黃色菌落，移種于葡萄糖庖肉培養(yǎng)基作毒素測定；同時制涂片，懸滴檢查動力、革蘭染色及生化鑒定。7. 操作流程糞便或肛拭需氧培養(yǎng)根據(jù)臨床要求分離致病性大腸埃希菌O157SS、XLD或HE平板35℃培養(yǎng)18～24 h麥康凱平板分離彎曲菌分離弧菌TCBS平板CampyBA平板35℃微需氧培養(yǎng)48 h山梨醇麥康凱平板觀察菌落特征及涂片、染色觀察菌落特征及涂片、染色血清學(xué)鑒定儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗發(fā)出報告雙糖鐵或三糖鐵試驗觀察菌落特征及涂片、染色血清學(xué)鑒定發(fā)出報告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗發(fā)出報告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗8. 結(jié)果報告9. 查出腸道致病菌，報告其菌名和藥敏結(jié)果。10. 臨床意義正常情況下腸道中有多種細(xì)菌寄生，包括大量的厭氧菌、腸球菌、大腸埃希菌、腸桿菌、變形桿菌、糞產(chǎn)堿桿菌等。11. 危急值報告培養(yǎng)出霍亂弧菌、傷寒沙門菌、O157等及時按傳染病報告，同時送CDC復(fù)核。 標(biāo)本采集　 采集時間　以晨痰為好；支氣管擴(kuò)張癥患者，清晨起床后進(jìn)行體位引流，可采集大量痰標(biāo)本。 棉拭采集法　用無菌棉拭子輕輕擦拭患者鼻咽部黏膜，留取標(biāo)本，置無菌試管內(nèi)送檢。 標(biāo)本容器溢漏，無瓶蓋。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見質(zhì)量管理。并可初步判定是否有病原菌存在。
放線菌及諾卡菌涂片　將痰液用生理鹽水洗滌數(shù)次，如含血液，則加水溶解紅細(xì)胞，然后挑取黃色顆粒或不透明的著色斑點，置載玻片上，覆以蓋玻片，輕輕擠壓，置高倍鏡下觀察其結(jié)構(gòu)，如見中央為交織的菌絲，末端呈放線狀排列，則揭去蓋玻片，干燥后作革蘭及萋尼染色鏡檢。 痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理　用無菌鹽水將痰洗滌或加入等量的1%胰酶溶液，使痰液均質(zhì)化后備用。7. 操作流程發(fā)出報告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗觀察菌落特征及涂片、染色消化液或生理鹽水處理痰或咽拭肉眼觀察涂片染色血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板5%~10% CO2 35℃培養(yǎng)18～24 h8. 結(jié)果報告 報告的各細(xì)菌種可注明各自所占比例情況，可分為純培養(yǎng)，大量，中等量，少量。 咳痰標(biāo)本不做厭氧菌培養(yǎng)。肺炎鏈球菌是肺炎最常見的致病菌。嗜肺軍團(tuán)菌引起軍團(tuán)菌病，肺部厭氧感染大多是脆弱類桿菌及梭桿菌屬的細(xì)菌等。2. 適用范圍腦脊液培養(yǎng)。因此，腦脊液無論涂片或培養(yǎng)，必須于采集后立即送檢。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見質(zhì)量管理。 結(jié)核分枝桿菌涂片檢查　參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗操作規(guī)程》。 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見《結(jié)核分枝桿菌檢驗操作規(guī)程》。9. 注意事項 抽取的腦脊液分置于無菌試管中，迅速送至實驗室，病毒、霉菌、分支桿菌培養(yǎng)樣本置4 ℃保存待送。3個月至5歲兒童細(xì)菌性腦膜炎的主要致病菌是流感嗜血桿菌，新生兒腦膜炎多由大腸埃希菌、B群溶血性鏈球菌和腦膜敗血黃桿菌引起的，特別是早產(chǎn)嬰兒。若檢測出腦膜炎奈瑟菌則應(yīng)做傳染病報告。 標(biāo)本采集 中段尿標(biāo)本采集法
　　 女性　先以肥皂水清洗外陰部，再以無菌水沖洗，用無菌紗布擦拭，以手指將陰唇分開排尿，棄去前段尿，留取中段尿5～7ml于無菌試管內(nèi)。 膀胱穿刺　此法用于厭氧菌培養(yǎng)。 尿標(biāo)本不是用無菌容器留取。 VITEK