第二章基因工程制藥(一)(參考版)
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【正文】 24.11.172024年11月17日星期日9時(shí)20分48秒24.11.17,謝謝大家！,。24.11.1724.11.1709:2009:20:4809:20:48Nov24 相信命運(yùn)，讓自己成長(zhǎng)，慢慢的長(zhǎng)大。2024年11月17日星期日9時(shí)20分48秒09:20:4817 November 2024 科學(xué)，你是國(guó)力的靈魂；同時(shí)又是社會(huì)發(fā)展的標(biāo)志。2024年11月17日星期日上午9時(shí)20分48秒09:20:4824.11.17 讓自己更加強(qiáng)大，更加專業(yè)，這才能讓自己更好。24.11.1724.11.1709:20:4809:20:48November 17, 2024 加強(qiáng)自身建設(shè)，增強(qiáng)個(gè)人的休養(yǎng)。24.11.1709:20:4809:20Nov2417Nov24 日復(fù)一日的努力只為成就美好的明天。24.11.1724.11.17Sunday, November 17, 2024 人生得意須盡歡，莫使金樽空對(duì)月。,47,第二章 基因工程制藥,48,第二章 基因工程制藥,基因工程克隆載體的特點(diǎn),具有復(fù)制 有單一限制內(nèi)切酶切位點(diǎn)或多克隆 位點(diǎn) 有選擇性遺傳標(biāo)記如抗藥基因 拷貝數(shù)高 生物安全性好,49,第二章 基因工程制藥,50,第二章 基因工程制藥,目前使用的載體,按特性可分為： 質(zhì)粒 λ噬菌體 黏性質(zhì)粒 M13噬菌體 酵母 真核細(xì)胞病毒載體,51,第二章 基因工程制藥,細(xì)菌質(zhì)粒,質(zhì)粒是存在于細(xì)菌等微生物細(xì)胞染色質(zhì)以外的共價(jià)閉環(huán)的雙股DNA分子，具有獨(dú)立自主復(fù)制和調(diào)控能力，可賦予宿主細(xì)胞一定的生物性狀。 所產(chǎn)生的mRNA 必須有翻譯的起始信號(hào)。 應(yīng)具有阻遏子，使啟動(dòng)子受到控制，只有當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。,44,第二章 基因工程制藥,應(yīng)有靈活的克隆位點(diǎn)和方便的篩選標(biāo)記，利于外源基因的克隆、鑒定和篩選。,42,第二章 基因工程制藥,大腸桿菌中的基因表達(dá),基因工程的目的和基本手段，是選用合適的載體（vector)把供體DNA（外源基因）運(yùn)載到受體細(xì)胞內(nèi)，從而復(fù)制擴(kuò)增大量的目的DNA分子或轉(zhuǎn)錄表達(dá)為相應(yīng)的產(chǎn)物。 因?yàn)閷?duì)它們的遺傳背景研究得比較清楚，建立了許多適合于它們的克隆載體和DNA 導(dǎo)入方式。 缺點(diǎn)：生長(zhǎng)慢，生產(chǎn)率低，培養(yǎng)條件苛刻，費(fèi)用高，培養(yǎng)液濃度稀。,40,第二章 基因工程制藥,哺乳動(dòng)物細(xì)胞,優(yōu)點(diǎn)：表達(dá)產(chǎn)物可由重組轉(zhuǎn)化細(xì)胞分泌到培養(yǎng)液中，純化容易。 能正確進(jìn)行翻譯后加工。 已有不少真核基因成功表達(dá)。 其基因組小，世代時(shí)間短，有單倍體雙倍體兩種形式，繁殖迅速，無(wú)毒性。 其內(nèi)毒素很難除去。 蛋白質(zhì)不能糖基化。,35,第二章 基因工程制藥,大腸桿菌,限制： 沒(méi)有信號(hào)肽，所以產(chǎn)品多為細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)物，提取時(shí)需破碎細(xì)胞，這樣細(xì)胞質(zhì)內(nèi)其他蛋白質(zhì)也釋放出來(lái)，造成提取困難 。,34,第二章 基因工程制藥,原核細(xì)胞－大腸桿菌,因?yàn)榇竽c桿菌的分子遺傳學(xué)研究深入，生長(zhǎng)迅速，所以目前仍是基因工程研究中采用最多的原核表達(dá)體系。 基因工程中基因高效表達(dá)研究是指外源基因在某種細(xì)胞中的表達(dá)活動(dòng)，即剪切下外源基因片段，拼接到另一個(gè)基因表達(dá)體系中，使其能獲得原生物活性又可高產(chǎn)的表達(dá)產(chǎn)物。 費(fèi)用較高。,28,第二章 基因工程制藥,人工化學(xué)合成的限制,不能合成太長(zhǎng)的基因，50~60bp。 其先決條件是已知目的基因的核苷酸序列，或已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，按相應(yīng)的密碼子推導(dǎo)出DNA 的堿基序列。 1985，PCR發(fā)明以后，RTPCR得到了廣泛的
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