【正文】 R。真核微生物的基因與原核微生物的最明顯差異：無操縱子，有大量不編碼序列和重復序列，轉錄和轉譯被分隔，基因被內含子阻隔。有三種構型：? CCC型：共價閉合環(huán)狀的超螺旋 dsDNA。質粒的類型因子、致育因子、性因子是 、具有轉移能力的質粒。? F+菌株：攜帶 F質粒的菌株稱 F+菌株（雄性）。組成：轉移起點可轉移因子轉移區(qū)（ tra區(qū)）2） ：抗性因子、 ? 抗性決定因子： r決定因子，主要含各種抗性基因如 Tetr、 等基因，有些 R質粒使宿主細胞產生抗金屬離子抗性。與細菌素的產生有關的質粒? 大腸桿菌素 由 ? Col質粒有兩類：1) 分子量?。?9kb， 5如 Col2) 分子量大（ 94kb， 107），具通過接合而轉移的功能，嚴緊型控制， 12拷貝。Ib。ColE1carriesfollowingceacolicinimmprotein? ： lysisinc： RNAdeterminant? II： forrop： thatprimingcopymob： forduringcer： plasmidmonomers? exclusionTi癌細胞。質粒，環(huán)狀， 200kb，主要分四部分 ：216。 接合轉移區(qū)（ con）216。 TDNA區(qū)毒性區(qū)（ Vir）接合轉移區(qū)（ con）復制啟始區(qū)TDNA區(qū)5) Ri質粒6) 質粒相似，有 Ri質粒轉化的根部不形成根瘤，僅生出可再生新植株的毛狀根。質粒作為外源基因的載體。）。? 質粒 DNA上含有能降解某些復雜有機物的酶的編碼基因，細菌攜帶該類質?？蓪碗s化合物降解簡單形式或能源。plasmid）? 隱秘質粒：不賦予寄主任何表型效應的質粒。第二節(jié) 微生物的基因突變基因突變 突變? 廣義突變：細胞內或病毒顆粒內遺傳物質的分子結構或數量突然發(fā)生可遺傳的變化。? 狹義突變：基因突變（點突變 ）? 野生型 (wild： 從自然界中分離到的微生物菌株，稱野生型菌株，簡稱野生型。一、基因突變? 選擇性突變株與非選擇性突變株 ：mutant）如抗鏈霉素菌株表示為 strR，對應的敏感型菌株表示為 strs。lethalmutant）2) 抗原突變型（ antigenic1) 產量突變型（ metabolitemutant）通過基因突變獲得在有用代謝產物產量高于原始菌株的突變株的變異類型。（三）、突變率? 每一細胞在每一世代中發(fā)生某一性狀的突變幾率，稱突變率。（四）、微生物基因突變的特點1) 自發(fā)性：沒有人為誘變因素可自發(fā)產生2) 稀有性：突變率比較低，范圍 106~1093) 獨立性：某基因突變率不受別的基因影響 。4) 可誘變性：誘變劑可提高突變率5) 穩(wěn)定性：突變后新性狀是穩(wěn)定的、可遺傳的。7) 可逆性：野生型 突變型正向突變回復突變8) 不對應性：突變的性狀與引起突變的原因（環(huán)境）之間無直接的關系。 抗生素、紫外線或高溫誘變產生相對應的突變性狀（非自發(fā)性）。 抗生素、紫外線或高溫淘汰原有非突變個體（自發(fā)性） 微生物突變的自發(fā)性和不對應性證明取敏感于噬菌體的 期的肉湯培養(yǎng)物，用新鮮培養(yǎng)稀釋成濃度為 103/mL的細菌懸液，然后在甲、乙兩試管各裝 10mL。 微生物突變的自發(fā)性和不對應性證明把各小管的菌液分別倒在 50個預先涂滿噬菌體 T1的平板上，經培養(yǎng)后分別計算各皿上所產生的抗噬菌體的菌落數。 微生物突變的自發(fā)性和不對應性證明結果：在來自甲管的 50皿中，各皿出現的抗性菌落數相差極大，而來自乙管的則各皿上抗性菌落數基本相同 。 微生物突變的自發(fā)性和不對應性證明（五）、基因突變的分子基礎（ induced誘變劑：凡具有誘變效應的任何因素。嘌呤之間置換或嘧啶之間的置換。誘發(fā)突變包括：? 引起置換的誘變劑：216。如亞硝酸、羥胺、環(huán)氧乙酸等216。如堿基類似物 8氮鳥嘌呤、 5氨基尿嘧啶等2) 移碼突變誘變劑使 DNA序列中的一個或少數幾個堿基發(fā)生增添（插入）或缺失，從而使后面的全部遺傳密碼的閱讀框架發(fā)生改變，引起轉錄和轉譯錯誤的突變。ATCAACATGAAC插入： CGAGTATGATTAGCAGTATGATTAaberration）誘變劑：216。216。 由背景輻射和環(huán)境因素引起，如天然的宇宙射線等。 由微生物自身有害代謝產物引起，例如過氧化氫等。 由 DNA復制過程中堿基配對錯誤引起。（六）、 DNA損傷的修復紫外線對 DNA的損傷DNA損傷類型很多，微生物對其修復的方法也各不相同 。光復活作用：修復機理 在黑暗下， 嘧啶二聚體和 光解酶 (光裂合酶 )結合，形成 DNA— 酶復合物，在 300— 500 ? 含兩個輔助因子? FADH，? 8羥基脫氮核黃素或次甲基四氫葉酸 repair)暗修復（ dark方式。 外切核酸酶從 5’P至 3’OH方向切除二聚體，并擴大缺口；? ③ DNA聚合酶以 DNA的另一條鏈為模板，從原有鏈上的3’OH端起逐個延長，重新合成一條缺失的 DNA鏈；? ④ 通過連接酶的作用，把新合成的寡核苷酸的 339。P末端相連接，從而完成了修復作用。1. 選育微生物在自然以 106的突變率發(fā)生自發(fā)突 變。 如：卡介苗的培育（二） 、 誘變育種 誘變育種的基本環(huán)節(jié) （ 1） 選擇簡便有效的誘變劑 ? 生物誘變劑 :溶原性噬菌體 （ 2）、 挑選優(yōu)良的出發(fā)菌株 ? 容易分散，每個細胞可均勻接觸誘變劑 產生菌落不純的原因：? 某些微生物細胞是多核的 （ 4）、 選用最適的誘變劑量 ? 低劑量易發(fā)生正變，高劑量易出現負變? 多次誘變提高了產量的菌株更容易出現負變。 （ 5）、充分利用誘變劑復合處理的協同效應復合處理方法216。兩種或多種誘變劑的先后或同時使用（ 6）、 利用和創(chuàng)造與產量相關的指標 （ 8）、 創(chuàng)造新型篩選方法 216。216。（ 3）、營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選 不同微生物的基本培養(yǎng)基是很不相同的。補充培養(yǎng)基 (SM)： 凡只能滿足相應的營養(yǎng)缺陷型突變株生長需要的組合或半組合培養(yǎng)基稱補充培養(yǎng)基。type)如 leu+? 營養(yǎng)缺陷型（ auxotroph）： 野生型菌株經誘變劑處理后，由于發(fā)生了喪失某酶合成能力的突變，因而只能在加有該酶合成產物的培養(yǎng)基中才能生長的突變菌株。如 leu+2) 營養(yǎng)缺陷型的篩選的程序與方法A. 誘變劑處理 B. 淘汰野生型：抗生素法或菌絲過濾法 216。216。其原理是在基本培養(yǎng)基中，野生型菌株的孢子能萌發(fā)成菌絲，而營養(yǎng)缺陷型的孢子則不能。C. 檢出缺陷型通常采用影印平板法D. 用生長譜法鑒定營養(yǎng)缺陷型生長譜法： 是指在混有供試菌的平板表面點加微量營養(yǎng)物，觀察營養(yǎng)物的周圍有否長菌來確定該供試菌的營養(yǎng)要求的方法。 生長譜法鑒定缺陷型 誘變育種的整個過程主要是 誘變和篩選的不斷重復 ，直到獲得比較理想的高產菌株。第三節(jié) 基因重組和雜交育種一、原核生物的基因轉移與重組原核生物的基因重組的特點為：216。單向性，即從供體菌向受體菌 (或從供體基因組向受體基因組 )作單方向轉移；216。一 、轉化 (transformation)? 轉化子 ：通過轉化方式而形成的雜種后代，稱轉化子 2．轉化微生物的種類? 原核微生物252。Streptococcus pneumoniae252。Haemophilus252。Bacillus252。Rhizobium252。黃單胞菌屬 Xanthomonas? 真核微生物v釀酒酵母 Neurosporacrassav黑曲霉 感受態(tài) 是指受體細胞最易接受外源 DNA片段并能實現轉化的一種生理狀態(tài)。o 如 枯草芽孢桿菌感受態(tài)維持幾小時 流感嗜血桿菌僅維持數分鐘。感受態(tài)因子 細菌生長到一定時期，分泌出特異性蛋白來調節(jié)細胞處于感受態(tài)的蛋白稱感受態(tài)因子 轉化因子 dsDNA216。質粒 DNA在不同的微生物中，轉化因子的形式不同：216。G＋ 細菌 (Streptococcus)： ssDNA6. 轉化過程 ① 供體菌 strR dsDNA與感受態(tài)受體菌 strS細胞表面的膜連 DNA結合蛋白相結合，其中一條進入細胞；③ 雜合 DNA區(qū)隨受體菌染色體組進行復制；細胞分裂