基因重組和基因工程培訓課程(參考版)
2025-01-09 18:00本頁面
【正文】 目錄 演講完畢，謝謝觀看！ 。 Cosmid vector， YAC。 ?標準： 目錄 （二）基因治療的概念 ?定義 基因治療 (gene therapy)是向有功能缺陷的細胞補充相應功能的基因，以糾正或補償其基因的缺陷，從而達到治療的目的。 三、基因診斷與治療 （一）基因診斷的概念 目錄 ?基本過程： 區(qū)分或鑒定 DNA的異常 分離、擴增待測的 DNA片斷 目錄 ? 能正確擴增靶基因； ? 能準確區(qū)分單個堿基的差別； ? 本底或噪聲低，不干擾 DNA的鑒定 。 目錄 重組 DNA醫(yī)藥產品 產 品 功 能 組織胞漿素原激活劑 抗凝 血液因子 VIII 促進凝血 顆粒細胞 巨噬細胞集落剌激因子 剌激白細胞生成 促紅細胞生成素 剌激白細胞生成 生長因子 (bFGF, EGF) 刺激細胞生長與分化 生長素 治療侏儒癥 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細胞介素 激活、剌激各類白細胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 利用其結合特異性進行診斷試驗、腫瘤導向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預防霍亂 目錄 基因診斷 (geic diagnosis)是 利用分子生物學及分子遺傳的技術和原理 ， 在DNA水平分析 、 鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換 、 缺失或插入等突變 。 ?美國 Eli Lilly公司于 1982年首先利用重組DNA技術合成人胰島素并投放市場，標志著生物工程藥物時代的開始。 1. 原核表達體系 ( ) 目錄 大鼠胰島素原 cDNA 的表達和分泌 目錄 目錄 ? 優(yōu)點： 可表達克隆的 cDNA及真核基因組 DNA 可適當修飾表達的蛋白質 表達產物分區(qū)域積累 ? 缺點： 操作技術難、費時、經濟 ? 轉染 —— 將表達載體導入真核細胞的過程 方法： 磷酸鈣轉染 DEAE葡聚糖介導轉染 電穿孔 脂質體轉染 顯微注射 （酵母、昆蟲、乳類動物細胞） 目錄 表達載體 pFASTBACI 的物理圖譜 目錄 表達載體 YEpI PT的物理圖譜 目錄 第三節(jié) 重組 DNA技術與醫(yī)學 的關系非常密切并前景遠大 DNA Rebination Technique is Closly Related with Medicine and has a Good Perspective 目錄 一、疾病基因的發(fā)現(xiàn)與克隆 根據基因定位克隆之并研究其性質，而認識疾病的分子機制。 3180。 目錄 由平端加上新的酶切位點，再用限制酶切除產生粘性末端，而進行粘端連接 。 λ核酸外切酶 λ核酸外切酶 末端轉移酶 + dATP 末端轉移酶 + dTTP T4 DNA連接酶 15186。 A(A)nA A(A)nA 3180。 5180。 3180。 5180。 3180。 5180。 3180。 5180。 3180。 5180。 3180。C 重組體 載體自連 目的基因 自連 目錄 在末端轉移酶 (terminal transferase) 的作用下 ， 在 DNA片段末端加上同聚物序列 、 制造出粘性末端 ， 再進行粘端連接 。C 重組體 配伍末端的連接情況和同一限制酶切位點連接相似。 目錄 （三）外源基因與載體的連接（接） 方式： (1)同一限制酶切位點連接 (2)不同限制酶切位點連接 配伍末端連接 非配伍末端連接 1. 粘性末端連接 目錄 Bam HⅠ 切割反應 GGATCC CCTAGG T4 DNA連接酶 15186。 2. 基因組 DNA文庫 (genomic DNA library) 3. cDNA文庫 (cDNA library) 4. 聚合酶鏈反應 (polymerase chain reaction, PCR) (見第 22章 ) 目錄 化學合成法獲取目的基因 由已知氨基酸序列推測可能的 DNA序列。 目錄 目錄 目錄 ? λ噬菌體 DNA改造系統(tǒng) λgt系列（插入型，適用 cDNA克?。? EMBL系列（置換型，適用基因組克?。? (phage) ? M13噬菌體 DNA改造系統(tǒng)（含 lacZ基因） M13mp系列 pUC系列 目錄 3. 粘性質粒 (cosmid) 目錄 ? 酵母人工染色體 (yeast artificial chromosome, YAC) ? 細菌人工染色體 (bacterial artificial chromosome, BAC) ? 動物病毒 DNA改造的載體 （如腺病毒，腺病毒相關病毒，逆轉錄病毒） 目錄 ? 原核表達載體 (prokaryotic expression vector) 目前應用最廣泛的是大腸桿菌表達載體。 目錄 ? 載體的選擇標準： ?能自主復制； ?具有兩個以上的遺傳標記物，便于重組體的篩選和鑒定； ?有克隆位點（外源 DNA插入點），常具有多個單一酶切位點，稱為多克隆位點； ?分子量小，以容納較大的外源 DNA。 ? 常用載體 質粒 DNA 噬菌體 DNA 病毒 DNA 目錄 ?克隆載體 (cloning vector) 為使插入的外源 DNA序列被擴增而特意設計的載體稱為 克隆載體 。 ? 基因組 DNA (genomic DNA) 指代表一個細胞或生物體整套遺傳信息(染色體及線粒體 )的所有 DNA序列。 Bam HⅠ Bg lⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G + + A TCTAG GATCT A ? 同尾酶 目錄 名 稱
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