【正文】 制度1． 加強(qiáng)學(xué)習(xí)，嚴(yán)格執(zhí)行生物安全制度，定期檢查。4． 感染物污染桌面或地面應(yīng)立即用500g/L含氯消毒劑消毒劑溶液覆蓋其上，經(jīng)30分鐘方可抹去，如工作服被病原微生物污染，應(yīng)立即脫下，進(jìn)行高壓滅菌處理。8． 易燃、易爆、劇毒化學(xué)物品要有專(zhuān)人保管。 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理制度文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類(lèi)：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理制度 目的規(guī)范質(zhì)量管理程序，保證檢驗(yàn)的質(zhì)量。程序 質(zhì)量管理內(nèi)容 包括人員、操作規(guī)程、申請(qǐng)單、報(bào)告和記錄、標(biāo)本、儀器、培養(yǎng)基、試劑、檢驗(yàn)方法、質(zhì)量控制等。 申請(qǐng)單 申請(qǐng)單應(yīng)包含：病人信息、申請(qǐng)醫(yī)生姓名或工號(hào)、申請(qǐng)科室、申請(qǐng)項(xiàng)目、標(biāo)本種類(lèi)、標(biāo)本采集和接收時(shí)間，必要時(shí)應(yīng)標(biāo)明臨床診斷、采樣部位、抗菌藥物的應(yīng)用情況、預(yù)期微生物的種類(lèi)等。 結(jié)果報(bào)告應(yīng)包括檢驗(yàn)結(jié)果、結(jié)果解釋等。 儀器質(zhì)量管理 儀器在安裝時(shí)及常規(guī)使用中應(yīng)滿(mǎn)足檢驗(yàn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并具有達(dá)標(biāo)的證明文件。經(jīng)培訓(xùn)考核通過(guò)并經(jīng)實(shí)驗(yàn)室授權(quán)的工作人員方可操作儀器。 一旦發(fā)現(xiàn)儀器故障，應(yīng)停止使用，清楚標(biāo)記后妥善存放至其被修復(fù)。 試劑的質(zhì)量管理 嚴(yán)格監(jiān)督自配培養(yǎng)基的質(zhì)量并做好記錄。 樣本的質(zhì)量控制，參見(jiàn)《樣本采集、運(yùn)送程序》。2. 適用范圍 省臨床檢驗(yàn)中心組織的微生物室間質(zhì)控。 質(zhì)控標(biāo)本的接收和驗(yàn)收 收到質(zhì)控物后由相關(guān)人員登記、簽字，根據(jù)質(zhì)控標(biāo)本的有關(guān)說(shuō)明對(duì)質(zhì)控物的數(shù)量、批號(hào)、包裝進(jìn)行驗(yàn)收并將質(zhì)控標(biāo)本按要求保存。 結(jié)果上報(bào)截止日期之前嚴(yán)禁與其他實(shí)驗(yàn)室交流室間質(zhì)控的檢測(cè)結(jié)果。3． 職責(zé)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員均須熟知并遵守本程序。 樣本的采集手冊(cè) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定樣本采集手冊(cè)，指導(dǎo)正確采集和處理樣本。 樣本儲(chǔ)存 微生物實(shí)驗(yàn)室接種崗位檢驗(yàn)人員按照〈〈微生物標(biāo)本檢驗(yàn)前儲(chǔ)存程序〉〉正確儲(chǔ)存未能及時(shí)處理的標(biāo)本。 觸酶、氧化酶、凝固酶、β內(nèi)酰胺酶、Optochin； VITEK32細(xì)菌鑒定系統(tǒng)使用的每一種鑒定卡及相關(guān)試劑； 表21 常用試驗(yàn)試劑質(zhì)量控制試劑 陽(yáng)性對(duì)照 陰性對(duì)照 監(jiān)測(cè)頻率氧化酶 銅綠假單胞菌ATCC27853 大腸埃希菌ATCC25922 每次新配制時(shí)及使用中每個(gè)工作日觸酶 金黃色葡萄球菌ATCC25923 A群鏈球菌ATCC19615 每次新配制時(shí)及使用中每個(gè)工作日靛基質(zhì) 大腸埃希菌ATCC25922 肺炎克雷伯菌ATCC13883 1%蛋白胨水及靛基質(zhì)試劑：每次新配制時(shí)及使用中每個(gè)工作日直接用于檢測(cè)病人標(biāo)本有內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的抗原試驗(yàn)如：金黃色葡萄球菌乳膠凝集試劑（每天或每次做質(zhì)控）；抗血清（至少每半年用陰、陽(yáng)性質(zhì)控菌株做質(zhì)控）；革蘭染液（每周一次用陰、陽(yáng)性質(zhì)控片做質(zhì)控）；抗酸染液（每次使用要求用陰、陽(yáng)性質(zhì)控片做質(zhì)控）；自制試劑（每配制一批新試劑做質(zhì)控）； 平行試驗(yàn) 新批號(hào)試劑使用前須用老試劑或參考材料平行試驗(yàn)。 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 購(gòu)買(mǎi)的有質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存制造商所遵循的質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)，以及每批號(hào)產(chǎn)品完成無(wú)菌試驗(yàn)、生長(zhǎng)試驗(yàn)、生化試驗(yàn)及質(zhì)量控制性能的合格證明等文件；無(wú)質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基，每批號(hào)和（或）每次購(gòu)買(mǎi)的產(chǎn)品應(yīng)檢測(cè)相應(yīng)的性能，包括生長(zhǎng)試驗(yàn)或與舊批號(hào)平行試驗(yàn)、生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)（適用時(shí)）、生化試驗(yàn)（適用時(shí)）等。如發(fā)現(xiàn)與上述情況不符的培養(yǎng)基，應(yīng)不予使用。無(wú)菌生理鹽水1：100稀釋?zhuān)繅K平板接種10ul（濃度相當(dāng)于10~310~4CFU/平板）。 表22 生化試驗(yàn)用培養(yǎng)基的質(zhì)控 培養(yǎng)基 質(zhì)控菌株 鑒定標(biāo)準(zhǔn)克氏雙糖鐵培養(yǎng)基 大腸埃希菌ATCC49247 + / + 奇異變形桿菌ATCC49005 / +，H2S+ 福氏志賀菌 質(zhì)控菌株 / + 銅綠假單胞菌ATCC27853 / 1%蛋白胨水（靛基質(zhì)用） 大腸埃希菌ATCC25922 + 肺炎克雷伯菌ATCC13883 科瑪嘉念珠菌顯色平板 光滑念珠菌ATCC90030 紫色、光滑 白念珠菌ATCC90028 綠色 熱帶念珠菌ATCC981083 藍(lán)灰色 克柔念珠菌 質(zhì)控菌株 粉紅色、表面毛糙……. 表23 培養(yǎng)基的生長(zhǎng)試驗(yàn)質(zhì)控 培養(yǎng)基 質(zhì)控菌株 鑒定標(biāo)準(zhǔn)巧克力平板 流感嗜血桿菌ATCC49247 生長(zhǎng)情況好血平板 金黃色葡萄球菌ATCC25923 中度到大量生長(zhǎng) A群鏈球菌ATCC19615 生長(zhǎng)，β溶血 肺炎鏈球菌ATCC49619 生長(zhǎng)，α溶血 大腸埃希菌ATCC25922 生長(zhǎng)中國(guó)藍(lán)培養(yǎng)基 大腸埃希菌ATCC25922 生長(zhǎng)，藍(lán)色菌落 奇異變形桿菌ATCC49005 部分抑制 鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028 無(wú)色菌落 糞腸球菌ATCC29212 不生長(zhǎng) SS培養(yǎng)基 大腸埃希菌ATCC25922 部分或全部抑制 福氏志賀菌 質(zhì)控菌株 生長(zhǎng)，無(wú)色菌落 鼠傷寒沙門(mén)菌ATCC14028 生長(zhǎng)，有黑色中心……江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：血培養(yǎng)分級(jí)報(bào)告制度文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類(lèi)：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：血培養(yǎng)分級(jí)報(bào)告制度1. 目的 規(guī)范分級(jí)報(bào)告程序，及時(shí)、分級(jí)地向臨床報(bào)告結(jié)果。 二級(jí)報(bào)告 報(bào)告直接藥敏試驗(yàn)結(jié)果。將血培養(yǎng)瓶置于全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中培養(yǎng)。、胸腹水等穿刺液床邊抽取體液標(biāo)本1～2ml注入多功能體液培養(yǎng)瓶或需氧血培養(yǎng)瓶，即送實(shí)驗(yàn)室。 尿標(biāo)本接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記，將尿標(biāo)本混勻，用10μl定量接種環(huán)立即接種血瓊脂平板、中國(guó)藍(lán)平板，分離細(xì)菌和菌落計(jì)數(shù)。4. 程序此法多用于糞便等含菌量較多的標(biāo)本。 傾注平板法本法用于尿液等標(biāo)本的細(xì)菌計(jì)數(shù)。用右手小指與手掌、小指與無(wú)名指分別拔出兩管的棉塞，將管口通過(guò)火焰滅菌。 穿刺培養(yǎng)法此法用于保存菌種，觀察動(dòng)力及某些生化反應(yīng)。2. 適用范圍穿刺液標(biāo)本培養(yǎng)。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)本標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符。、多功能體液培養(yǎng)瓶、VITEK鑒定系統(tǒng)。6. 檢驗(yàn)步驟接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。 增菌分離培養(yǎng)法　將多功能體液培養(yǎng)瓶顛倒混勻使液體覆蓋整個(gè)固體面，然后置35℃孵育箱培養(yǎng)（固體面在上，液體在下）。
　　 厭氧菌培養(yǎng)　床邊接種或從厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種后，立即置厭氧環(huán)境中，35℃培養(yǎng)24～48h；挑取可疑菌落作耐氧試驗(yàn)，確定為厭氧菌。9. 注意事項(xiàng) 標(biāo)本的采集一定要嚴(yán)格履行無(wú)菌操作技術(shù)，避免污染。正常穿刺液是無(wú)菌的，若從患者穿刺液中查見(jiàn)致病菌或條件致病菌則提示該部位有細(xì)菌感染。2. 適用范圍糞便培養(yǎng)。 糞便標(biāo)本應(yīng)該立即送檢，室溫保存不能超過(guò)2h，如不能及時(shí)送檢可以放入磷酸鹽甘油（）或轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，但不能超過(guò)24h。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 糞便標(biāo)本放置時(shí)間超過(guò)2h。、革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽(yáng)性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽(yáng)性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參見(jiàn)試劑說(shuō)明書(shū)。6. 檢驗(yàn)步驟接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。 培養(yǎng)
　　 沙門(mén)志賀菌培養(yǎng)　參見(jiàn)《沙門(mén)菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》、《志賀菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。
　　 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng)　參見(jiàn)《耶爾森菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。35℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)48h后，選擇粗糙型黃色菌落，移種于葡萄糖庖肉培養(yǎng)基作毒素測(cè)定；同時(shí)制涂片，懸滴檢查動(dòng)力、革蘭染色及生化鑒定。7. 操作流程糞便或肛拭需氧培養(yǎng)根據(jù)臨床要求分離致病性大腸埃希菌O157SS、XLD或HE平板35℃培養(yǎng)18～24 h麥康凱平板分離彎曲菌分離弧菌TCBS平板CampyBA平板35℃微需氧培養(yǎng)48 h山梨醇麥康凱平板觀察菌落特征及涂片、染色觀察菌落特征及涂片、染色血清學(xué)鑒定儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)發(fā)出報(bào)告雙糖鐵或三糖鐵試驗(yàn)觀察菌落特征及涂片、染色血清學(xué)鑒定發(fā)出報(bào)告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)發(fā)出報(bào)告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)8. 結(jié)果報(bào)告9. 查出腸道致病菌，報(bào)告其菌名和藥敏結(jié)果。10. 臨床意義正常情況下腸道中有多種細(xì)菌寄生，包括大量的厭氧菌、腸球菌、大腸埃希菌、腸桿菌、變形桿菌、糞產(chǎn)堿桿菌等。11. 危急值報(bào)告培養(yǎng)出霍亂弧菌、傷寒沙門(mén)菌、O157等及時(shí)按傳染病報(bào)告，同時(shí)送CDC復(fù)核。 標(biāo)本采集　 采集時(shí)間　以晨痰為好；支氣管擴(kuò)張癥患者，清晨起床后進(jìn)行體位引流，可采集大量痰標(biāo)本。 棉拭采集法　用無(wú)菌棉拭子輕輕擦拭患者鼻咽部黏膜，留取標(biāo)本，置無(wú)菌試管內(nèi)送檢。 標(biāo)本容器溢漏，無(wú)瓶蓋。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見(jiàn)質(zhì)量管理。并可初步判定是否有病原菌存在。
放線菌及諾卡菌涂片　將痰液用生理鹽水洗滌數(shù)次，如含血液，則加水溶解紅細(xì)胞，然后挑取黃色顆?；虿煌该鞯闹唿c(diǎn)，置載玻片上，覆以蓋玻片，輕輕擠壓，置高倍鏡下觀察其結(jié)構(gòu)，如見(jiàn)中央為交織的菌絲，末端呈放線狀排列，則揭去蓋玻片，干燥后作革蘭及萋尼染色鏡檢。 痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理　用無(wú)菌鹽水將痰洗滌或加入等量的1%胰酶溶液，使痰液均質(zhì)化后備用。7. 操作流程發(fā)出報(bào)告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)觀察菌落特征及涂片、染色消化液或生理鹽水處理痰或咽拭肉眼觀察涂片染色血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板5%~10% CO2 35℃培養(yǎng)18～24 h8. 結(jié)果報(bào)告 報(bào)告的各細(xì)菌種可注明各自所占比例情況，可分為純培養(yǎng)，大量，中等量，少量。 咳痰標(biāo)本不做厭氧菌培養(yǎng)。肺炎鏈球菌是肺炎最常見(jiàn)的致病菌。嗜肺軍團(tuán)菌引起軍團(tuán)菌病，肺部厭氧感染大多是脆弱類(lèi)桿菌及梭桿菌屬的細(xì)菌等。2. 適用范圍腦脊液培養(yǎng)。因此，腦脊液無(wú)論涂片或培養(yǎng)，必須于采集后立即送檢。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見(jiàn)質(zhì)量管理。 結(jié)核分枝桿菌涂片檢查　參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。9. 注意事項(xiàng) 抽取的腦脊液分置于無(wú)菌試管中，迅速送至實(shí)驗(yàn)室，病毒、霉菌、分支桿菌培養(yǎng)樣本置4 ℃保存待送。3個(gè)月至5歲兒童細(xì)菌性腦膜炎的主要致病菌是流感嗜血桿菌，新生兒腦膜炎多由大腸埃希菌、B群溶血性鏈球菌和腦膜敗血黃桿菌引起的，特別是早產(chǎn)嬰兒。若檢測(cè)出腦膜炎奈瑟菌則應(yīng)做傳染病報(bào)告。 標(biāo)本采集 中段尿標(biāo)本采集法
　　 女性　先以肥皂水清洗外陰部，再以無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌紗布擦拭，以手指將陰唇分開(kāi)排尿，棄去前段尿，留取中段尿5～7ml于無(wú)菌試管內(nèi)。 膀胱穿刺　此法用于厭氧菌培養(yǎng)。 尿標(biāo)本不是用無(wú)菌容器留取。 VITEK