【正文】 法；特定人群如腫瘤病人較短的生存期； 視適應(yīng)癥不同等情況而定） 藥物致癌性評價(jià)的概要 以下情況不需要致癌試驗(yàn) 明確的基因型致癌物 假定此類藥物具有跨種屬致癌性 經(jīng)眼睛用藥和皮膚用藥 藥物無明顯的結(jié)構(gòu)警示和全身暴露 藥物經(jīng)過鹽、酸或某些治療性基因改變 改變之前的試驗(yàn)數(shù)據(jù)已存在 改變后的 PK、 PD和毒性沒有明顯改變 用于治療危及生命的疾病或患者存活期較短（ ＜ 23年） 生物制劑（蛋白療法）通常不要求致癌試驗(yàn) — case by case（ ICH S6） ICH S1A 和 SFDA指導(dǎo)原則 遺傳毒性和致癌性的相關(guān)性 1. 基因型與非基因型致癌物的致癌性 2. Ames陽性的致突變劑中， 80%具有致癌性 3. 由 2年動物致癌試驗(yàn)證實(shí)呈陽性的致癌物中， 50%具有遺傳毒性 Correlation is not perfect! 2. 藥物體外遺傳毒性試驗(yàn)的陽性率偏高 (Snyder et al. –Mutat Res. 2023, 488: 15169) 25%上市藥物具有遺傳毒性結(jié)果 在體外染色體損傷試驗(yàn)中證實(shí)陽性的藥物，在致癌試驗(yàn)中大部分呈陰性 在體外染色體損傷試驗(yàn)中，高于治療濃度的藥物呈陽性，通常與細(xì)胞毒性有關(guān) 3. 藥物的遺傳毒性和致癌性不完全相符的其他原因 體內(nèi)組織修復(fù)功能 適應(yīng)性反應(yīng) 遺傳多態(tài)性 器官及系統(tǒng)之間相互作用等因素 遺傳毒性和致癌性的相關(guān)性 藥物遺傳毒性評價(jià)的指導(dǎo)原則 1 遺傳毒性試驗(yàn)方法的研究 2 藥物致癌性評價(jià)的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌性試驗(yàn)的研究 4 4 主要內(nèi)容 致癌性試驗(yàn)研究 先導(dǎo)物研發(fā) 靶點(diǎn)篩選 候選物篩選 I 期臨床 III期臨床 II期臨床 IV期臨床 傳統(tǒng)兩年嚙齒類動物致癌試驗(yàn) 起始于上世紀(jì) 60年代，首先用于檢測工業(yè)化學(xué)物質(zhì)的致癌性 現(xiàn)用于檢測大多數(shù)慢性藥物的致癌性 非傳統(tǒng)嚙齒類動物致癌試驗(yàn) – 轉(zhuǎn)基因動物 1997年開始用于檢測新藥的致癌性（ ICH S1B） 目前尚未用于首要和工業(yè)化合物的致癌性檢測 GLP致癌性研究 ? 大鼠 ? 小鼠 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗(yàn) 嚙齒類每個(gè)品系都有其病變背景并容易自發(fā)腫瘤，因此背景數(shù)據(jù)和經(jīng)驗(yàn)非常重要。 三色 FCM自動化 MN檢測系統(tǒng)符合IWGT的標(biāo)準(zhǔn) FCM體內(nèi)微核自動化檢測 基本滿足分子生物學(xué)和組合化學(xué)的大量候選化合物的毒性篩選 快速、高通量 靈敏、客觀 機(jī)制研究 無種屬選擇性 三色 FCM vs 顯微鏡檢 ? 既可以檢出染色體斷裂劑，也可以檢出非整倍體誘導(dǎo)劑； ? 研究量效關(guān)系和毒性閾值。 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 試驗(yàn)結(jié)果的判定 ? 各處理組的 MF值呈 濃度依賴性升高 ，判定為陽性； ? MF值 ≥陰性對照值 +126， 判定為陽性。 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 一般認(rèn)為大、小集落突變體是由于基因損傷的范圍和程度不同所致。 ? 微孔平板（ microwell method） （即 96孔培養(yǎng)板）法在歐洲使用較多。 但 TFT的作用比 BUdR更迅速 ， TFT在一個(gè)細(xì)胞世代即可阻滯 tk+/ 細(xì)胞 ， 因此 TFT選擇平板背景清晰；而 BUdR則需要經(jīng)歷數(shù)個(gè)細(xì)胞世代才能完全阻滯 tk+/ 細(xì)胞 ，故可產(chǎn)生分散的微小集落 （ microcolony） ， 形成特征性的背景陰影 （background haze） 。 3 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 遺傳毒性傳統(tǒng)試驗(yàn)方法 Thymidine Kinase (TK): 233 amino acids Coded by the autosomal tk gene tk gene: Situated at the distal end of the qarm of chromosome 11 (mouse) or chromosome 17 (human) Size of tk gene: 11 kb with 5 introns tk locus mutation: tk+ tk allele caused by T G transversion at position 489 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 基本原理 Target cell： Mouse lymphoma L5178Y tk +/ cell line ( . Mutat Res, 1977 ) L5178Y3 cell line （ tk +/+ ） EMS treatment cell line （ tk +/ ） cell line （ tk / ） Spontaneous reverse mutation (selected by THMG medium) MLA 基本原理 TK +/ cells (TFT sensitive THMG resistant) TK / cells (TFT resistant THMG sensitive) Mutagen treatment TK +/ cells (L5178Y, TK6, WTK1) treated by chemicals, and then selected by TFT (trifluorothymidine) The growing colony — TFT resistant ( TK / ) mutant MLA 基本原理 培養(yǎng)基 不含馬血清的 RPMI1640培養(yǎng)基 含 10%馬血清的 RPMI1640培養(yǎng)基 含 20%馬血清的 RPMI1640培養(yǎng)基 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 受試物處理時(shí)間 TK基因突變試驗(yàn)中，要使用短時(shí)處理 (3～ 4小時(shí) )方式。 Ames試驗(yàn) 代謝活化系統(tǒng) ?大鼠肝 S9混合液 ?S9制備方法：取 5只雄性大鼠，處死大鼠的前 5天單次腹腔注射給予 500 mg/kg的 Aroclor 1254。藥物遺傳毒性和致癌性研究現(xiàn)狀和動向 2023/1/16 1 常 艷 國家上海新藥安全評價(jià)研究中心 藥物遺傳毒性評價(jià)的指導(dǎo)原則 1 遺傳毒性試驗(yàn)方法的研究 2 藥物致癌性評價(jià)的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌試驗(yàn)的研究 4 4 主要內(nèi)容 遺傳毒性評價(jià)的指導(dǎo)原則 SFDA 中國國家食品藥品監(jiān)督管理局 ICH 人用藥物注冊技術(shù)規(guī)定國際協(xié)調(diào)組織 OECD 經(jīng)濟(jì)合作發(fā)展組織 EMEA 歐洲藥品評價(jià)局 US FDA 美國藥監(jiān)局 US EPA 美國環(huán)境保護(hù)署 MHLW 日本厚生勞動省 其他世界性的政府法規(guī)部門 藥物研發(fā)監(jiān)管的主要藥政實(shí)體 OECD、 EPA可供參考的遺傳毒性指導(dǎo)原則 遺傳毒性試驗(yàn)的指導(dǎo)原則 SFDA 體外： 2項(xiàng)試