【正文】 ～4h內(nèi)或者當(dāng)天查出病毒抗原、核酸等。早期診斷主要是應(yīng)用具有高度特異敏感的快速診斷方法去檢測(cè)病毒的特異成分（包括完整的病毒顆粒、病毒抗原和核酸成分）。不同種類(lèi)的病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的部位不同，一般DNA病毒在核內(nèi)復(fù)制，在胞核內(nèi)有熒光顆粒或顯色；RNA病毒一般在胞質(zhì)內(nèi)復(fù)制，在胞質(zhì)內(nèi)有熒光顆?；蝻@色；有的病毒隨其復(fù)制進(jìn)程不同，在胞內(nèi)的存在部位不同。2．胞外游離病毒的檢測(cè)：可用ELISA、dotELISA、酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印跡法（enzymelinked immunoelectrotransfer biot, EITB）、固相放射免疫試驗(yàn)等。3．顯微鏡檢查病毒感染組織細(xì)胞或體液等標(biāo)本以及細(xì)胞培養(yǎng)的蓋玻片標(biāo)本中的病毒顆粒、細(xì)胞形態(tài)變化以及包涵體。通過(guò)電鏡檢查從早期感染材料中直接檢出病毒顆粒。第四節(jié) 呼吸道病毒[授課學(xué)時(shí)] 1學(xué)時(shí) [學(xué)習(xí)重點(diǎn)] 常見(jiàn)呼吸道病毒的生物學(xué)特性及其檢驗(yàn)。有些出現(xiàn)上呼吸道或下呼吸道感染癥狀，另一些由呼吸道感染，但主要癥狀是呼吸道以外的感染癥狀。3．抗原轉(zhuǎn)變：抗原變異幅度大，系質(zhì)變，形成新的亞型，引起大規(guī)模流行，甚至世界范圍的大流行。一、流行性感冒病毒1．生物學(xué)性狀：病毒顆粒呈多形性，核酸為分節(jié)段的單負(fù)股RNA，易發(fā)生基因重組，從而引起變異；包膜表面有血凝素和神經(jīng)氨酸酶兩種刺突，其抗原性易發(fā)生變異；據(jù)NP和M蛋白的抗原性不同，可將流感病毒分為甲、乙、丙型，根據(jù)NA和HA抗原性不同又分為若干亞型；抗原變異幅度取決于HA和NA的變異大小，并直接影響流感流行的規(guī)模，表現(xiàn)為抗原漂移或抗原轉(zhuǎn)變；該病毒適于在雞胚中增殖，組織培養(yǎng)可采用犬腎細(xì)胞系（MDCK）或人胚腎或猴腎細(xì)胞，動(dòng)物接種以雪貂最敏感。少數(shù)患者病毒可蔓延到下呼吸道，引起間質(zhì)性肺炎。（2）分離培養(yǎng)與鑒定：可采用雞胚接種、細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物接種進(jìn)行分離，用人“O”型血或豚鼠紅細(xì)胞進(jìn)行血凝試驗(yàn)，并用血凝抑制試驗(yàn)鑒定型和亞型。二、副粘病毒（一）副流感病毒（PIV）1．生物學(xué)特性：為球形，有包膜，膜上有HN、F兩種刺突；核酸為單負(fù)股RNA，不分階段。3．微生物學(xué)檢查采集發(fā)病早期的上呼吸道標(biāo)本，接種于原代人胚腎、原代猴腎細(xì)胞，在CPE出現(xiàn)以前可用豚鼠紅細(xì)胞做吸附試驗(yàn)，用紅細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)、中和試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。（二）呼吸道合胞病毒（RSV）1．生物學(xué)特性：球形，包膜上有F、G兩種糖蛋白組成的刺突，核酸是單負(fù)股RNA。3．微生物學(xué)檢查：（1）采集早期的呼吸道標(biāo)本。（2）病毒分離與鑒定：接種于HepHeLa、A549細(xì)胞或原代猴腎細(xì)胞等，CPE的特點(diǎn)是形成多核巨細(xì)胞。三、腺病毒（一）生物學(xué)特性：球形，二十面立體對(duì)稱(chēng)，無(wú)包膜，12個(gè)五鄰體位于20面體的頂角上；不能在雞胚中增殖，只能在人源的組織、細(xì)胞中增殖，人胚腎細(xì)胞易感。（三）微生物學(xué)檢查1．標(biāo)本的采集與處理：于發(fā)病早期采集標(biāo)本，標(biāo)本有咽拭子、鼻拭子或吸取物、眼滲出拭子、糞便或直腸拭子、尿道或?qū)m頸拭子、活檢或尸檢組織，以及雙份血清標(biāo)本。3．病毒分離與鑒定：采用人源傳代和原代細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)，典型CPE現(xiàn)象為細(xì)胞腫脹、變圓、聚集、拉絲呈葡萄狀，受染細(xì)胞核中形成嗜堿性包涵體?？捎肅F、IF、EIA、HI、NT等試驗(yàn)方法進(jìn)行鑒定。第五節(jié) 腸道病毒[授課學(xué)時(shí)] 1學(xué)時(shí) [學(xué)習(xí)重點(diǎn)] 常見(jiàn)腸道病毒的生物學(xué)特性及其檢驗(yàn)方法。[基本要點(diǎn)]一、生物學(xué)特性：?jiǎn)喂烧淩NA，無(wú)包膜，抗原的多樣性取決于衣殼中VP1~VP3蛋白的變異；能在多種細(xì)胞中增殖，包括猴腎、人胚腎、人羊膜細(xì)胞、HepHeLa等細(xì)胞中增殖。往往一種血清型腸道病毒可引起多種疾病，一種疾病也可與多種血清型有關(guān)。三、微生物學(xué)檢查：1．標(biāo)本的采集：根據(jù)臨床癥狀和可能病變的部位，采集不同標(biāo)本（如：腦脊液、血液、尿液、糞便、直腸拭子或喉拭子等。因此，通過(guò)組織細(xì)胞分離病毒仍然是許多實(shí)驗(yàn)室常用的診斷方法。3．血清學(xué)診斷：可采用NT、CF、HI方法。[基本概念] 肝炎病毒：是引起病毒性肝炎的病原體。HBV為嗜肝DNA病毒科，電鏡下可見(jiàn)小球型、管型、大球型3種形態(tài)，其中大球型為完整的病毒顆粒，含雙股環(huán)狀DNA，有多種血清型。HCV為黃病毒科，有包膜，含單正股RNA，最敏感的動(dòng)物是黑猩猩。HEV為嵌杯病毒科，無(wú)包膜，含單正股RNA，敏感動(dòng)物有獼猴、黑猩猩、大鼠等。HBV通過(guò)血液與血液制品、密切接觸、母嬰傳播，其臨床表現(xiàn)呈多樣性，可表現(xiàn)為無(wú)癥狀攜帶者、急性肝炎和遷延型慢性肝炎。HCV感染的傳播途徑和臨床表現(xiàn)與HBV感染相似。HEV感染的傳播途徑和臨床表現(xiàn)與HAV感染相似。HBV感染常采血液標(biāo)本，可通過(guò)核酸檢查方法檢查血液中HBV DNA含量，常用RIA和ELISA法檢查HBsAg和抗HBs、抗HBc、HBeAg和抗HBe。HDV檢測(cè)標(biāo)本為肝活檢組織和血清，用免疫熒光或酶標(biāo)法檢測(cè)其中的HDAg，用核酸雜交和RTPCR法檢測(cè)HDV RNA，用EIA或RIA檢測(cè)血清中的抗HDV。第七節(jié) 蟲(chóng)媒病毒[授課學(xué)時(shí)] 1學(xué)時(shí) [學(xué)習(xí)重點(diǎn)] 蟲(chóng)媒病毒的概念；主要蟲(chóng)媒病毒的生物學(xué)特性及其檢驗(yàn)方法。[基本要點(diǎn)]一、流行性乙型腦炎病毒：1．主要生物學(xué)性狀：病毒結(jié)構(gòu)蛋白有3種：M、C和E，抗原性穩(wěn)定。2．臨床意義：三帶喙庫(kù)蚊為傳播媒介，形成蚊→動(dòng)物→蚊的不斷循環(huán)，人感染病毒后，絕大多數(shù)表現(xiàn)為隱性和輕型感染，少數(shù)病人表現(xiàn)為腦炎癥狀。但臨床標(biāo)本的分離率極低。（3）IFN快速診斷：白細(xì)胞中乙腦病毒抗原主要存在于病程早期，可用于早期診斷。三、登革病毒傳播媒介為伊蚊，在人蚊之間傳播，輕型病人表現(xiàn)為普通登革熱，再次感染的重型病人表現(xiàn)為登革出血熱。血清學(xué)診斷方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)和IgM抗體ELISA捕獲法，后者有利于早期診斷。2．臨床意義可引起腎綜合征出血熱（流行性出血熱），往往與鼠類(lèi)的分布和活動(dòng)有關(guān)，也可經(jīng)螨傳播。五、新疆出血熱病毒為布尼亞病毒科羅病毒屬，病毒結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)特性與漢坦病毒相似。微生物學(xué)診斷主要是病毒分離和用ELISA、IFA檢測(cè)抗體，中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)及血凝抑制試驗(yàn)常用于流行病學(xué)調(diào)查。 [基本要求]皰疹病毒科是一大群中等大小、有包膜的DNA病毒，核衣殼為二十面體立體對(duì)稱(chēng)。HSV有兩種血清型，核酸同源性達(dá)40% 。HSV2主要感染腰以下部位，99%復(fù)發(fā)性生殖器皰疹由HSV2引起，與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。（2）病毒培養(yǎng)是最敏感的方法，可用McAb或核酸雜交進(jìn)行鑒定、分型。二、巨細(xì)胞病毒（CMV）1．CMV種屬特異性高，人CMV僅在人成纖維細(xì)胞中生長(zhǎng)，形成巨大細(xì)胞，形似貓頭鷹眼特征。3．微生物學(xué)檢查（1）采用組織病理學(xué)、脫落細(xì)胞學(xué)、免疫熒光技術(shù)、電鏡觀(guān)察、核酸雜交和PCR等直接檢查病毒或特異性抗原。（3）血清學(xué)診斷方法有EIA、IFA、被動(dòng)膠乳凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝試驗(yàn)和中和試驗(yàn)等，并注意學(xué)習(xí)結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)。2．初次感染多見(jiàn)于兒童，表現(xiàn)為水痘，VZV常潛伏于脊髓后根神經(jīng)節(jié)或顱神經(jīng)感覺(jué)神經(jīng)節(jié)中。3．微生物學(xué)檢查（1）刮取新鮮病灶基底部細(xì)胞用免疫熒光法、酶免疫法、免疫電鏡、免疫電泳和核酸雜交等直接檢查病毒或抗原。（3）EIA為主要的血清學(xué)診斷方法。2．EB病毒感染機(jī)體后可表現(xiàn)為潛伏感染、B細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的非增殖性感染及病毒增殖性感染。3．微生物學(xué)檢查（1）采用ACIF法和核酸雜交直接檢查淋巴結(jié)、脾或腫瘤組織中的病毒核酸或抗原。（3）血清學(xué)方法是目前診斷EB病毒原發(fā)感染最常用的方法。第九節(jié) 其他病毒[授課學(xué)時(shí)] 1學(xué)時(shí) [學(xué)習(xí)重點(diǎn)] 有關(guān)病毒的生物學(xué)特性及其微生物學(xué)檢查方法。2．狂犬病：又稱(chēng)恐水病，狂犬病毒感染人，人發(fā)病時(shí)神經(jīng)興奮性增高，吞咽或喝水時(shí)喉頭肌痙攣，甚至聞水聲或其它輕微刺激包括光線(xiàn)均可引起全身痙攣發(fā)作，病死率幾達(dá)100%。2．HIV選擇性地侵犯表達(dá)CD4的細(xì)胞，從而引起CD4細(xì)胞缺損，細(xì)胞免役功能受損，引起多種疾病狀態(tài)。3．微生物學(xué)檢查（1）血清學(xué)方法有ELISA、WB、凝集篩選實(shí)驗(yàn)、放射免役沉淀實(shí)驗(yàn)和IFA等。（2）病毒分離采用非感染的PBMC進(jìn)行培養(yǎng)，2周后可檢出上清夜中的逆轉(zhuǎn)錄酶活性或p24抗原。二、人類(lèi)嗜T細(xì)胞病毒I型、II型（HTLVI、HTLVII）1．為逆轉(zhuǎn)錄病毒，含兩條相同的單正股RNA，包膜表面有刺突及特異性糖蛋白，能與細(xì)胞表面的CD4受體結(jié)合。3．病毒分離和抗體檢測(cè)方法與HIV感染檢測(cè)方法相似。HRV屬于A(yíng)、B、C組，根據(jù)VP7外殼糖蛋白的特異性可將A組分為若干個(gè)血清型，根據(jù)VP4外殼蛋白的特異性可將A組分為4個(gè)血清型。3．常選用ELISA雙抗夾心法診斷，當(dāng)糞便中的病毒顆粒較多時(shí)可用膠乳凝集實(shí)驗(yàn)或電鏡觀(guān)察。四、狂犬病病毒1．屬?gòu)棤畈《究?，外形子彈狀，單?fù)股RNA，螺旋對(duì)稱(chēng)，有包膜，2．易感染大腦海馬回的錐體細(xì)胞，形成胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體，具有診斷價(jià)值。4．微生物學(xué)檢查（1）取發(fā)病動(dòng)物海馬回部組織做切片或涂片染色檢查內(nèi)基小體或用直接熒光抗體法檢查病毒抗原；取患者頸后發(fā)際皮膚做活檢系列切片，檢查病毒抗原。（3）用RTPCR法檢查病毒核酸。2．只感染人的皮膚和粘膜上皮細(xì)胞，可引起不同的疣。第二十五章 真菌學(xué)檢驗(yàn)[教學(xué)學(xué)時(shí)] 4學(xué)時(shí)。掌握致病性真菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，致病性及微生物學(xué)檢查，了解真菌毒素的致病作用，真菌性變態(tài)反應(yīng)。致病性與免疫性。微生物學(xué)檢查、白色念珠菌：形態(tài)培養(yǎng)特性。新型隱球菌：形態(tài)培養(yǎng)特性，致病性，微生物學(xué)檢查。黃曲霉素及其