【正文】 。一般不進(jìn)入血液，產(chǎn)生的外毒素可損害心肌和神經(jīng)系統(tǒng)，病 死率高。 ℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí)后，報(bào)告細(xì)菌鑒定及藥敏結(jié)果。 5. 用 API Coryne 系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。 ：陽(yáng)性；硝酸鹽還原試驗(yàn)：陽(yáng)性；分解葡萄糖、麥芽糖；蔗糖、尿素酶：陰性。 棒狀桿菌屬的常規(guī)鑒定 ，革蘭染色并鏡檢。 KB 法做藥敏， β 內(nèi)酰氨酶陽(yáng)性者用紅霉素、氯霉素、磺胺類、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、亞胺培南； β 內(nèi)酰氨酶陰性者用紅霉素、氯霉素、頭孢菌素、環(huán)丙沙星。 酶試驗(yàn)：陽(yáng)性。 ：陽(yáng)性。 ，菌體小，呈成蔟、雙、短鏈狀排列。 ，用 KB 法做藥敏試驗(yàn)，用硝基頭孢做 β 內(nèi)酰氨酶測(cè)定。 。 ：陽(yáng)性。 作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 奈瑟菌屬的常規(guī)鑒定 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ043 奈瑟菌屬的常規(guī)鑒定 ，革蘭染色并鏡檢。 臨床意義：糞腸球菌主要引起醫(yī)院感染，最常見(jiàn)為尿道感染，其中大部分與尿道器械操作、導(dǎo)尿等有關(guān)；其次為腹部和盆腔等部位的創(chuàng)傷和外科術(shù)后感染。 ：陽(yáng)性 ：能在含 ％ NaCI 的心浸液肉湯中生長(zhǎng)。 、不透明、表面光滑、中等大小的圓形菌落，在血平板上主要表現(xiàn)為 γ 或 α 溶血現(xiàn)象。星座鏈球菌廣泛分布一外部環(huán)境，以及人和動(dòng)物人體表、口鼻腔和腸道，也是化膿性鏈球菌之一，可引起心內(nèi)膜炎、肺炎、菌血癥、腹腔或皮膚感染。肺炎鏈球菌為口腔和鼻咽部正常菌群，一般不致病，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)，如在寒冷刺激、感冒和麻疹后，可引起大葉性肺炎或支氣管肺炎，還可引起化膿性腦膜炎、中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膿腫及菌血癥和心內(nèi)膜炎等。 VITEK32 系統(tǒng) GPI 鑒定卡和 GPS 藥敏卡進(jìn)行全自動(dòng)細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，如有必要加做補(bǔ)充試驗(yàn)。 敏感試驗(yàn)陽(yáng)性、膽鹽溶菌和莢膜腫脹試驗(yàn)陽(yáng)性，可初步鑒定為肺炎鏈球菌。 4. 觸酶試驗(yàn)（ 3%過(guò)氧化氫試驗(yàn)）：陰性 、膽汁溶 菌陰性、 CAMP 試驗(yàn)陰性可初步鑒定為 A 群鏈球菌（化膿性鏈球菌）。在血平板上生長(zhǎng) 18～ 24h 后可形成直徑為 ～ 2mm的圓形突起菌落和環(huán)繞菌落形成的三種特征性溶血現(xiàn)象： ① 甲型（ α ）溶血：即草綠色鏈球菌； ② 乙型（ β ）溶血：即乙型溶血性鏈球菌， ③ 丙型（ γ ）溶血：即不溶血鏈球菌。 35～ 37℃ ，在 5％ CO2 環(huán)境下生長(zhǎng)更好。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛。 MRSA，耐苯唑西林的凝固酶陰性葡萄球菌為 MRSCN。取 1﹕ 4 稀釋枸櫞酸鈉抗凝血漿 ，加入 3～ 5個(gè)菌落，置 35℃ 培養(yǎng)箱 4～ 6 小時(shí)，觀察血漿有無(wú)凝固發(fā)生。 （ 3%過(guò)氧化氫試驗(yàn)）陽(yáng)性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸試驗(yàn)陽(yáng)性。 作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ040 葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定 、革蘭染色并鏡檢，葡萄球菌為革蘭陽(yáng)性球菌，呈單個(gè)、成雙或葡萄狀排列，菌體呈圓形。 7．同時(shí)做手工藥敏試 驗(yàn)：有 2 種方法 配制 麥?zhǔn)蠁挝粷岫仍摼?，用棉簽均勻涂于念珠菌藥敏平板上，?5min 后貼相應(yīng) ETest 藥敏紙片， 35℃ 培養(yǎng) 24～ 48 小時(shí)，讀取最低抑菌濃度（ MIC）并報(bào)告。 ，用濃度為 %鹽水，配制成 2 麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木鷳乙骸? 2 從冰箱取出鑒定卡（ YBC），待恢復(fù)至室溫后取出編號(hào)，放到卡片架上。 ，待填充完成后用塞子封口，檢查和排除氣 37℃ 孵箱，培養(yǎng) 18～ 24h 后與標(biāo)準(zhǔn)板對(duì)照讀取 NHI 結(jié)果，并記錄在電腦上由電腦分析結(jié)果 ：配制 麥?zhǔn)蠁挝粷岫仍摼?，用棉簽均勻涂?HTM 平板上， 5min 后貼相應(yīng)藥敏紙片（根據(jù) NCCLS 標(biāo)準(zhǔn)選擇藥敏紙片）， 24h 后測(cè)量抑菌環(huán)大小并報(bào)告藥敏結(jié)果。 100%，用裝有結(jié)晶紫的試管調(diào)零， 用 %的鹽水管調(diào) 100%。 作業(yè)指導(dǎo)書(shū) NHI 操作規(guī)程 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ038 ，革蘭氏染色鏡檢，為革蘭氏陰性球菌或革蘭氏陰性桿菌。 ，待填充完成后用塞子封口，檢查和排除氣泡。 100%，用裝有結(jié)晶紫的試管調(diào)零，用 %的鹽水管調(diào) 100%。 ，陽(yáng)性者記錄在卡片上（空圈涂黑）。 Vitek32 閱讀箱內(nèi)，機(jī)器自動(dòng)讀卡。 ，用濃度為 %鹽水 2ml，配制成 麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊木鷳乙?，吸?200μl 該菌懸液到 %的鹽水中，用于藥敏試驗(yàn)。 （ GPI）、藥敏卡 (GPS)，待恢復(fù)至室溫后取出編號(hào)，放到卡片架上。 ：挑取 3～ 5 個(gè)菌落于稀釋人 血漿 (血漿 100μl 加 %生理鹽水 300μl) ，置 35℃ 孵箱內(nèi) 4～ 6 小時(shí)記錄結(jié)果。 作業(yè)指導(dǎo)書(shū) GPI、 GPS 操作規(guī)程 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ036 GPI、 GPS 操作規(guī)程 ，做革蘭氏染色鏡檢，為革蘭氏陽(yáng)性球菌或無(wú)芽胞桿菌。 在打開(kāi)讀數(shù)箱時(shí)，一定要查看熒屏上 reader status。 混懸液濃度要符合要求（按 VITEK 技 術(shù)指南操作）。 關(guān)機(jī)：點(diǎn)擊 system，再點(diǎn)擊 system maintenance，選擇 stop the system 并運(yùn)行 0分鐘，按順序關(guān)閉顯示器、讀數(shù)箱、打印機(jī)、 UPS，最后拔除電源。 ，全日自動(dòng)工作，當(dāng)儀器 遇需要搬動(dòng)移位時(shí)才可關(guān)機(jī)。 ，從熒屏中打開(kāi) Vitek 查看 reader status，了解儀器即將讀的卡片架編號(hào)。 、藥敏卡，編上卡號(hào)，接上充填裝置。 ANAⅡ 系統(tǒng)用索氏梭菌（ ATCC 9714）、迪氏擬桿菌（ ATCC 8502）、單形擬桿菌（ ATCC 8492）作為質(zhì)控菌株， 每一批 RapID ANAⅡ 板條均應(yīng)用這三種質(zhì)控菌株檢測(cè)。根據(jù)編碼號(hào)查找 RapID ANAⅡ 編碼手冊(cè)或 ECC 電子編碼系統(tǒng)確定鑒定結(jié)果。陰性結(jié)果為 0，當(dāng)試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，則根據(jù)此項(xiàng)試驗(yàn)在組中的位置，第一位為 1，第二位為 2，第三位為 4 來(lái)表示。 ANAⅡ 系統(tǒng)的所有試驗(yàn)組合為一組特殊的數(shù)字化編 碼。 。 35～ 37℃ 培養(yǎng) 4～ 6 小時(shí)。 ，輕輕搖動(dòng)板條直至接種液沿板條后部在各檔板間分布均勻，在保持水平位置的情況下，慢慢地朝反應(yīng)孔方向傾斜板條，直至板條后部所有 的接種液沿?fù)醢寰鶆蛄魅敕磻?yīng)孔。 ，重新蓋上封蓋，封好封條。 ， 35～ 37℃ 培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí)以備可能需要的附加試驗(yàn)。 ，接種至 RapID 接種液 2ml（貨號(hào) 8325102）中制成懸液 ，相當(dāng)于 3 號(hào)麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)的濁度。 ：培養(yǎng)基、試驗(yàn)條和試劑由生產(chǎn)廠家進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。每群中將陽(yáng)性結(jié)果相應(yīng)的數(shù)值相加，得到一個(gè) 7 位數(shù)的編碼。 ：用分析圖譜索引，所得的反應(yīng)結(jié)果必需編為數(shù)值編碼。 10 分鐘后，參 考讀表判讀結(jié)果。于 35℃ 培養(yǎng) 24 小時(shí)。在試驗(yàn)條最后 9 個(gè)測(cè)定（ 0 到 GLYG 測(cè)定：）開(kāi)啟 API 培養(yǎng)基，并將余下的菌懸液倒入，混勻，并將新制的菌懸液只注入余下反應(yīng)管內(nèi)。 11 個(gè)測(cè)定（ NIT 到 GEL）杯中均勻注入菌懸液，避 免氣泡形成。 ，編號(hào)。 API Coryne 系統(tǒng)培養(yǎng)盒，倒入約 5ml 蒸餾水，造成濕室。觀察溶血類型并記錄。 ： 痰液及支氣管分泌物 培養(yǎng)檢查 一般細(xì)菌 真菌培養(yǎng) 結(jié)核分枝桿菌 涂片檢查 血平板、麥康凱 沙氏培養(yǎng)基 羅氏培養(yǎng)基 巧克力平板（ 5～ 10%CO2） 觀察菌落 革 蘭氏染色 涂片檢查 革蘭氏染色 抗酸染色 革蘭氏染色、相關(guān)酶的試驗(yàn) Vitek32 鑒定、 ATB Fungus API Aux 真菌及一般細(xì)菌 抗酸桿菌 Vitek32 鑒定、藥敏 BD 鳳凰鑒定、藥敏 鑒定及藥敏試驗(yàn) 確定報(bào)告 ：檢出細(xì)菌，應(yīng)報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。如標(biāo)本中每個(gè)低倍視野內(nèi)鱗狀上皮細(xì)胞多于 25 個(gè)，膿細(xì)胞又少于 10 個(gè)，并找不到病變部分，表示標(biāo)本來(lái)自唾液，標(biāo)本不合格，不必進(jìn)一步檢查，要求重新送檢。做結(jié)核分枝桿菌或真菌培養(yǎng)的痰液如不能及時(shí)送檢，應(yīng)放入 4℃ 冰箱，以免雜菌生長(zhǎng)。 標(biāo)本采集的注意事項(xiàng) 標(biāo)本采集以晨痰為佳，咳前應(yīng)充分嗽口，減少口腔正常菌群的污染。 流程： 標(biāo)本 需氧培養(yǎng) 涂片 厭氧培養(yǎng) 血平板 巧克力（ CO2 環(huán)境） 革蘭氏染色 厭氧血平板、巧克力 麥康凱平板 35℃ 孵育 抗酸染色鏡檢 平板 35℃ 、 48 小時(shí) 分離純化 涂片染 色、 Vitek32 鑒定、藥敏 BD 鳳凰鑒定、藥敏 鑒定、藥敏 血清學(xué)試驗(yàn) 血清學(xué)試驗(yàn) 確定報(bào)告 ：報(bào)告細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果。 結(jié)核桿菌：抗酸染色鏡檢后作初步報(bào)告。 檢驗(yàn)科 作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 膿汁及病灶分泌物 5. 操作流程 膿汁、分泌物 涂片染色 需氧培養(yǎng) （革蘭氏染色、抗酸染色等 3537℃18 24 小時(shí) （血平板、巧克力、麥康凱） 觀察菌落 初步報(bào)告 涂片鏡檢 純培養(yǎng) 血清學(xué)試驗(yàn) Vitek32 鑒定、藥敏 BD 鳳凰鑒定、藥敏 確定報(bào)告 檢驗(yàn)科 作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 生殖系統(tǒng)標(biāo)本的處理 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ030 生殖系統(tǒng)標(biāo)本的處理 生殖系統(tǒng)標(biāo)本培養(yǎng)的主要病原菌 革蘭陽(yáng)性菌 革蘭陰性菌 葡萄球菌 淋病奈瑟菌 腸球菌 大腸埃希菌 化膿性鏈球菌 擬桿菌 厭氧鏈球菌 銅綠假單胞菌 結(jié)核分枝桿菌 變形桿菌 杜克雷嗜血桿菌 標(biāo)本收集：陰道、子宮頸 及前列腺等分泌物應(yīng)由臨床醫(yī)師采集，收集于無(wú)菌試管內(nèi)送檢。 涂片報(bào)告發(fā)現(xiàn)革蘭氏 性 菌，淋球菌要報(bào)告在白細(xì)胞內(nèi)外是否發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌。涂片檢查包括涂片找細(xì)菌、淋球菌、酵母菌等。 3. 檢驗(yàn)步驟 涂片檢查：膿汁及分泌物標(biāo)本均應(yīng)做涂片檢查。如女性做宮頸分泌物細(xì)菌培養(yǎng)，應(yīng)盡量避免雜菌污染。 燒傷創(chuàng)面的分泌物，用滅菌棉拭取多部位創(chuàng)面的膿液或分泌物，置無(wú)菌試管中送檢。 ： 尿液 3000r/min 10～ 15min 3000r/min 10～ 15min 涂片染色 定量培養(yǎng) 細(xì)菌計(jì)數(shù) 觀察菌落 淋球菌培養(yǎng) 結(jié)核桿菌培養(yǎng) 一般細(xì)菌 抗酸桿菌 BD 鳳凰鑒定、藥敏 涂片檢查 血清學(xué)試驗(yàn) Vitek32 鑒定 淋球菌 藥敏 涂片檢查 鑒定試驗(yàn) 確定報(bào)告 作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 膿汁及病灶分泌物 細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn) 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ029 膿汁及病灶分泌物細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn) 革蘭陽(yáng)性菌 革蘭陰性菌 葡萄球菌 腸桿菌科細(xì)菌 鏈球菌 假單胞菌 炭疽芽孢桿菌 擬桿菌 破傷風(fēng)芽孢桿菌 ***謝瓦納拉菌 產(chǎn)氣莢膜梭 菌 嗜血桿菌 結(jié)核分枝桿菌 產(chǎn)堿桿菌 放線菌、奴卡菌 弧菌屬細(xì)菌 念珠菌 氣單胞菌 2. 標(biāo)本采集：標(biāo)本由臨床醫(yī)師行無(wú)菌操作術(shù)采集，但應(yīng)注意以下幾點(diǎn)： 閉鎖性膿腫 疑為厭氧菌感染時(shí)，取材后立即將空氣排空，同時(shí)針尖插入橡皮塞內(nèi)防止空氣進(jìn)入，連同注射器一并送檢。 用專用培養(yǎng)基培養(yǎng)淋球菌經(jīng)鑒定可直接報(bào)告有淋球菌生長(zhǎng)但不做菌落計(jì)數(shù)，如涂片發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)或外 檢驗(yàn)科 作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 尿液的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn) 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ028 有革蘭氏陰性雙球菌可報(bào)告 “ 發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌 ” 。陽(yáng)性結(jié)果可提前報(bào)告。 革蘭氏陰性菌落計(jì)數(shù)大于 105cfu/ml，革蘭氏陽(yáng)性菌計(jì)數(shù)大于 104cfu/ml，真菌大于 103cfu/ml 有診斷意義。 結(jié)核菌培養(yǎng)：取沉淀物接種羅氏培養(yǎng)基， 35℃ 培養(yǎng) 3～ 4 星期，觀察有無(wú)可疑菌落生長(zhǎng)。根據(jù)菌落特征、涂片染色結(jié)果，選擇相應(yīng)的鑒定卡及藥敏卡上 Vitek32/BD 鳳凰全自動(dòng)細(xì) 菌鑒定和藥敏分析儀 ,進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)，如培養(yǎng) 48 小時(shí)無(wú)菌生長(zhǎng)，即報(bào)告 “ 無(wú)菌生長(zhǎng) ” 。如找到紅色桿菌，可報(bào)告 “ 發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌 ” 。革蘭染色后，如發(fā)現(xiàn)發(fā)亮的芽生孢子和假菌絲，就可報(bào)告 “ 霉菌孢子及菌絲 ” 。如未查見(jiàn)上述細(xì)菌可報(bào)告 “ 未發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌 ” 。 : 涂片檢查 一般細(xì)菌及淋病奈瑟菌涂片：以無(wú)菌操作吸取尿液 10ml， 3000r/min 離心 15min，去上清液，取沉淀涂片，革蘭氏染色鏡檢，作初步報(bào)告。 取中段尿作培養(yǎng)時(shí)先要進(jìn)行前尿道的清洗消毒，以免 前尿道寄生菌群污染標(biāo)本。 6．陽(yáng)性培養(yǎng)結(jié)果應(yīng)作危急值報(bào)告，并填寫(xiě)危 急值報(bào)告單。腦脊液也可直接注入血培養(yǎng)瓶放入 BacT/Alert 120 或 BACTEC 9050 中進(jìn)行監(jiān)測(cè)。新型隱球菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負(fù)染色。無(wú)色 透明的腦脊液，應(yīng)離心后涂片、染色、鏡檢，根據(jù)染色及形態(tài)特征可初步提示細(xì)菌的種類。切不可低溫（冰箱）保存。 作業(yè)指導(dǎo)書(shū) 腦脊液的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn) 文件編號(hào)： LAB－ OP－ XJ027 腦脊液的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn) 腦脊液培養(yǎng)常見(jiàn)病原菌