【正文】 此反應(yīng)操作復(fù)雜，敏感性高，特異性強(qiáng)，能測出少量抗原和抗體，所以應(yīng)用范圍較廣。其試驗(yàn)原理是補(bǔ)體不單獨(dú)和抗原或抗體結(jié)合。如果補(bǔ)體與綿羊紅細(xì)胞、溶血素的復(fù)合物結(jié)合，就會(huì)出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如果與細(xì)菌及相應(yīng)抗體復(fù)合物結(jié)合，就會(huì)出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。 ３、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng) 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng) (Complement fixation reaction)是在補(bǔ)體參與下，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作為指示系統(tǒng)的 抗原抗體反應(yīng)。而雙向擴(kuò)散多用于定性試驗(yàn)。單向擴(kuò)散是一種定量試驗(yàn)。有幾對抗原抗體，就可分別形成幾條沉淀線。 ３） 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：利用可溶性抗原抗體在半固體瓊脂內(nèi)擴(kuò)散，若抗原抗體對應(yīng)，且二者比例合適，在其擴(kuò)散的某一部分就會(huì)出現(xiàn)白色的沉淀線。將已知抗體注入特制小試管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原與抗體對應(yīng)，則在兩液界面出現(xiàn)白色的沉淀圓環(huán)。由于在單位體積內(nèi)抗原量大，為了不使抗原過剩，故應(yīng)稀釋抗原，并以抗原的稀釋度作為沉淀反應(yīng)的效價(jià)。 ２、沉淀反應(yīng) 可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時(shí)間，形成肉眼可見的 沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)（ Precipitation）。當(dāng)載體上有少量抗原與抗體結(jié)合。 ２）間接凝集反應(yīng) 將可溶性抗原（抗體）先吸附在一種與免疫無關(guān)的，顆粒狀微球表面，然后與相應(yīng)抗體（抗原）作用，在有電解質(zhì)存在的條件下，即可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應(yīng) (Indirect agglutination)。如肥達(dá)氏反應(yīng)就是診斷傷寒、付傷寒的試管凝集試驗(yàn)。多用已知抗原來檢測血清中有無相應(yīng)抗體及其含量。 。如將含有痢疾桿菌抗體的血清與待檢菌液各一滴，在玻片上混勻，數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，即陽性反應(yīng)，證明該菌是痢疾桿菌。原理是用已知抗體來檢測未知抗原。 。在該反應(yīng)中，因?yàn)閱挝惑w積抗體量大，做定量實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)稀釋抗體。 １、凝集反應(yīng) 顆粒性抗原（細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)（ Agglutination reaction）。而且，在第二階段反應(yīng)中，電解質(zhì)、 PH、溫度等環(huán)境因素的變化，都直接影 響血清學(xué)反應(yīng)的結(jié)果。第二階段為抗原體反應(yīng)的可見階段，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)等。 4)血清學(xué)反應(yīng)大體分為兩個(gè)階段進(jìn)行，但其間無嚴(yán)格界限。 2)抗原體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合，這種結(jié)合雖相當(dāng)穩(wěn)定，但是可逆的。在食品微生物檢驗(yàn)中，常用血清學(xué)反應(yīng)來鑒定分離到的細(xì)菌，以最終確認(rèn)檢測結(jié)果。把 6mm 大小的濾紙片浸入該溶液后取出，在空氣中晾桿，然后放在帶菌的半固體培養(yǎng)基上做擴(kuò)散敏感試驗(yàn)。該試驗(yàn)用于弧菌屬、氣單胞菌屬和假單胞菌屬的鑒定。在鑒定細(xì)菌時(shí)，為了確定是否屬芽孢菌，需要對那些在一般條件下不形成芽孢的細(xì)菌，采用生孢子培養(yǎng)基，來確定是否能形成芽孢。最好用特制試管架放試管，所用溫度計(jì)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)溫度計(jì)標(biāo)定過。 總之，培養(yǎng) 5d，能生長者均按生長計(jì)，否則按不生長計(jì)，凡培養(yǎng) 5d 仍屬可疑者或不生長者必須重測，在重測時(shí)，可能出現(xiàn)有時(shí)生長，有時(shí)不生長的不穩(wěn)定現(xiàn)象，這可能有兩種原因：一種是水浴溫度不穩(wěn)定，培養(yǎng)時(shí)溫度波動(dòng)大；另一種原因可能是所測定的溫度，恰好是測定菌的臨 界生長溫度，在這種情況下，可用提高一度或降低一度的辦法肯定之。 （ 2）“＋－“：表示生長差；與對照管相比，只有在某一觀察角度時(shí)方能看到明顯的混濁。在接近 0℃的低溫培養(yǎng)，則觀察時(shí)間可延長至 7－ 10d，甚至 30d。放置于恒溫水浴培養(yǎng)。 3生長溫度的測定 細(xì)菌生長的最高、最適和最低溫度，常常是某些細(xì)菌鑒定的特征之一。培養(yǎng)基 pH 必須為中性或微酸性，以 最適。陰性反應(yīng)則無透明環(huán)或肉湯呈深藍(lán)色。然后將碘試劑直接滴浸于培養(yǎng)表面，若為液體培養(yǎng)物，則加數(shù)滴碘試劑于試管中。C 培養(yǎng) 24~48h，或于 20176。 試驗(yàn)方法：以 18~24h 的純培養(yǎng)物，涂布接種于淀粉瓊脂斜面或平板（一個(gè)平板可分區(qū)接種，試驗(yàn)數(shù)種培養(yǎng)物）或直接移種于淀粉肉湯中，于 36177。 3淀粉水解試驗(yàn) 某些細(xì)菌可以產(chǎn)生分解淀粉的酶，把淀粉水解為麥芽糖或葡萄糖。平板試驗(yàn)結(jié)果的觀察為在培養(yǎng)基平板點(diǎn)種的菌落上滴加試劑，若為陽性， 10~20min后，菌落周圍應(yīng)出現(xiàn)清晰帶環(huán)。1℃。于 20~22℃培養(yǎng) 7~14 天。 3明膠（ Gelatin）液化試驗(yàn) 有些細(xì)菌具有明膠酶（亦稱類蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步水解為氨基酸，失去凝膠性質(zhì)而液化。 30℃培養(yǎng)，分別在 3 至 7 天觀察結(jié)果。 3需氧性試樣 若在培養(yǎng)基中加入還原劑，如巰基醋酸鈉和甲醛次硫酸鈉等，以除去培養(yǎng)基中的氧氣或氧化型物質(zhì)，使厭氧菌能在有氧情況下生長。適溫培養(yǎng) 1－ 3d 后觀察生長情況。 3在 營養(yǎng)肉湯上的生長 本試驗(yàn)應(yīng)用于芽孢桿菌屬中種的鑒定。 3對溶菌酶抗性的測定 在 100mL 的三角瓶中，放入 60－ 65mL 無菌的 ，在其中加入 溶菌酶，瓶上塞無菌棉花，在小火上煮沸 20 分鐘 后，冷到室溫，加無菌的。 應(yīng)該注意：氰化鉀是劇毒藥品，操作時(shí)必須小心。若在測定培養(yǎng)基和空白培養(yǎng)基上均不生長，表示空白培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不適于測定菌的生長，必須選用其它合適的培養(yǎng)基。 接種和觀察結(jié)果： 用幼齡菌種接種于加氰化鉀的測定培養(yǎng)基和未加氰化鉀的空白培養(yǎng)基中，適溫培養(yǎng) 1－ 2d，觀察生長情況。 氰化鉀試驗(yàn) 氰化鉀（ KCN）是呼吸鏈末端抑制劑。 接種和觀察結(jié)果： 取 1 環(huán)幼齡的菌液，接種于上述培養(yǎng)基中，同時(shí)接種營養(yǎng)肉湯作為對照。 接種和觀察結(jié)果： 以幼齡菌種接種于上述培養(yǎng)液中，適溫培養(yǎng) 4 周（高溫芽孢菌培養(yǎng) 2 周），取 1mL 培養(yǎng)物，和 ％的；硫 酸混合，靜置片刻，在酸性混合物中有針狀結(jié)晶出現(xiàn)為陽性，證明從馬尿酸鹽形成安息香酸。但如不含硝酸鉀的對照培養(yǎng)基也可產(chǎn)生氣泡，則只能按可疑或陰性處理。 觀察結(jié)果：培養(yǎng) 2－ 7d，觀察在含有硝酸鉀的培養(yǎng)基中有否生長和產(chǎn)生氣泡。 接種封油：以斜面菌種用接種環(huán) 接種后，用凡士林油（凡士林和液體石蠟為1： 1）封管，封油的高度約 1 厘米。 2厭氧硝酸鹽產(chǎn)氣 在厭氧情況下，有些好氧細(xì)菌，能以硝酸鹽代替分子氧作為受氫體，進(jìn)行厭氧呼吸，將硝酸鹽還原為氣態(tài)氮，即為土壤中的反硝化作用。 接種與觀察結(jié)果：融化三角瓶中的培養(yǎng)基，倒成平板，凝固后在平板上劃短線接種，適溫培養(yǎng) 10 天，在平板上倒入斐林試劑 A、 B 混合液，以覆蓋菌落為度，2 小時(shí)內(nèi)檢查，若在菌落周圍出現(xiàn)紅色的暈者為陽性反應(yīng)。 2從甘油產(chǎn)生二羥基丙酮 本試驗(yàn)主要是用于區(qū)分醋酸單胞菌屬和假單胞菌屬以及某些芽孢桿菌的鑒定。該反應(yīng)僅用于區(qū)別多粘芽孢菌，浸麻芽孢菌和環(huán)狀芽孢菌的培養(yǎng)物。取 10％的 FeCl3水溶液 4－ 5 滴，滴加在生長菌苔的斜面上，當(dāng)斜面和試劑液面處呈藍(lán)綠色時(shí)為陽性反應(yīng)，表示從苯丙氨酸形成苯丙 酮酸。本試驗(yàn)用于腸肝菌科和某些芽孢桿菌屬的鑒定。 2酪氨酸水解