【正文】
。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽(yáng)性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽(yáng)性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參見(jiàn)試劑說(shuō)明書。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。 送標(biāo)本的時(shí)間在采集標(biāo)本后超過(guò)2h。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 申請(qǐng)單項(xiàng)目與標(biāo)本不符。恥骨上皮膚經(jīng)碘酒消毒后，再以75％乙醇擦拭，用無(wú)菌注射器作膀胱穿刺，吸取尿液后排去注射器內(nèi)的空氣，針頭插于無(wú)菌橡皮塞上送檢。 兩側(cè)腎盂尿　由?？漆t(yī)生采集，左右側(cè)標(biāo)本必須標(biāo)明，避免混淆而誤診。 男性　翻轉(zhuǎn)包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水沖洗，留取中段尿。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　尿液。參考文獻(xiàn)1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。11. 危急值報(bào)告直接涂片找到細(xì)菌或培養(yǎng)陽(yáng)性均作危急值報(bào)告。結(jié)核分枝桿菌引起結(jié)核性腦膜炎?；撔阅X膜炎最多見(jiàn)腦膜炎奈瑟菌，肺炎鏈球菌居第二位。 流感嗜血桿菌容易在外界環(huán)境中死亡，腦膜炎奈瑟菌對(duì)寒冷和干燥均很敏感，在體外容易自溶，故不論是涂片鏡檢還是進(jìn)行培養(yǎng)均應(yīng)及時(shí)送檢。經(jīng)培養(yǎng)48h，仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)者，報(bào)告“培養(yǎng)2日無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。7. 操作流程腦脊液離心觀察菌落特征及涂片、染色血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板5% CO2 35℃培養(yǎng)1824h發(fā)出報(bào)告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)沉淀物涂片、染色8. 結(jié)果報(bào)告無(wú)論是涂片還是培養(yǎng)，一旦檢測(cè)到陽(yáng)性細(xì)菌應(yīng)立即電話或書面通知臨床醫(yī)師。
分離培養(yǎng) 用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心沉淀的沉淀物，分別接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱平板，置于5%~10%CO2 環(huán)境中35℃培養(yǎng)18～24 h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，根據(jù)菌落特點(diǎn)、形態(tài)與染色及生化反應(yīng)鑒定細(xì)菌，并作藥敏試驗(yàn)。 新生隱球菌涂片檢查　取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負(fù)染色，或取腦脊液的離心沉淀物接種于沙氏培養(yǎng)基上，置于35℃培養(yǎng)2～5日，根據(jù)菌落特性，涂片染色鏡檢作出報(bào)告。根據(jù)染色及形態(tài)特征，?？沙醪教崾炯?xì)菌的種類。6. 檢驗(yàn)步驟接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)箱等。 VITEK鑒定系統(tǒng)。 標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置室溫，放置時(shí)間不應(yīng)超過(guò)2h，切勿放冰箱，否則影響檢出率。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)本標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符。腦膜炎奈瑟菌離體后能產(chǎn)生自溶酶，迅速自溶，肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌離體后也易死亡。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　腦脊液。參考文獻(xiàn)1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。疑典型形態(tài)細(xì)菌所致肺部感染時(shí)，常先做痰液和支氣管分泌物涂片、染色鏡檢（如肺部結(jié)核痰液涂片、抗酸染色，鏡檢找抗酸染色陽(yáng)性結(jié)核分枝桿菌，有助于細(xì)菌培養(yǎng)檢查。肺結(jié)核由結(jié)核分枝桿菌引起的。兒童細(xì)菌性肺炎多為流感嗜血桿菌所致。若從患者痰標(biāo)本中查見(jiàn)致病菌或條件致病菌，提示可能有呼吸道細(xì)菌感染。10. 臨床意義上呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)生長(zhǎng)的細(xì)菌是否與疾病有關(guān)，需各方面綜合分析，排除常居菌后，才可作出正確的判斷。，其毒力很低，但由拔牙等原因造成的局部損傷中侵入血流，可引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎等感染，故從血液中分離出草綠色鏈球菌有臨床意義。 未檢出致病菌時(shí)應(yīng)報(bào)告“正常菌群”。 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。 接種　處理后痰液接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱（或EMB、中國(guó)藍(lán)）瓊脂平板，置5％～10％CO2 環(huán)境中，35℃培養(yǎng)18～24 h。
　 分離培養(yǎng) 培養(yǎng)標(biāo)本的選擇　應(yīng)選擇黏液膿痰作涂片，排除不合格標(biāo)本。如查見(jiàn)中間部分的菌絲為革蘭陽(yáng)性，而四周放射的末端為革蘭陰性，萋尼染色為非抗酸性者，可報(bào)告為”找到革蘭陽(yáng)性桿菌疑似放線菌”。 結(jié)核分枝桿菌涂片　參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。表530　痰標(biāo)本鏡下分類分級(jí)白細(xì)胞（個(gè)）上皮細(xì)胞（個(gè)）A2510B2525C1025　　　　　　注：A、B兩種情況的痰標(biāo)本適合做培養(yǎng)，C不合格，應(yīng)重新留標(biāo)本。 涂片檢查　可以確定標(biāo)本是否適合做細(xì)菌培養(yǎng)，直接涂片鏡檢，依據(jù)低倍鏡下觀察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)目多少來(lái)評(píng)定，見(jiàn)下表530。6. 檢驗(yàn)步驟接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)箱等。 VITEK鑒定系統(tǒng)。 標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，放置時(shí)間不應(yīng)超過(guò)2h。 痰標(biāo)本留取放置時(shí)間太長(zhǎng)，超過(guò)2h。 痰涂片白細(xì)胞10／低倍視野，上皮細(xì)胞25／低倍視野。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 申請(qǐng)單姓名、科別、床號(hào)與標(biāo)本的標(biāo)簽不符。
　 氣管穿刺法　在環(huán)甲膜下穿刺抽取痰液，收集標(biāo)本，適用于厭氧菌培養(yǎng)。
　 　在留取痰之前，用清水反復(fù)漱口，應(yīng)從氣管深部咳出痰，吐入無(wú)菌容器內(nèi)。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　痰、咽拭、支氣管肺泡灌洗吸出液、支氣管沖洗液或刷子、肺穿刺等。參考文獻(xiàn)1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上海科學(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：呼吸系統(tǒng)標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：呼吸系統(tǒng)標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范呼吸道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。③病毒性：輪狀病毒等。引起感染性腹瀉的病原微生物有：①細(xì)菌性：產(chǎn)毒素型腹瀉，包括霍亂弧菌、腸毒素型大腸埃希菌等；侵襲型腹瀉，包括志賀菌、腸致病型大腸埃希菌和腸侵襲型大腸埃希菌等；食物中毒，包括沙門菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽胞桿菌和肉毒梭菌等；偽膜性腸炎，包括艱難梭菌或金黃色葡萄球菌；慢性腹瀉，可能由結(jié)核桿菌引起。 糞便標(biāo)本有很多雜菌，但不能由此認(rèn)為糞便標(biāo)本的采集就無(wú)需注意雜菌污染，為防止污染必須注意標(biāo)本的采集方法。
注意事項(xiàng) 空腸彎曲菌是微需氧菌，初次分離時(shí)需5%～10%CO2和85%氮。 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。
　　 真菌培養(yǎng)　參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。
　　 艱難梭菌培養(yǎng)　取液狀糞便立即接種于環(huán)絲氨酸頭孢西丁果糖瓊脂（簡(jiǎn)稱CCFA）平板上，并將糞便作102～106稀釋后定量接種?！?空腸彎曲菌培養(yǎng)　參見(jiàn)《彎曲菌屬檢驗(yàn)操作規(guī)程》。
　　 副溶血弧菌培養(yǎng)　參見(jiàn)《副溶血弧菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。
　　 致病性大腸埃希菌培養(yǎng)　參見(jiàn)《致病性大腸埃希菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。只有懷疑霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹瀉時(shí)，才作直接涂片檢查（觀察動(dòng)力和菌群比例）?！　?涂片檢查　糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多，僅以染色性和形態(tài)無(wú)法分辨是否為病原菌。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見(jiàn)質(zhì)量管理。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)箱等。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、麥康凱平板、SS平板、TCBS平板及相關(guān)生化試劑等。 送檢的糞便標(biāo)本混有尿液。保存彎曲桿菌和弧菌的標(biāo)本，需加CaCl2(100mg/L)試劑。培養(yǎng)艱難梭菌的標(biāo)本保存于20℃以下。
　　 直腸拭子　如不易獲得糞便時(shí)，或排便困難患者及嬰兒，可用直腸拭子采取，即以無(wú)菌棉拭用保存液或生理鹽水濕潤(rùn)后，插入肛門內(nèi)4～5cm(幼兒2～3cm)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)取出，插入卡布（CaryBlair）運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)或無(wú)菌容器內(nèi)送檢。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　糞便，直腸拭子。參考文獻(xiàn)1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。胸腔感染的病原菌以結(jié)核分枝桿菌多見(jiàn)，其次是金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等；腹腔感染的病原菌以腸道細(xì)菌如大腸埃希菌、糞腸球菌，以及結(jié)核分枝桿菌多見(jiàn)；心包炎和關(guān)節(jié)腔液以金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌等多見(jiàn)。10. 臨床意義各個(gè)部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于確定該部位是否有細(xì)菌感染具有重要的診斷價(jià)值。 加入抗凝劑的標(biāo)本（如胸腹水）采集后要與抗凝劑充分混勻并及時(shí)送檢。 查見(jiàn)細(xì)菌，報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。
結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。此法可提高陽(yáng)性檢出率。次日觀察固體表面菌苔生長(zhǎng)及瓶中液體是否混濁。 分離培養(yǎng)
　　 一般細(xì)菌培養(yǎng)　接種血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板（或EMB及中國(guó)藍(lán)瓊脂平板），5％～10％CO2 條件下，35℃培養(yǎng)18～24 h，根據(jù)菌落及染色形態(tài)特點(diǎn)，作出初步判斷。 涂片檢查　膿性標(biāo)本直接涂片。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見(jiàn)質(zhì)量管理。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽(yáng)性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽(yáng)性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參見(jiàn)試劑說(shuō)明書。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。 標(biāo)本不是無(wú)菌留取，容器不符合要求。如懷疑厭氧菌感染，應(yīng)做床邊接種或接種運(yùn)送培養(yǎng)基。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類型　胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液、鞘膜液等。在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨，使細(xì)菌混勻在液體培養(yǎng)基中參考文獻(xiàn)1周庭銀編著，臨床微生物學(xué)診斷與圖解（第二版）.上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,20072葉應(yīng)嫵，王毓三，：東南大學(xué)出版社，2006 江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：穿刺液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件