【正文】 （1）分離與鑒定：采用乳鼠腦內(nèi)接種和金黃地鼠腎原代細(xì)胞及蚊傳代細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)，用交叉中和試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等進(jìn)行鑒定，也可用IFA對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行鑒定。但臨床標(biāo)本的分離率極低。（2）血清學(xué)診斷：2ME敏感的血凝抑制試驗(yàn)和IgM抗體捕獲ELISA實(shí)驗(yàn)可用于乙腦的早期診斷；補(bǔ)體結(jié)合抗體恢復(fù)期效價(jià)上升≥4倍時(shí)為陽(yáng)性；中和試驗(yàn)僅用于流行病學(xué)調(diào)查。（3）IFN快速診斷：白細(xì)胞中乙腦病毒抗原主要存在于病程早期，可用于早期診斷。二、森林腦炎病毒傳播媒介為森林硬蜱，屬自然疫源性疾??；小鼠和雞胚對(duì)其敏感；微生物學(xué)檢查方法與乙腦病毒相似。三、登革病毒傳播媒介為伊蚊，在人蚊之間傳播，輕型病人表現(xiàn)為普通登革熱，再次感染的重型病人表現(xiàn)為登革出血熱。病毒分離的方法有巨蚊胸內(nèi)接種、C6/36細(xì)胞分離和乳鼠腦內(nèi)接種。血清學(xué)診斷方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)和IgM抗體ELISA捕獲法，后者有利于早期診斷。四、漢坦病毒1．主要生物學(xué)特性為布尼亞病毒科漢坦病毒屬，單負(fù)股RNA包膜病毒，呈多形態(tài)性，包膜上有血凝素；可在A54VeroE6及地鼠腎細(xì)胞中生長(zhǎng)；黑線姬鼠、小鼠、乳鼠對(duì)其敏感，鼠肺和腎中可檢出大量病毒；國(guó)際上確認(rèn)的血清型有漢坦病毒（HTN）、漢城病毒（SEO）、普馬拉病毒（PUV）、希望山病毒（PH）。2．臨床意義可引起腎綜合征出血熱（流行性出血熱），往往與鼠類的分布和活動(dòng)有關(guān)，也可經(jīng)螨傳播。3．微生物學(xué)檢查用A549和VeroE6進(jìn)行分離病毒，用間接免疫熒光法檢測(cè)特異性IgG和IgM抗體，用RTPCR技術(shù)進(jìn)行快速診斷。五、新疆出血熱病毒為布尼亞病毒科羅病毒屬，病毒結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)特性與漢坦病毒相似?？梢鹦陆鲅獰幔珶o(wú)腎綜合征。微生物學(xué)診斷主要是病毒分離和用ELISA、IFA檢測(cè)抗體，中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)及血凝抑制試驗(yàn)常用于流行病學(xué)調(diào)查。第八節(jié) 皰疹病毒[授課學(xué)時(shí)] 1學(xué)時(shí) [學(xué)習(xí)重點(diǎn)] 各種皰疹病毒的生物學(xué)特性及其微生物學(xué)檢查方法。 [基本要求]皰疹病毒科是一大群中等大小、有包膜的DNA病毒，核衣殼為二十面體立體對(duì)稱。一、單純皰疹病毒（HSV）1．能在多種細(xì)胞中增殖，有原代細(xì)胞（兔腎、貂肺、人胚肺或腎）、二倍體細(xì)胞和傳代細(xì)胞（HepBHK21等），形成典型CPE。HSV有兩種血清型，核酸同源性達(dá)40% 。2．HSV1主要感染腰以上部位，原發(fā)性感染多見于嬰幼兒，多為隱性感染，感染后常導(dǎo)致病毒潛伏，潛伏病毒可被激活增殖，可導(dǎo)致復(fù)發(fā)性局部皰疹，往往發(fā)生于同一部位。HSV2主要感染腰以下部位，99%復(fù)發(fā)性生殖器皰疹由HSV2引起，與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。3．微生物學(xué)檢查（1）用免疫電鏡、免疫熒光法或酶免疫法直接檢查皰疹液、皮膚粘膜病灶刮取物、活檢組織中的病毒或特異性抗原。（2）病毒培養(yǎng)是最敏感的方法，可用McAb或核酸雜交進(jìn)行鑒定、分型。（3）血清學(xué)診斷不能用于HSV復(fù)發(fā)性診斷，雙份血清抗體的測(cè)定有助于原發(fā)性HSV感染的診斷，HSV1和HSV2間存在廣泛的交叉反應(yīng)。二、巨細(xì)胞病毒（CMV）1．CMV種屬特異性高，人CMV僅在人成纖維細(xì)胞中生長(zhǎng)，形成巨大細(xì)胞，形似貓頭鷹眼特征。2．感染廣泛，常呈隱性感染，也可導(dǎo)致持續(xù)性感染或潛伏感染，包括先天性感染、產(chǎn)時(shí)感染和產(chǎn)后感染。3．微生物學(xué)檢查（1）采用組織病理學(xué)、脫落細(xì)胞學(xué)、免疫熒光技術(shù)、電鏡觀察、核酸雜交和PCR等直接檢查病毒或特異性抗原。（2）分離培養(yǎng)采用人成纖維細(xì)胞，初次分離時(shí)常需1個(gè)月才出現(xiàn)CPE，可用免疫熒光法進(jìn)行鑒定。（3）血清學(xué)診斷方法有EIA、IFA、被動(dòng)膠乳凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝試驗(yàn)和中和試驗(yàn)等，并注意學(xué)習(xí)結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)。三、水痘帶狀皰疹病毒（VZV）1．具有皰疹病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，只有一個(gè)血清型，能在人二倍體腎和肺細(xì)胞中增殖，受染細(xì)胞出現(xiàn)核內(nèi)嗜酸性包涵體和多核巨細(xì)胞。2．初次感染多見于兒童，表現(xiàn)為水痘，VZV常潛伏于脊髓后根神經(jīng)節(jié)或顱神經(jīng)感覺神經(jīng)節(jié)中。帶狀皰疹僅發(fā)生于曾有水痘病史或隱性感染VZV的人，多見于成人和老人。3．微生物學(xué)檢查（1）刮取新鮮病灶基底部細(xì)胞用免疫熒光法、酶免疫法、免疫電鏡、免疫電泳和核酸雜交等直接檢查病毒或抗原。（2）用人胚腎或人胚肺細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)，接種物為病灶早期內(nèi)容物，用McAb進(jìn)行鑒定。（3）EIA為主要的血清學(xué)診斷方法。四、EB病毒1．EB病毒具有皰疹病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征；只能在人及部分靈長(zhǎng)類的B細(xì)胞內(nèi)或含EB病毒基因組的類淋巴母細(xì)胞中增殖；分為A、B兩個(gè)血清型；病毒表達(dá)抗原包括潛伏期表達(dá)抗原和增殖性感染相關(guān)抗原。2．EB病毒感染機(jī)體后可表現(xiàn)為潛伏感染、B細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的非增殖性感染及病毒增殖性感染。與EB病毒感染有關(guān)的疾病主要有傳染性單核細(xì)胞增多癥、非洲兒童惡性淋巴瘤和鼻咽癌。3．微生物學(xué)檢查（1）采用ACIF法和核酸雜交直接檢查淋巴結(jié)、脾或腫瘤組織中的病毒核酸或抗原。（2）病毒分離可用不含病毒的胎兒B細(xì)胞分離培養(yǎng)，并用ACIF進(jìn)行鑒定。（3）血清學(xué)方法是目前診斷EB病毒原發(fā)感染最常用的方法。方法主要有異嗜性抗體的檢測(cè)和特異性抗體檢測(cè)。第九節(jié) 其他病毒[授課學(xué)時(shí)] 1學(xué)時(shí) [學(xué)習(xí)重點(diǎn)] 有關(guān)病毒的生物學(xué)特性及其微生物學(xué)檢查方法。[基本概念]1．內(nèi)基小體：狂犬病毒在易感動(dòng)物或人的中樞神經(jīng)細(xì)胞（主要是大腦海馬回的錐體細(xì)胞）中增殖，形成胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體，稱內(nèi)基小體。2．狂犬?。河址Q恐水病，狂犬病毒感染人，人發(fā)病時(shí)神經(jīng)興奮性增高，吞咽或喝水時(shí)喉頭肌痙攣，甚至聞水聲或其它輕微刺激包括光線均可引起全身痙攣發(fā)作，病死率幾達(dá)100%。[基本要點(diǎn)]一、人類免役缺陷病毒（HIV）1．主要生物學(xué)特性HIV為逆轉(zhuǎn)錄病毒，有獨(dú)特的三層結(jié)構(gòu)，核酸為兩條相同的單正股RNA，其復(fù)制與一般逆轉(zhuǎn)錄病毒相似，整合在細(xì)胞染色體中的前病毒可以非活化方式長(zhǎng)期潛伏于宿主細(xì)胞內(nèi)；該病毒只感染表面有CD4受體的細(xì)胞；HIV有兩型，HIVHIV2。2．HIV選擇性地侵犯表達(dá)CD4的細(xì)胞，從而引起CD4細(xì)胞缺損，細(xì)胞免役功能受損，引起多種疾病狀態(tài)。主要有3個(gè)傳播途徑。3．微生物學(xué)檢查（1）血清學(xué)方法有ELISA、WB、凝集篩選實(shí)驗(yàn)、放射免役沉淀實(shí)驗(yàn)和IFA等。通常是先經(jīng)過2~3次ELISA初篩，再用WB或IFA確證。（2）病毒分離采用非感染的PBMC進(jìn)行培養(yǎng)，2周后可檢出上清夜中的逆轉(zhuǎn)錄酶活性或p24抗原。（3）PCR是目前檢測(cè)HIV最敏感的方法，有助于HIV感染的早期診斷。二、人類嗜T細(xì)胞病毒I型、II型（HTLVI、HTLVII）1．為逆轉(zhuǎn)錄病毒，含兩條相同的單正股RNA，包膜表面有刺突及特異性糖蛋白，能與細(xì)胞表面的CD4受體結(jié)合。2．可引起多種血液病，HTLVI與成人T細(xì)胞白血病淋巴瘤、熱帶下肢痙攣性癱瘓及HTLVI相關(guān)的脊髓病等有關(guān)，HTLVII與毛細(xì)胞白血病及慢性T4細(xì)胞淋巴瘤等有關(guān)。3．病毒分離和抗體檢測(cè)方法與HIV感染檢測(cè)方法相似。三、輪狀病毒（RV）1．RV屬呼腸病毒科，為雙層衣殼，呈車輪狀外觀，核酸為雙股RNA，11個(gè)基因片段，根據(jù)VP6核心結(jié)構(gòu)蛋白的特異性將起分為A、B、C、D、E五個(gè)組。HRV屬于A、B、C組，根據(jù)VP7外殼糖蛋白的特異性可將A組分為若干個(gè)血清型，根據(jù)VP4外殼蛋白的特異性可將A組分為4個(gè)血清型。2．HRV是引起嬰幼兒急性胃腸炎的病原體，經(jīng)糞口傳播。3．常選用ELISA雙抗夾心法診斷，當(dāng)糞便中的病毒顆粒較多時(shí)可用膠乳凝集實(shí)驗(yàn)或電鏡觀察。4．病毒分離培養(yǎng)采用原代猴腎細(xì)胞培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)種猴腎傳代細(xì)胞增殖。四、狂犬病病毒1．屬?gòu)棤畈《究疲庑巫訌棤?，單?fù)股RNA，螺旋對(duì)稱，有包膜，2．易感染大腦海馬回的錐體細(xì)胞，形成胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體，具有診斷價(jià)值。3．感染動(dòng)物或人后，引起狂犬病，傷口越深、距頭部越近，潛伏期越短。4．微生物學(xué)檢查（1）取發(fā)病動(dòng)物海馬回部組織做切片或涂片染色檢查內(nèi)基小體或用直接熒光抗體法檢查病毒抗原；取患者頸后發(fā)際皮膚做活檢系列切片，檢查病毒抗原。（2）用鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤進(jìn)行病毒培養(yǎng)，并用DIFA法檢查病毒抗原。（3）用RTPCR法檢查病毒核酸。五、人乳頭瘤病毒（HPV）1．屬乳多空病毒科，是二十面立體對(duì)稱裸病毒，雙股環(huán)狀DNA，有70多個(gè)型，具有干擾正常細(xì)胞癌抑制蛋白的功能。2．只感染人的皮膚和粘膜上皮細(xì)胞，可引起不同的疣。3．根據(jù)病史及典型的臨床表現(xiàn)即可診斷，不典型者可做病理學(xué)或免役組化檢查，以及PCR檢測(cè)，尚不能用組織細(xì)胞分離培養(yǎng)。第二十五章 真菌學(xué)檢驗(yàn)[教學(xué)學(xué)時(shí)] 4學(xué)時(shí)。[重點(diǎn)]熟悉真菌的主要生物學(xué)性狀。掌握致病性真菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，致病性及微生物學(xué)檢查，了解真菌毒素的致病作用，真菌性變態(tài)反應(yīng)。[要點(diǎn)與基本要求]概述：生物學(xué)性狀，形態(tài)、結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)、繁殖方式、抵抗力。致病性與免疫性。主要致病性真菌：皮膚絲狀菌：形態(tài)培養(yǎng)特性、致病性。微生物學(xué)檢查、白色念珠菌：形態(tài)培養(yǎng)特性。致病性，微生物學(xué)檢查。新型隱球菌：形態(tài)培養(yǎng)特性，致病性，微生物學(xué)檢查。曲霉菌：致病性。黃曲霉素及其致癌作用。[基本內(nèi)容]一、真菌及其檢驗(yàn)的基本特征 1. 生物學(xué)性狀 2. 分類與致病 3. 微生物學(xué)檢查二、念珠菌和隱球菌及其他醫(yī)學(xué)上重要的酵母 1. 念珠菌 2. 隱球菌 3. 其他酵母三、二相性真菌及其他腐生性霉菌 1. 二相性真菌 2. 曲霉菌 3. 毛霉目霉菌四、皮膚真菌 1. 臨床意義 2. 真菌檢驗(yàn)27 / 27