第二章基因工程制藥(二)(參考版)
2024-11-19 22:12本頁(yè)面
【正文】 2024年11月17日星期日9時(shí)21分18秒Sunday, November 17, 2024 愛情，親情，友情，讓人無(wú)法割舍。上午9時(shí)21分18秒上午9時(shí)21分09:21:1824.11.17 每天都是美好的一天，新的一天開啟。2024年11月上午9時(shí)21分24.11.1709:21November 17, 2024 這些年的努力就為了得到相應(yīng)的回報(bào)。2024年11月17日上午9時(shí)21分24.11.1724.11.17 精益求精，追求卓越，因?yàn)橄嘈哦鴤ゴ蟆?9:21:1809:21:1809:21Sunday, November 17, 2024 安全放在第一位，防微杜漸。09:21:1809:21:1809:2111/17/2024 9:21:18 AM 做一枚螺絲釘，那里需要那里上。,61,第二章 基因工程制藥,生活中的辛苦阻撓不了我對(duì)生活的熱愛。 而基因工程發(fā)酵是為了獲得最大量的基因表達(dá)產(chǎn)物。 最佳速度和最低失敗率等,57,第二章 基因工程制藥,基因工程菌的培養(yǎng)設(shè)備,目前應(yīng)用發(fā)酵罐大規(guī)模培養(yǎng)基因工程菌。 最好質(zhì) 量、最低消耗。 培養(yǎng)后期重點(diǎn)是優(yōu)化外源蛋白的表達(dá)條件,其最佳pH為6.0～6.5。 應(yīng)根據(jù)工程菌的生長(zhǎng)和代謝情況，對(duì)pH進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)。 這時(shí)菌群數(shù)目倍增，對(duì)營(yíng)養(yǎng)和氧的需求量急增，營(yíng)養(yǎng)和氧成了菌群旺盛代謝的限制因素。,53,第二章 基因工程制藥,誘導(dǎo)時(shí)機(jī)的影響,一般在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期或?qū)?shù)生長(zhǎng)期后期升溫誘導(dǎo)表達(dá)。 外源基因的高效表達(dá)需要大量的能量，促進(jìn)細(xì)胞的呼吸作用，提高對(duì)氧的需求。 若能提高溶氧速度和氧的利用率，則能提高發(fā)酵產(chǎn)率。,51,第二章 基因工程制藥,溶解氧的影響,對(duì)于好氧發(fā)酵,溶解氧濃度是重要的參數(shù)。 高溫或低溫都會(huì)使發(fā)酵異常，影響終產(chǎn)物的形成并導(dǎo)致減產(chǎn)。 影響代謝調(diào)控機(jī)制。 影響各種酶的反應(yīng)速度。,49,第二章 基因工程制藥,溫度的影響,溫毒對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控作用發(fā)生在復(fù)制轉(zhuǎn)錄翻譯和小分子調(diào)節(jié)分子的合成等水平上。 量小，延長(zhǎng)菌體延遲期，不利于外源基因的表達(dá)。 無(wú)機(jī)磷在許多代謝反應(yīng)中是一個(gè)效應(yīng)因子，磷濃度不同，影響菌體生長(zhǎng)。,47,第二章 基因工程制藥,培養(yǎng)基的影響,在氮源中，酪蛋白水解物有利于產(chǎn)物的合成與分泌。 葡萄糖對(duì)lac啟動(dòng)子有阻遏作用。使用葡萄糖和甘油對(duì)菌體比生長(zhǎng)速率及呼吸強(qiáng)度相差不大。 還有無(wú)機(jī)鹽、維生素等。 常用的碳源有：葡萄糖、甘油、乳糖、甘露糖、果糖等。 它不僅涉及宿主載體和克隆基因之間的相互關(guān)系還和環(huán)境有關(guān)。 便于進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，特別是對(duì)于分泌型菌更為有利。,41,第二章 基因工程制藥,透析培養(yǎng),利用膜的半透性使代謝產(chǎn)物和培養(yǎng)基分離。 由于基因工程菌不穩(wěn)定，可將生長(zhǎng)階段和基因表達(dá)階段分開，進(jìn)行兩階段連續(xù)培養(yǎng)。 為保持基因工程菌生長(zhǎng)所需的良好環(huán)境，延長(zhǎng)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，獲得高密度菌體，通常把溶氧控制和補(bǔ)料措施結(jié)合起來(lái)，根據(jù)生長(zhǎng)規(guī)律來(lái)調(diào)節(jié)補(bǔ)料速率。 通過培養(yǎng)罐操作確定培養(yǎng)參數(shù)和控制方案以及順序。 高拷貝質(zhì)粒的工程菌（240拷貝）中，生長(zhǎng)速率和菌體總蛋白合成均減少。 由于菌體中小分子前體量和催化結(jié)構(gòu)是有限的，因而生物大分子的合成處于亞飽和狀態(tài)，基因工程菌質(zhì)粒的表達(dá)需與宿主細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)共同的前體和催化結(jié)構(gòu)，限制了菌體的比生長(zhǎng)速率,35,第二章 基因工程制藥,質(zhì)粒存在對(duì)菌體代謝的影響,同樣培養(yǎng)基當(dāng)中，工程菌的比生長(zhǎng)速率低于其宿主細(xì)胞。 采用磷酸乙酰化酶缺陷株作為宿主細(xì)胞，阻止乙酸產(chǎn)生，可提高產(chǎn)量。 加入蛋氨酸和
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