基因工程制藥培訓(xùn)-在線瀏覽
2025-02-06 13:26本頁(yè)面
【正文】 蛋白表達(dá)載體 ? 非融合型表達(dá)載體 ? 分泌型表達(dá)載體 ? 包涵體型表達(dá)載體 已在釀酒酵母中表達(dá)的重組蛋白 種 類 名 稱 疫 苗 乙肝病毒表面抗原 瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子蛋白 HIV 1 外殼蛋白 診斷試劑 丙肝病毒蛋白 HIV 1 抗原 治療用蛋白質(zhì)藥物 上皮生長(zhǎng)因子 胰島素 類胰島素生長(zhǎng)因子 血小板源生長(zhǎng)因子 胰島素前體 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 集落刺激因子 ? 1 抗胰蛋白酶 凝血因子 X II I ? ? 基因工程菌的培養(yǎng) 基因工程菌發(fā)酵的基本操作方式有： 分批培養(yǎng) 分批培養(yǎng)操作簡(jiǎn)單，但因不能控制生長(zhǎng)，獲得的菌體密度也有限 半連續(xù)培養(yǎng)（補(bǔ)料分批） 在 一次投料發(fā)酵的基礎(chǔ)上，流加一定量的營(yíng)養(yǎng)，使細(xì)胞進(jìn)一步的 生長(zhǎng) ，或得到更多的代謝產(chǎn)物 連續(xù)培養(yǎng) 不斷地流加營(yíng)養(yǎng)，并不斷地取出發(fā)酵液。 透析培養(yǎng) 固定化培養(yǎng) 基因工程菌培養(yǎng)方式 補(bǔ)料分批培養(yǎng) 補(bǔ)料分批培養(yǎng)是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進(jìn)一步生長(zhǎng)的培養(yǎng)方法。 連續(xù)培養(yǎng) 連續(xù)培養(yǎng)是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中，攪拌培養(yǎng)至菌體濃度達(dá)到一定程度后，開(kāi)動(dòng)進(jìn)料和出料蠕動(dòng)泵，以一定稀釋率進(jìn)行不間斷培養(yǎng)。 但由于基因工程菌的不穩(wěn)定性，連續(xù)培養(yǎng)比較困難。在這樣的系統(tǒng)中關(guān)鍵的控制參數(shù)是誘導(dǎo)水平、稀釋率和細(xì)胞比生長(zhǎng)速率。 透析培養(yǎng) 透析培養(yǎng)技術(shù)是利用膜的半透性原理使培養(yǎng)物和培養(yǎng)基分離，其主要目的是通過(guò)去除培養(yǎng)液中的代謝產(chǎn)物來(lái)解除其對(duì)生產(chǎn)菌的不利影響。 膜的種類、孔徑、面積，發(fā)酵液和透析液的比例，透析液的組成，循環(huán)流速，開(kāi)始透析的時(shí)間和透析培養(yǎng)的持續(xù)時(shí)間段都對(duì)產(chǎn)物的產(chǎn)率有影響 固定化培養(yǎng) 基因工程菌培養(yǎng)的一大難題是如何維持質(zhì)粒的穩(wěn)定性。由于這一優(yōu)點(diǎn)，基因工程菌固定化培養(yǎng)研究已得到迅速開(kāi)展。 培養(yǎng)條件對(duì) 基因工程菌 穩(wěn)定性的影響 基因重組菌的比生長(zhǎng)速率對(duì)質(zhì)粒穩(wěn)定性有很大影響。 基因重組菌的比生長(zhǎng)速率與培養(yǎng)環(huán)境有關(guān)，如溫度， pH，溶氧，限制性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度，有害代謝產(chǎn)物濃度等。 一般培養(yǎng)基中各成分并不是完全平衡的 ， 經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的培養(yǎng) ， 微生物的生長(zhǎng)通常會(huì)受到一種或幾種物質(zhì)的限制 。在基因重組菌的高密度培養(yǎng)時(shí)，為了維持所需的溶氧水平，除了提高攪拌轉(zhuǎn)速和通氣量，往往還要在通入的空氣中補(bǔ)充氧氣，以提高發(fā)酵罐的供氧能力。 例如，吲哚丙烯酸（ IAA ）是 trp 操縱子阻遏物的部分去阻遏劑，在培養(yǎng)大腸桿菌 MV12（ pVH5）時(shí)，在培養(yǎng)基中加入不同量的 IAA，發(fā)現(xiàn)隨 IAA 量的增加， pVH5 帶有的分支酸合成酶和色氨酸合成酶基因的表達(dá)水平有很大提高，同時(shí)比生長(zhǎng)速率下降，培養(yǎng)液中 Trp－ 的比例上升。 改進(jìn) 載體受體系統(tǒng) 以 增加質(zhì)粒穩(wěn)定性為目的的構(gòu)建方法包括： 1）將 R1 質(zhì)粒上的 parB 基因引入表達(dá)型載體中，其表達(dá)產(chǎn)物可以選擇性地殺死由于分配不均勻所產(chǎn)生的無(wú)質(zhì)粒細(xì)胞 2）正確設(shè)置載體上的多克隆位點(diǎn)
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