基因重組和基因工程培訓(xùn)課程-在線瀏覽
2025-02-08 18:00本頁面
【正文】 細(xì)胞之間的 DNA轉(zhuǎn)移及基因重組即為 轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 (transduction)。 目錄 λ噬菌體的整合酶識別噬菌體和宿主染色體的特異靶位點(diǎn)發(fā)生選擇性整合；反轉(zhuǎn)錄病毒整合酶可特異地識別 、 整合反轉(zhuǎn)錄病毒cDNA的 長末端重復(fù)序列 (long terminal repeat, LTR)。 目錄 ? hix為反向重復(fù)序列 ， 它們之間的 H片段可在 Hin控制下進(jìn)行特異位點(diǎn)重組 (倒位 )。rH1為 H1的阻遏蛋白基因 。 輕鏈的基因片段： 重鏈的基因片段： L V J C L V D J C 目錄 ? 重鏈 (IgH)基因的 VDJ重排和輕鏈 (IgL)基因的 VJ重排均發(fā)生在特異位點(diǎn)上 。 此重排的重組酶基因 rag (rebination activating gene)共有兩個(gè) ， 分別產(chǎn)生蛋白質(zhì) RAG1和 RAG2。 ? 大多數(shù)基因在基因組內(nèi)的位置是固定的，但有些基因可以從一個(gè)位置移動(dòng)到另一位置。 目錄 ? 插入序列 (insertion sequences, IS)組成： IR Transposase Gene IR （一）插入序列轉(zhuǎn)座 ? 二個(gè)分離的反向重復(fù) (inverted repeats, IR)序列 ? 特有的正向重復(fù)序列 ? 一個(gè)轉(zhuǎn)座酶（ transposase)編碼基因 目錄 ?插入序列發(fā)生轉(zhuǎn)座的形式： 保守性轉(zhuǎn)座 (conservative transposition) 復(fù)制性轉(zhuǎn)座 (duplicative transposition) 目錄 插入序列的復(fù)制性轉(zhuǎn)座 目錄 ? 轉(zhuǎn)座子 (transposons) —— 可從一個(gè)染色體位點(diǎn)轉(zhuǎn)移到另一位點(diǎn)的分散重復(fù)序列。 1944年 。 1977年 美國南舊金山由博耶和斯旺森建立世界上第一家遺傳工程公司，專門應(yīng)用重組 DNA技術(shù)制造醫(yī)學(xué)上重要的藥物。 1997年 英國羅林研究所成功的克隆了多莉。 ?獲取同一拷貝的過程稱為克隆化 (cloning)，即無性繁殖。 ?DNA克隆 目錄 ? 生物技術(shù)工程 : 基因工程、蛋白質(zhì)工程、酶工程、細(xì)胞工程等 ? 目的： ① 分離獲得某一感興趣的基因或 DNA ② 獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物（蛋白質(zhì)） ? 基因工程 (geic engineering) —— 實(shí)現(xiàn)基因克隆所用的方法及相關(guān)的工作稱基因工程，又稱重組 DNA工藝學(xué)。磷酸基和 3180。末端 Klenow片段 又名 DNA聚合酶 I大片段，具有完整 DNA聚合酶 I的 5??3?聚合、 3??5?外切活性，而無 5??3?外切活性。羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針 末端轉(zhuǎn)移酶 在 3180。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ ? 定義： 目錄 與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng) ， 限制外源 DNA， 保護(hù)自身 DNA。 ? 命名： Hin dⅢ 屬 系 株 序 Haemophilus influenzae d株 流感嗜血桿菌 d株的第三種酶 目錄 Ⅱ 類酶識別序列特點(diǎn) —— 回文結(jié)構(gòu) (palindrome) 切口 ： 平端切口 、 粘端切口 GGATCC CCTAGG 目錄 Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 目錄 來源不同的限制酶 ， 但能識別和切割同一位點(diǎn) ， 這些酶稱 同功異源酶 。 這兩個(gè)相同的粘性末端稱為配伍未端 (patible end)。以單鏈 cDNA為模板、經(jīng)聚合反應(yīng)可合成雙鏈 cDNA。 目錄 （四）基因載體 ? 定義 為攜帶目的基因，實(shí)現(xiàn)其無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些 DNA分子。 ?表達(dá)載體 (expression vector) 為使插入的外源 DNA序列可轉(zhuǎn)錄翻譯成 多肽鏈而特意設(shè)計(jì)的載體稱為 表達(dá)載體 。 目錄 (plasmid) 特點(diǎn) : 能在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立自主復(fù)制；帶有某些遺傳信息 , 會(huì)賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀 。 ? 真核表達(dá)載體 (eukaryotic expression vector) 酵母表達(dá)載體、昆蟲表達(dá)載體和哺乳類細(xì)胞表達(dá)載體 目錄 二、重組 DNA技術(shù)基本原理 ? 基本原理 目的基因的獲取 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞 外源基因與載體的連接 克隆載體的選擇和構(gòu)建 重組體的篩選 克隆基因的表達(dá) 目錄 以 質(zhì) 粒 為 載 體 的 DNA 克 隆 過 程 目錄 （一）目的基因的獲取（分） 1. 化學(xué)合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其產(chǎn)物的氨基酸序列 。 目錄 組織或細(xì)胞染色體 DNA 基因片斷 克隆載體 重組 DNA分子 含重組分子的轉(zhuǎn)化菌 限制性內(nèi)切酶 受體菌 基因組 DNA文庫 存在于轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)由克隆載體所攜帶的所有基因組 DNA的集合 ?從基因組 DNA文庫獲取目的基因 目錄 限制酶切位點(diǎn) 限制酶消化 除去中間片段 cos L R cos cos L 左臂 R cos 右臂 真核生物染 色體 DNA 限制酶部分消化 外源 DNA與載體 DNA混合 連接反應(yīng) 體外包裝 用重組噬菌體 感染大腸桿菌 ~20 Kb DNA 片段 cos L R cos ~20 Kb 外源 DNA 片段 基因文庫 用隨機(jī)切割的真核生物染色體 DNA片段構(gòu)建基因文庫 目錄
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1