14基因重組和基因工程ppt-powerpoint演示-在線瀏覽
2025-02-15 23:37本頁(yè)面
【正文】 0。 3180。 3180。 內(nèi)切酶 (ruvC) 內(nèi)切酶 (ruvC) DNA 連接酶 DNA 連接酶 片段重組體 拼接重組體 目 錄 目 錄 二、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 （一）接合作用 當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞 、 或細(xì)菌通過(guò)菌毛相互接觸時(shí) ， 質(zhì)粒 DNA從一個(gè)細(xì)胞 （ 細(xì)菌 ） 轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞 （ 細(xì)菌 ） 的 DNA轉(zhuǎn)移稱為 接合作用(conjugation)。 目 錄 例： 溶菌時(shí)，裂解的 DNA片段被另一細(xì)菌攝取。 λ噬菌體的生活史 溶菌生長(zhǎng)途徑 (lysis pathway) 溶源菌生長(zhǎng)途徑 (lysogenic pathway) 例 目 錄 目 錄 目 錄 三 、 位點(diǎn)特異重組 位點(diǎn)特異重組 (sitespecific rebination) 是由整合酶催化 ， 在兩個(gè) DNA序列的特異位點(diǎn)間發(fā)生的整合 。 目 錄 例 （二）細(xì)菌的特異位點(diǎn)重組 沙門氏菌 H片段倒位決定鞭毛相轉(zhuǎn)變 目 錄 hix為反向重復(fù)序列 ， 它們之間的 H片段可在 Hin控制下進(jìn)行特異位點(diǎn)重組 (倒位 )。 rH1為 H1的阻遏蛋白基因 。 輕鏈的基因片段： 重鏈的基因片段： L V J C L V D J C 目 錄 重鏈 (IgH)基因的 VDJ重排和輕鏈 (IgL)基因的 VJ重排均發(fā)生在特異位點(diǎn)上 。 此重排的重組酶基因rag (rebination activating gene)共有兩個(gè) ，分別產(chǎn)生蛋白質(zhì) RAG1和 RAG2。 目 錄 插入序列 (insertion sequences, IS)組成： 二個(gè)分離的反向重復(fù) (inverted repeats, IR)序列 特有的正向重復(fù)序列 一個(gè)轉(zhuǎn)座酶（ transposase)編碼基因 IR Transposase Gene IR 發(fā)生形式： 保守性轉(zhuǎn)座 (conservative transposition) 復(fù)制性轉(zhuǎn)座 (duplicative transposition) （一）插入序列轉(zhuǎn)座 插入序列的復(fù)制性轉(zhuǎn)座 目 錄 目 錄 轉(zhuǎn)座子 (transposons) —— 可從一個(gè)染色體位點(diǎn)轉(zhuǎn)移到另一位點(diǎn)的分散重復(fù)序列。 1980年 開(kāi)始建造 第一家 應(yīng)用重組 DNA技術(shù)生產(chǎn)胰島素的工廠 1997年 英國(guó)羅林研究所成功的克隆了 多莉 目 錄 ? 相關(guān)概念 ? DNA克隆 ? 工具酶 ? 目的基因 ? 基因載體 ? 基本原理 ? 重組 DNA技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系 本節(jié)主要內(nèi)容 目 錄 一 、 重組 DNA技術(shù)相關(guān)概念 克隆 (clone) 來(lái)自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。 （一） DNA克隆 目 錄 技術(shù)水平： 分子克隆 (molecular clone) 即 DNA 克隆 細(xì)胞克隆 個(gè)體克?。▌?dòng)物或植物） 目 錄 DNA克隆 應(yīng)用酶學(xué)的方法 ， 在體外將各種來(lái)源的遺傳物質(zhì) （ 同源的或異源的 、 原核的或真核的 、 天然的或人工的 DNA） 與載體 DNA接合成一具有自我復(fù)制能力的 DNA分子 —— 復(fù)制子 (replicon)， 繼而通過(guò)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞 ， 篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞 ， 再進(jìn)行擴(kuò)增提取獲得大量同一DNA分子 ， 也稱 基因克隆或重組 DNA (rebinant DNA) 。 目 錄 （二）工具酶 ? 限制性核酸內(nèi)切酶 ? DNA聚合酶 Ⅰ ? 逆轉(zhuǎn)錄酶 ? T4DNA連接酶 ? 堿性磷酸酶 ? 末端轉(zhuǎn)移酶 ? Taq DNA聚合酶 目 錄 重組 DNA技術(shù)中常用的工具酶 工 具 酶 功 能 限制性核酸內(nèi)切酶 識(shí)別特異序列，切割 DNA DNA連接酶 催化 DNA中相鄰的 5180。羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使 DNA切口封合或使兩個(gè) DNA分子或片段連接 DNA聚合酶 Ⅰ ① 合成雙鏈 cDNA分子或片段連接 ② 缺口平移制作高比活探針 ③ DNA序列分析 ④ 填補(bǔ) 3180。常用于cDNA第二鏈合成，雙鏈 DNA 3?末端標(biāo)記等 反轉(zhuǎn)錄酶 ① 合成 cDNA ② 替代 DNA聚合酶 I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或 DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸 5180。羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾 堿性磷酸酶 切除末端磷酸基 目 錄 限制性核酸內(nèi)切酶 定義 限制性核酸內(nèi)切酶 (restriction endonuclease, RE)是 識(shí)別 DNA的特異序列 , 并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈 DNA的一類內(nèi)切酶 。 分類 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ （基因工程技術(shù)中常用 Ⅱ 型） 目 錄 第一個(gè)字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名 ， 用大寫； 第二、第三個(gè)字母是該細(xì)菌的種名，用小寫； 第四個(gè)字母代表株； 用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G +
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