基因工程制藥培訓(xùn)(參考版)
2025-01-07 13:26本頁(yè)面
【正文】 工藝流程 謝謝各位的聆聽(tīng) 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH 。 第二代乙肝疫苗，將編碼乙型肝炎表面抗原的基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞或酵母菌中高效表達(dá)，得到乙肝基因工程疫苗，接種者中約有 10%不產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)；另有 5%～ 15%接種者屬低應(yīng)答者，低應(yīng)答者不能獲得完全保護(hù)作用 。因提取工藝不同，疫苗所含成分也有一定的差別，但均含有 22 nm小顆粒乙型肝炎表面抗原 。在疫區(qū)特殊人群捐贈(zèng)使用，效果顯著。 早期獲得方法：用病毒誘導(dǎo)人白血球 (白細(xì)胞 )產(chǎn)生，產(chǎn)量低，價(jià)格貴。干擾素除具有廣譜抗病毒活性，還具有抑制細(xì)胞分裂，特別是抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和免疫調(diào)節(jié)等功能，作為一種生物活性蛋白有著良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。不同的宿主菌及質(zhì)粒在固定化系統(tǒng)中均表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。 在游離重組菌系統(tǒng)中常用抗生素，氨基酸等選擇性壓力穩(wěn)定質(zhì)粒的手段，往往在大規(guī)模生產(chǎn)中難以應(yīng)用。 通過(guò)間隙供氧的方法和通過(guò)改變稀釋速率的方法都可提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性 。 連續(xù)培養(yǎng)時(shí)可以考慮采用多級(jí)培養(yǎng)，如在第一級(jí)進(jìn)行生長(zhǎng)，維持菌體的穩(wěn)定性，在第二級(jí)進(jìn)行表達(dá)。電泳分析表明 60%～ 70% 色氨酸合成能力喪失是由于質(zhì)粒結(jié)構(gòu)的變化，其余是由于質(zhì)粒丟失造成。 外源基因的表達(dá)會(huì)引起重組質(zhì)粒的不穩(wěn)定；尤其當(dāng)外源基因高效表達(dá)時(shí)，有可能因競(jìng)爭(zhēng)利用物質(zhì)、能量、核糖體等干擾宿主細(xì)胞的正常代謝活動(dòng)，并造成質(zhì)粒不穩(wěn)定。 限制性基質(zhì)的種類對(duì)重組菌有不同的影響 4. pH 和溶解氧 pH和 溶氧是影響微生物生長(zhǎng)的重要參數(shù)，在發(fā)酵罐培養(yǎng)基因重組菌時(shí)，通常都需要維持一定的 pH 和溶氧水平。在一定的溫度和 pH 下，限制性基質(zhì)濃度往往是決定比生長(zhǎng)速率的主要因素。提高比生長(zhǎng)速率有助于提高質(zhì)粒穩(wěn)定性。 主要 表現(xiàn)在重組質(zhì)粒的不穩(wěn)定性， 兩種 表現(xiàn)形式： 1） 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性 重組 DNA 分子上某一區(qū)域發(fā)生缺失、重排、修飾，導(dǎo)致其表觀生物學(xué)功能的喪失 2） 分配不穩(wěn)定性 整個(gè) 重組 DNA 分子從受體細(xì)胞中 逃逸 基因工程菌不穩(wěn)定性的可能產(chǎn)生機(jī)制 ： ? 受體細(xì)胞 中限制修飾系統(tǒng) 對(duì)外源重組 DNA 分子的降解 ? 外源基因的高效表達(dá)嚴(yán)重干擾受體細(xì)胞 正常生長(zhǎng)代謝 能量、 物質(zhì)的匱乏和外源基因表達(dá)產(chǎn)物的毒性誘導(dǎo)受體細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)：關(guān)閉合成途徑，啟動(dòng)降解程序 ? 重組質(zhì)粒在受體細(xì)胞分裂時(shí)的不均勻 分配 重組質(zhì)粒 逃逸的基本原因 ? 受體細(xì)胞中內(nèi)源性的轉(zhuǎn)座元件促進(jìn)重組分子的缺失重排 培養(yǎng)基 比生長(zhǎng)速率 限制性 基質(zhì) 溫度 pH 和溶氧 外源基因 表達(dá) 遺傳特性 影響基因工程菌穩(wěn)定性的因素 載體的選擇 宿主的選擇 外源基因整合到宿主染色體上 發(fā)酵工藝 一些基因重組菌在復(fù)合培養(yǎng)基中顯示較高的質(zhì)粒穩(wěn)定性 微生物在含有有機(jī)氮源如酵母抽提物、蛋白胨等營(yíng)養(yǎng)豐富的復(fù)合培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，由于培養(yǎng)基提供了生長(zhǎng)必須的氨基酸和其他物質(zhì)，微生物的生長(zhǎng)較基本培養(yǎng)基快。有人將固定化技術(shù)
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