【正文】 性別的所有動物 如果對照組的幸存動物數(shù)下降至 20或更少時，處死所有劑量組中受影響 的性別的所有動物 在 100周以后，如果高劑量組的幸存動物降至 15時，處死所有劑量組中受 影響的性別的所有動物 早期處死一個劑量組不會實驗無效 劑量組的提前終止 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗 早期處死與早期死亡 所有組織采集 早期處死動物比發(fā)現(xiàn)死亡動物更有價值 大鼠品系的選擇會影響動物的壽命和到計劃處死時存活的比例 Wistar大鼠存活率比 SD大鼠高 腫塊跟蹤 跟蹤活體階段的每一個腫塊 與解剖結(jié)果的關(guān)聯(lián) 通過顯微評價來跟蹤解剖時發(fā)現(xiàn)的腫塊（ Peto試驗要求） 解剖 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗 檢查方案中各組所有動物的所有組織和腫塊 跟蹤解剖中發(fā)現(xiàn)的所有腫塊的顯微診斷 盡可能將大體觀察與顯微觀察結(jié)果關(guān)聯(lián)起來；但是 “大體觀察與顯微觀察沒有關(guān)聯(lián)” 也是可接受的，不是每個大體觀察都有相關(guān)聯(lián)的顯微觀察，重要的是你所觀察到的。 如果可行的話，確認腫瘤的原發(fā)部位 將腫瘤歸類為“致命”與“非致命”： 有沒有可能是腫瘤促成的動物提前死亡或死亡 要求專業(yè)判斷 要求做 Peto試驗 計劃處死的動物不需要 記錄計劃處死前解剖的動物死亡或瀕死的原因 顯微評價 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗 致癌性實驗是評價化合物在動物體內(nèi)潛在致癌性的特定的非臨床安全性評價，旨在增進人類的潛在致癌風險評價 致癌性試驗開展時間取決于藥物的類型和關(guān)注程度 通常在臨床試驗第二，三階段進行，很少在第 IV階段（上市后）進行 通常 104周的生物評價采用大鼠或小鼠進行 使用轉(zhuǎn)基因動物或敏感的體外試驗來推進致癌性試驗 一些藥物可能不需要進行致癌性試驗 細胞毒性抗癌藥物一般不需要進行致癌性試驗 生物技術(shù)藥物也可除外（ ICH S6） 專題負責人、毒理人員和統(tǒng)計人員作為一個團隊，共同設(shè)計、執(zhí)行和評估 選擇種屬應(yīng)考慮藥代、毒代情況 實驗中每組必須有足夠的動物，試驗設(shè)計或執(zhí)行使偏離最小化 劑量選擇是關(guān)鍵，必須顯示暴露范圍，從推薦人用劑量到 MTD或最大可行劑量 活體階段，死亡、解剖和顯微數(shù)據(jù)必須銜接 對數(shù)據(jù)全面評價的統(tǒng)計方法必須適當 總結(jié) 替代致癌性試驗 ICH S1B 潛在致癌性研究的指南 ? 1997年： 1個兩年性致癌試驗 +1個替代模型的體內(nèi)試驗 ? Trp 53+/ （應(yīng)用于遺傳毒性的藥物） ? rasH2（應(yīng)用于遺傳毒性和非遺傳毒性的藥物） ? （局部采用，許多陽性結(jié)果，遺傳不穩(wěn)定） ? XPA/和 XPA/x p53+/ ? 新生鼠 ? 開始啟動（ Ito 模型） p53+/ 轉(zhuǎn)基因小鼠 替代致癌性試驗 應(yīng)用替代模型的原因 ? 減少動物使用并降低費用 ? 兩年致癌試驗的問題被廣泛認知 — 肝細胞腫瘤；許多發(fā)現(xiàn)與人不相關(guān) ? 提供有助于風險評估的其他信息 ? 如有時間要求，可以縮短至 9個月 ? 可以延長試驗直至 III期結(jié)果顯示成功 ? 陽性結(jié)果的幾率降低 rasH2 轉(zhuǎn)基因小鼠 替代致癌性試驗 Trp53+/和 rasH2模型的基礎(chǔ) ? Trp53+/半合子敲除小鼠 —每個細胞僅攜帶一個拷貝的小鼠 Trp53腫瘤 抑制基因。剩下的一個有功能的等位基因的突變會誘導(dǎo)腫瘤的快速發(fā) 生。因而， FDA認為該模型僅適宜評價遺傳毒性的化合物。 ? 歐洲認可 Trp53+/模型來評價非遺傳毒性物質(zhì) ? rasH2轉(zhuǎn)基因小鼠 攜帶一些帶有啟動子的人類正常 ras基因插入拷貝。 這個模型適用于遺傳毒性和非遺傳毒性化合物 rasH2 轉(zhuǎn)基因小鼠 Trp 53+/ 小鼠 替代致癌性試驗 關(guān)于 Trp53+/和 rasH2的實驗設(shè)計 ? 25只 /性別，溶劑對照、低、中和高劑量組 ? 剛接收的小鼠小而脆弱 ? 處理 6個月 —通常同臨床給藥方式 ? 灌胃、添加至飼料中，或注射 ? 不認可局部給藥 ? 3個月后追蹤明顯的腫塊 ? 實驗中用野生型同窩出生動物做一次毒代動力學(xué) 替代致癌性試驗 野生型小鼠也應(yīng)檢查嗎？ ? 建議對野生型同窩出生小鼠進行處理并進行顯微檢查，但不強制要求 能確認模型的敏感型，但該模型已被廣泛認可 如果野生型小鼠發(fā)生了更多與處理相關(guān)的腫瘤，那么該模型及研究 的可靠性都有問題 對委托方幫助不大 替代致癌性試驗 陽性對照 ? 目前每個實驗中都需要一個陽性對照以確認模型的易感性 ? 通常使用明顯誘變致癌物 對于 rasH2來說一般是 MNU或 尿烷 對 Trp53來說一般是 p甲酚啶 或 MNU或 尿烷 MNU組或尿烷組一般 1015只 /性別 僅檢查靶器官（ FDA） MNU：胸腺淋巴瘤（ 8090%），前胃乳頭瘤和癌 尿烷：支氣管腫瘤，血管肉瘤 p甲酚啶：膀胱上皮腫瘤 替代致癌性試驗 劑量選擇 ? 最大耐受劑量 死亡率升高 相對于對照組，體重增加值減少 ≥10% 顯著的靶器官毒性 降低預(yù)期壽命的臨床病理學(xué)發(fā)現(xiàn) ? 最大可行劑量 ? 最大暴露 ? 限定劑量（ 1500 mg/kg）？ ? 非無毒的人體暴露量的倍數(shù) 替代致癌性試驗 FDA審查 ? 在劑量范圍確定之前，通知審查部門打算使用致癌性替代模型 ? FDA致癌性咨詢委員會將劑量選擇及研究設(shè)計，基于以下幾點： 用該該模型的理由 確定劑量范圍研究的 TK數(shù)據(jù) 遺傳毒性信息 小鼠和人體代謝數(shù)據(jù) 藥物及代謝物在人體的暴露數(shù)據(jù) 為“可靠”的兩年大鼠試驗所作的實驗設(shè)計 ? 替代動物模型幾乎總被接受（除了 PPAR拮抗劑） 替代致癌性試驗 病理終點 ? 通常不評價臨床病理學(xué) ? 無需器官稱重 ? 全組織采樣 ? 除了陽性對照組出現(xiàn)的靶器官外，所有處理組中的所有組織都進行顯 微檢查（有些檢查對照組，高劑量組及靶器官） ? 病理同行評審 —具有代表性的處理動物的所有靶器官的腫瘤 ? 對腫瘤統(tǒng)計分析 替代致癌性試驗 提交給 FDA的替代模型試驗 模型 已接收的試驗 陽性結(jié)果的試驗 Trp 53+/ 31 2 XPA/ p53 +/ 1 不充分的 0 Tg. AC 16 1 不充分的 5 Neonatal 1 遺傳毒性 0 rasH2 13 2 Note: 摘自 Abigail Jacobs的報告 , FDA, CDER, 2023 替代致癌性試驗 轉(zhuǎn)基因小鼠的優(yōu)勢 模型 傳統(tǒng)的 轉(zhuǎn)基因的 研究期限 2年 6個月 從開始到提交最終報告 4年 動物數(shù) 400 230 花費 $3M $1M 2023/1/16 104 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAIT