第二章基因工程制藥新版4(參考版)
2024-11-19 22:08本頁面
【正文】 24.11.172024年11月17日星期日9時23分26秒24.11.17,謝謝大家！,。24.11.1724.11.1709:2309:23:2609:23:26Nov24 相信命運，讓自己成長，慢慢的長大。2024年11月17日星期日9時23分26秒09:23:2617 November 2024 科學，你是國力的靈魂；同時又是社會發(fā)展的標志。2024年11月17日星期日上午9時23分26秒09:23:2624.11.17 讓自己更加強大，更加專業(yè)，這才能讓自己更好。24.11.1724.11.1709:23:2609:23:26November 17, 2024 加強自身建設，增強個人的休養(yǎng)。24.11.1709:23:2609:23Nov2417Nov24 日復一日的努力只為成就美好的明天。24.11.1724.11.17Sunday, November 17, 2024 人生得意須盡歡，莫使金樽空對月。 （4）由于用于基因表達的細胞均為傳代細胞，而一般認為傳代細胞都是惡化性細胞，因此，由它所生產出的基因表達產物有可能存在致癌的疑問。 （2）單位體積的生產率低。,優(yōu)點,（1）基因的表達產物可以迅速通過細胞分泌到培養(yǎng)液之中， （2）培養(yǎng)液成人完全能夠進行人工控制， （3）基因產物在動物細胞內已經進行了糖基化，更加接近于天然產物。,1982，Palmiter將大鼠的生長激素基因用微注射方法導入小鼠的受精卵中獲得巨型小鼠（supermouse），從而在理論上和實踐意義上都將轉基因技術提高一步，引起生物學界極大的關注，為基因工程育種提供誘人的前景。 （4）菌株的分泌能力要強。 （2）菌體內源蛋白酶要弱。,（6）宿主酵母菌株性能,宿主酵母的生理狀況等因素對外源基因的表達有明顯的影響。,（4）終止序列對表達效率也有影響,常用終止序列： ADH1 CYC1 Mfal PGK,（5）外源蛋白質的糖基化,應用酵母菌生產外源蛋白質的糖基化能夠增強所表達出蛋白質的生理活性。 （2）誘導型啟動子啟動子基因有PH0GALI、GAL10，其基因表達受誘導物的影響.,（3）分泌信號的表達效率,分泌信號的表達效率對于目的基因表達有影響。 酵母菌啟動子類型分2類： （1）組成型啟動子它在酵母生長的各時期都能發(fā)揮作用。,影響目的基因在酵母菌中表達的因素,（1）外源基因的拷貝數(shù)量 （2）啟動子的類型 （3）分泌信號的表達效率 （4）終止序列對表達效率也有影響 （5）外源蛋白質的糖基化 （6）宿主酵母菌株性能,（1）外源基因的拷貝數(shù)量,外源基因的拷貝數(shù)量及其在宿主細胞內的穩(wěn)定性對于基因表達起決定作用。 （2）精確表達載體此類載體要求外源基因有特定的插入位點，以便基因表達產物與天然產物相同。,（4）表達載體,表達載體 = 酵母菌啟動子 + 載體 + 外源性目的DNA + 酵母菌終止子。 那些既能夠在大腸桿菌中進行質粒復制和表型選擇，又能夠在酵母菌中進行質粒復制和表型選擇的載體，稱作克隆載體。 （D）YIp稱作酵母整合型質粒，這類載體有很好的穩(wěn)定性，但是拷貝數(shù)只有1個。 （B）YRp稱作酵母復制型質粒，這類載體穩(wěn)定性差、拷貝數(shù)量小。 載體 影響目的基因在酵母菌中表達的因素,載體,（1）定義 （2）類別 （3）克隆載體 （4）表達載體,（1）定義,酵母載體是可以攜帶外源性目的基因進入酵母細胞內、并且能在酵母細胞內保存、復制、隨著酵母細胞的分裂而傳遞到子代細胞的DNA或者RNA單位。 ④ mRNA的穩(wěn)定性，通常它的半衰期為幾秒25min. ⑤密碼子偏愛性是影響翻譯效率的重要因素。 ② SD序列和真核基因起始密碼ATG間的間距，會影響基因產物的表達。常見的啟動子有l(wèi)ac、trp、tac、bla等。 缺點： （1）產量不高， （2）信號肽不進行切割或不能定點切割。 基因結構為“原核啟動子—原核SD序列—原核結構基因片段—細菌信號肽基因—真核結構基因序列—原核終止密碼子”。,（C2）融合基因—非融合蛋白,基因結構為“原核啟動子—原核SD序列—原核ATG—TGATG（真核基因起始結構）—真核結構基因序列—原核終止密碼子” 這一方式能夠提高表達效率。,[C]、非融合蛋白的具體表達方式,非融合蛋白表達方式可分為2種： （C1）非融合基因—非融合蛋白 （C2）融合基因—非融合蛋白,（C1）非融合基因—非融合蛋白,基因結構為“原核啟動子—原核SD序列—ATG—真核結構基因序列—原核終止密碼子” 要求1：SD序列和ATG之間的距離要合適，相差23個堿基，其表達效率就大受影響。,[B]、優(yōu)缺點,優(yōu)點非融合蛋白能夠較好地保持真核蛋白質的生物活性。,（D1）融合表達載體的構建,（D2）常用的融合蛋白（原核細菌表達蛋白質）,（D3）受體蛋白的切除方法,化學斷裂法：溴化氰（CNBr）Met（切點）AA 酶促斷裂法：凝血因子Xa，有蛋白酶活性，識別序列:Ile－Glu－Gly－Arg（切點）AA,（2）非融合蛋白,[A]、定義 [B]、優(yōu)缺點 [C]、具體表達方式,[A]、定義,非融合蛋白表達方式是指工程菌大腸桿菌進行蛋白質翻譯時，是以真核生物的mRNA的AUG為翻譯起始點，
公司管理相關推薦
鄂ICP備17016276號-1