【正文】 )，產(chǎn)生雙倍體雜合子核。? 頻率非常低。? 雙倍體核一旦形成， 就會很穩(wěn)定，并分裂產(chǎn)生更多的雙倍體核。 IV. 體細(xì)胞交換? 在有絲分裂中，雙倍體核中同源染色體間偶爾也會發(fā)生交聯(lián)，幾率也很低，但同樣會產(chǎn)生染色體重組? 體細(xì)胞交換即體細(xì)胞中染色體間的交換，也稱有絲分裂交換。V. 單倍體化：? 雙倍體雜合子的遺傳性狀不穩(wěn)定，進(jìn)行有絲分裂時，核內(nèi)的 染色體 偶爾發(fā)生交換和單倍體化，形成具有新性狀的 單倍體雜合子 。? 在雙倍體核的分裂過程中，偶爾發(fā)生染色體的非二等份分離，結(jié)果產(chǎn)生非整倍體 (aneuploid)子核，一個子核含有 2n+1條染色體，另一個子含有 2n1條染色體。? 非整倍體核是不穩(wěn)定的，在隨后的分裂過程中會丟失染色體直到回復(fù)到整倍體216。 含 2n+1條染色體的細(xì)胞核丟失一條染色體而變?yōu)?2n條，216。 含 2n1條染色體的核將逐漸回復(fù)為含 n條染色體的單倍體核，從而實現(xiàn)單倍體化。準(zhǔn)性雜交育種微生物準(zhǔn)性生殖 主要發(fā)生在一些不產(chǎn)生有性孢子的真核微生物的雜交過程， 進(jìn)行育種 。第四節(jié) 菌種衰退、復(fù)壯和保存? 菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的材料，特別是生產(chǎn)抗生素、氨基酸、釀造等工業(yè)，離不開菌種。? 菌種保存是進(jìn)行微生物學(xué)研究和微生物育種工作的重要組成部分。– 首要任務(wù)就是使菌種不死亡，同時還要盡可能使菌種優(yōu)良性狀保持下來，而不向不利于方面轉(zhuǎn)化。? 保存菌種不變異是不可能的事，沒有一種方法可使其絕對不變，研究菌種保存就是要采樣最合適的方法保存，使菌種的變異和死亡減少到最低程度。一 、菌種的衰退與復(fù)壯? 衰退– 由于自發(fā)突變的結(jié)果，而使某物種原有一系列生物學(xué)性狀發(fā)生質(zhì)變成量變的現(xiàn)象。– 具體表現(xiàn)：? ⑴ 原有形態(tài)性狀變得不典型，如 Bacillusthuringiensis（蘇云金稈菌）的芽孢和伴肥晶體變小或喪失。? ⑵ 生長速度變慢，產(chǎn)生孢子變少? ⑶ 代謝產(chǎn)物能力下降，即 “負(fù)變 ”? ⑷ 致病菌對寄主侵染力的下降? ⑸ 對外界不良條件包括低溫，變溫等抵抗能力的下降– 衰退是一個由量變到質(zhì)變的過程，開始是個別細(xì)胞發(fā)生自發(fā)突變，經(jīng)一代代傳遞，導(dǎo)致在種群種擴(kuò)大，發(fā)展為優(yōu)勢種群，從而使整個群體表現(xiàn)出嚴(yán)重衰退。? 復(fù)壯–狹義復(fù)壯? 是一種消極措施是指菌種在已發(fā)生衰退的情況不經(jīng)過純種分離和測定典型性狀，產(chǎn)生性能等指標(biāo)，從已衰退的的種群中篩選出少數(shù)尚未退化的個體，以達(dá)到恢復(fù)原菌株固有性狀的相應(yīng)措施。–廣義復(fù)壯? 一種積極措施，即有菌種的典型特征或生產(chǎn)性狀尚未衰退之前，就經(jīng)常有意識地采取純種分離和生產(chǎn)性狀測定工作，以期從中選擇到自發(fā)的突變體。 ㈠ 衰退的防止1. 控制傳代次數(shù)– 突變幾率： 10^(8)－ 10^(9)2. 創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件– 發(fā)現(xiàn)創(chuàng)造一個適合原種的生長條件，可在一定程度上防止衰退? 如：赤霉素生產(chǎn)菌 、天冬酰胺、 5’－核苷酸或甘露醇等豐富有機(jī)營養(yǎng)物時，有防止衰退效果。? 在 Aspergillusterricola(棲土曲霉 )培養(yǎng)時，提高培養(yǎng)溫度從 2830℃ →3334 ℃ 時，可防止產(chǎn)孢子能力的衰退。3. 利用不易衰退的細(xì)胞傳代– 在放線菌或霉菌中，菌絲含有多個細(xì)胞核，甚至有異核體，用菌絲接種就易出現(xiàn)變異或衰退，而孢子是單肥單核就不會出現(xiàn)在實踐中用棉花蘸放線菌孢子斜面接種。– 有些霉菌如用分生孢子傳代易于衰退而用子代孢子接種則可避免退化 4. 采用有效的菌種保藏方法– 不同的菌種采用不同的保存方法，可有效地降低菌種的衰退速度（二）、菌種的復(fù)壯1. 純種分離法– 純種分離法有 “菌落純 ”水平（ purecultureincolonylevel）和 “菌株純 ”水平（ purecultureinstrainlevel）– 分離法? 菌落純（菌種純）包括平板表面涂布法，平板劃線分離法，瓊脂培養(yǎng)基澆注法? 細(xì)胞純（菌株純）包括用分離小室進(jìn)到單細(xì)胞分離，用顯微鏡從皿進(jìn)到單細(xì)胞分離，用菌絲尖端切割法進(jìn)到單細(xì)胞分離2. 通過宿主體復(fù)壯3. 淘汰已衰退的個體– 若對某些微生物用分子孢子采樣特殊的低溫處理，其死亡率達(dá) 80％二、 菌種的保存1. 菌種保存的原理– 根據(jù)菌種的生理生化特點人工創(chuàng)造條件，使孢子或菌體的生長代謝活動盡量降低，以減少其變異。– 一般可通過保持培養(yǎng)基營養(yǎng)成分在最低水平，缺氧狀態(tài)，干燥和低溫，使菌種處于休眠狀態(tài)，抑制其繁殖能力。 2. 斜面冰箱保存法：– 用新鮮斜面培養(yǎng)基接種后，置最適條件下等菌體或孢子長滿后，冰箱 4℃ 保存，一般保存3－ 6個月。3. 沙土管保存法：– 沙土洗凈烘干過篩， 2： 1混勻，分裝小試管，高度 1cm， 121℃ 間歇滅菌三次，烘干備用，一般用 80－ 100目過篩土。– 用斜面孢子制成孢子懸浮液接入沙土管中或?qū)⑿泵骀咦庸蜗?，直接與沙土混合，置干燥皿中真空泵抽干，冰箱保存，一年左右。4. 菌絲速凍法– 對不產(chǎn)孢子或芽孢的微生物，不能用沙土管保存，可采用菌絲速凍法? 保存溫度 20℃ ，為避免微生物受損致死，需要甘油作保護(hù)劑，濃度 25％。– 具體操作：? ⑴ 配制 50％甘油溶液， 121℃ 滅菌備用? ⑵ 制備菌懸液：濃度 10^8－ 10^10? ⑶ 菌懸液和甘油溶液以等體積混合均勻， 20℃ 保存5. 石蠟油封存法– 向培養(yǎng)成熟的菌種斜面上倒一層滅過菌的石蠟油，用量及斜面 1cm，保存于冰箱中。– 此法適用于不能利用石蠟油作碳源的細(xì)菌，霉菌，酵母等微生物的保存，一年左右。 6. 真空冷凍干燥保存法– 原理? 在較低的溫度下（ 18℃ ），快速地將細(xì)胞凍結(jié)，并且保持細(xì)胞完整，然后在真空中使水分升華。? 微生物的生長代謝暫時停止，不易發(fā)生變異?？杀４婧荛L時間，一般 5年左右。–基本操作：? 將微生物制成懸液，再與保護(hù)劑混合放在特制安瓿管中，用低溫酒精或干冰，使其迅速凍結(jié)，用真空泵抽干。將安瓿管真空熔封，并低溫保存。– 可加適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑：脫脂牛奶或血清– 作用：187。 冷凍干燥的脫水過程中代替結(jié)合水而穩(wěn)定細(xì)胞成分（細(xì)胞膜）的構(gòu)型，防止細(xì)胞膜因凍結(jié)而破壞。187。 起支持作用，使微生物疏散地固定在上面。7. 液氮超低溫保存法– 原理：保存溫度 196℃ ，遠(yuǎn)低于微生物新陳代謝作用停止的溫度 130℃ 。所以菌種的代謝活動已停止，化學(xué)作用亦隨之消失。– 適用廣泛，尤其是不產(chǎn)孢的菌絲體，保存方法理想，保存期最長。– 操作方法① 菌種準(zhǔn)備及分裝l 需保護(hù)劑，常用 10％的甘油，制備好 － 1ml的裝量。② 凍結(jié)（關(guān)鍵）l 先把微生物從常溫過渡到低溫，這樣使細(xì)胞接觸低溫前，使細(xì)胞內(nèi)自由水通過膜滲出而不使其溫冷形成結(jié)晶而傷害細(xì)胞。187。 如美國 ATCC導(dǎo)用先將菌液降低到 0℃ ，然后以1℃ /min下降，一直降低到 35℃ ，然后才把裝有菌液的安甑管放入液 N罐中。③ 重新培養(yǎng)l 當(dāng)要使用或檢查所保存菌種，可將安瓿瓶從冰箱中取，室溫或 35－ 45℃ 水浴中迅速解凍，當(dāng)升到 0℃ 時即可打開安瓿瓶，將菌種移到適宜的斜面培養(yǎng)基上。? 安瓿管要求：所用的管需能承受大的溫差而不至于破裂，貼好標(biāo)簽。國內(nèi)外主要菌種保存機(jī)構(gòu) ? ATCC– AmericanTypeCultureCollection美國標(biāo)準(zhǔn)菌株收藏所，美國馬里蘭州羅克維爾市。? CSM– 冷泉港研究室，美 ColdSpringHarbarLaboratory? AM– 日本東京大學(xué)應(yīng)用微生物研究所，日本東京， InstituteofAppliedMicrobiology? IFO– InstituteforFermentation玻醇研究所 日本大阪? KCC– 科研化學(xué)有限公司 日本東京 KakenChemicalCompany? NCTC– NationalCollectionoftapeCulture國際標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所，英國倫敦 ? NIH– NationalInstituteofHealth國際衛(wèi)生研究所 美國馬里蘭州貝塞斯達(dá)? NRRL– NorthernVtilizationResearchandDevelopmentDivision美國農(nóng)業(yè)部，北方開發(fā)利用研究部，美國皮奧里亞市 我國有中科院負(fù)責(zé)擔(dān)負(fù)全國菌種保存業(yè)務(wù)， 6個保存中心? CCGMC– 普通微生物菌種保藏管理中心，微生物所：真菌，細(xì)菌。武漢病毒所：病毒? ACCC– 農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，中國農(nóng)科院土壤肥料研究所? CICC– 工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，輕工業(yè)食品發(fā)酵工業(yè)科學(xué)研究所? CMCC– 醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心，中國醫(yī)療科學(xué)院皮膚病研究所：真菌– 衛(wèi)生部藥品生物制品檢查所：細(xì)菌（南方）– 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所：病毒? CACC– 抗生素菌種保存管理中心，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗生素研究所– 四川抗生素工業(yè)研究所，成都， 抗生素菌種– 華北藥廠抗生素研究所，石家莊，生產(chǎn)用抗生素菌種? CVCC– 獸醫(yī)微生物菌種保藏中心，農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAIT