【正文】 毒素型大腸埃希菌等；侵襲型腹瀉，包括志賀菌、腸致病型大腸埃希菌和腸侵襲型大腸埃希菌等；食物中毒，包括沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽胞桿菌和肉毒梭菌等；偽膜性腸炎，包括艱難梭菌或金黃色葡萄球菌；慢性腹瀉，可能由結(jié)核桿菌引起。②真菌性：念珠菌、毛霉菌等。③病毒性：輪狀病毒等。11. 危急值報(bào)告培養(yǎng)出霍亂弧菌、傷寒沙門(mén)菌、O157等及時(shí)按傳染病報(bào)告，同時(shí)送CDC復(fù)核。參考文獻(xiàn)1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：呼吸系統(tǒng)標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類(lèi)：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：呼吸系統(tǒng)標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范呼吸道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。2. 適用范圍呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)和涂片檢查。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類(lèi)型　痰、咽拭、支氣管肺泡灌洗吸出液、支氣管沖洗液或刷子、肺穿刺等。 標(biāo)本采集　 采集時(shí)間　以晨痰為好；支氣管擴(kuò)張癥患者，清晨起床后進(jìn)行體位引流，可采集大量痰標(biāo)本。
　 　在留取痰之前，用清水反復(fù)漱口，應(yīng)從氣管深部咳出痰，吐入無(wú)菌容器內(nèi)。
　 氣管鏡下采集法　在病灶附近用導(dǎo)管吸或用支氣管刷直接取得標(biāo)本。
　 氣管穿刺法　在環(huán)甲膜下穿刺抽取痰液，收集標(biāo)本，適用于厭氧菌培養(yǎng)。 棉拭采集法　用無(wú)菌棉拭子輕輕擦拭患者鼻咽部黏膜，留取標(biāo)本，置無(wú)菌試管內(nèi)送檢。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 申請(qǐng)單姓名、科別、床號(hào)與標(biāo)本的標(biāo)簽不符。 痰標(biāo)本呈水樣或唾液樣。 痰涂片白細(xì)胞10／低倍視野，上皮細(xì)胞25／低倍視野。 標(biāo)本容器溢漏，無(wú)瓶蓋。 痰標(biāo)本留取放置時(shí)間太長(zhǎng)，超過(guò)2h。 未用指定的無(wú)菌容器留痰作細(xì)菌培養(yǎng)。 標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，放置時(shí)間不應(yīng)超過(guò)2h。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。 VITEK鑒定系統(tǒng)。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽(yáng)性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽(yáng)性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參見(jiàn)試劑說(shuō)明書(shū)。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)箱等。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見(jiàn)質(zhì)量管理。6. 檢驗(yàn)步驟接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記?！　?肉眼觀察　包括顏色、黏度、有無(wú)血絲或膿。 涂片檢查　可以確定標(biāo)本是否適合做細(xì)菌培養(yǎng)，直接涂片鏡檢，依據(jù)低倍鏡下觀察白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)目多少來(lái)評(píng)定，見(jiàn)下表530。并可初步判定是否有病原菌存在。表530　痰標(biāo)本鏡下分類(lèi)分級(jí)白細(xì)胞（個(gè)）上皮細(xì)胞（個(gè)）A2510B2525C1025　　　　　　注：A、B兩種情況的痰標(biāo)本適合做培養(yǎng)，C不合格，應(yīng)重新留標(biāo)本。
一般細(xì)菌涂片　挑取膿性或血性痰液制成薄而均勻的涂片，革蘭染色后鏡檢。 結(jié)核分枝桿菌涂片　參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。
放線菌及諾卡菌涂片　將痰液用生理鹽水洗滌數(shù)次，如含血液，則加水溶解紅細(xì)胞，然后挑取黃色顆?；虿煌该鞯闹唿c(diǎn)，置載玻片上，覆以蓋玻片，輕輕擠壓，置高倍鏡下觀察其結(jié)構(gòu)，如見(jiàn)中央為交織的菌絲，末端呈放線狀排列，則揭去蓋玻片，干燥后作革蘭及萋尼染色鏡檢。如查見(jiàn)中間部分的菌絲為革蘭陽(yáng)性，而四周放射的末端為革蘭陰性，萋尼染色為非抗酸性者，可報(bào)告為”找到革蘭陽(yáng)性桿菌疑似放線菌”。萋尼染色弱陽(yáng)性則報(bào)告革蘭陽(yáng)性桿菌疑似諾卡菌。
　 分離培養(yǎng) 培養(yǎng)標(biāo)本的選擇　應(yīng)選擇黏液膿痰作涂片，排除不合格標(biāo)本。 痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理　用無(wú)菌鹽水將痰洗滌或加入等量的1%胰酶溶液，使痰液均質(zhì)化后備用。 接種　處理后痰液接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱（或EMB、中國(guó)藍(lán)）瓊脂平板，置5％～10％CO2 環(huán)境中，35℃培養(yǎng)18～24 h。，作出初步判斷，然后按各類(lèi)細(xì)菌特征進(jìn)行生化鑒定，并同時(shí)作藥物敏感試驗(yàn)。 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。7. 操作流程發(fā)出報(bào)告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)觀察菌落特征及涂片、染色消化液或生理鹽水處理痰或咽拭肉眼觀察涂片染色血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板5%~10% CO2 35℃培養(yǎng)18～24 h8. 結(jié)果報(bào)告 報(bào)告的各細(xì)菌種可注明各自所占比例情況，可分為純培養(yǎng)，大量，中等量，少量。 未檢出致病菌時(shí)應(yīng)報(bào)告“正常菌群”。9. 注意事項(xiàng) 痰標(biāo)本一般不可采用肉湯或高選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行增菌培養(yǎng)。，其毒力很低，但由拔牙等原因造成的局部損傷中侵入血流，可引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎等感染，故從血液中分離出草綠色鏈球菌有臨床意義。 咳痰標(biāo)本不做厭氧菌培養(yǎng)。10. 臨床意義上呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)生長(zhǎng)的細(xì)菌是否與疾病有關(guān)，需各方面綜合分析，排除常居菌后，才可作出正確的判斷。下呼吸道的痰液應(yīng)是無(wú)細(xì)菌的，而經(jīng)口腔咳出的痰帶有多種上呼吸道的正常寄生菌（如草綠色鏈球菌）。若從患者痰標(biāo)本中查見(jiàn)致病菌或條件致病菌，提示可能有呼吸道細(xì)菌感染。肺炎鏈球菌是肺炎最常見(jiàn)的致病菌。兒童細(xì)菌性肺炎多為流感嗜血桿菌所致。醫(yī)院獲得性肺炎的常見(jiàn)病原菌是革蘭陰性桿菌，主要有肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、沙雷菌屬和腸桿菌屬細(xì)菌等。肺結(jié)核由結(jié)核分枝桿菌引起的。嗜肺軍團(tuán)菌引起軍團(tuán)菌病，肺部厭氧感染大多是脆弱類(lèi)桿菌及梭桿菌屬的細(xì)菌等。疑典型形態(tài)細(xì)菌所致肺部感染時(shí)，常先做痰液和支氣管分泌物涂片、染色鏡檢（如肺部結(jié)核痰液涂片、抗酸染色，鏡檢找抗酸染色陽(yáng)性結(jié)核分枝桿菌，有助于細(xì)菌培養(yǎng)檢查。11. 危急值報(bào)告如查出抗酸桿菌陽(yáng)性，則應(yīng)及時(shí)向臨床報(bào)告并作報(bào)傳染病報(bào)告。參考文獻(xiàn)1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類(lèi)：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范腦脊液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。2. 適用范圍腦脊液培養(yǎng)。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類(lèi)型　腦脊液。 標(biāo)本采集由臨床醫(yī)師以無(wú)菌要求做腰椎穿刺，抽取腦脊液2～3ml，盛于無(wú)菌容器中送檢。腦膜炎奈瑟菌離體后能產(chǎn)生自溶酶，迅速自溶，肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌離體后也易死亡。因此，腦脊液無(wú)論涂片或培養(yǎng)，必須于采集后立即送檢。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)本標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符。 標(biāo)本未用無(wú)菌試管留取。 標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置室溫，放置時(shí)間不應(yīng)超過(guò)2h，切勿放冰箱，否則影響檢出率。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。 VITEK鑒定系統(tǒng)。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽(yáng)性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽(yáng)性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參見(jiàn)試劑說(shuō)明書(shū)。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)箱等。5. 細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見(jiàn)質(zhì)量管理。6. 檢驗(yàn)步驟接收標(biāo)本后，立即對(duì)標(biāo)本進(jìn)行編號(hào)、登記。　　 涂片檢查
　　 一般細(xì)菌涂片檢查　外觀混濁或膿樣腦脊液可直接涂片，無(wú)色、透明的腦脊液，應(yīng)3000r／minl10～15min離心后取沉淀物涂片、革蘭染色、鏡檢。根據(jù)染色及形態(tài)特征，?？沙醪教崾炯?xì)菌的種類(lèi)。 結(jié)核分枝桿菌涂片檢查　參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。 新生隱球菌涂片檢查　取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負(fù)染色，或取腦脊液的離心沉淀物接種于沙氏培養(yǎng)基上，置于35℃培養(yǎng)2～5日，根據(jù)菌落特性，涂片染色鏡檢作出報(bào)告。必要時(shí)可作生化反應(yīng)進(jìn)一步鑒定。
分離培養(yǎng) 用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心沉淀的沉淀物，分別接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板和麥康凱平板，置于5%~10%CO2 環(huán)境中35℃培養(yǎng)18～24 h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，根據(jù)菌落特點(diǎn)、形態(tài)與染色及生化反應(yīng)鑒定細(xì)菌，并作藥敏試驗(yàn)。 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見(jiàn)《結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)操作規(guī)程》。7. 操作流程腦脊液離心觀察菌落特征及涂片、染色血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板5% CO2 35℃培養(yǎng)1824h發(fā)出報(bào)告儀器或手工細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)沉淀物涂片、染色8. 結(jié)果報(bào)告無(wú)論是涂片還是培養(yǎng)，一旦檢測(cè)到陽(yáng)性細(xì)菌應(yīng)立即電話或書(shū)面通知臨床醫(yī)師。查見(jiàn)細(xì)菌，報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。經(jīng)培養(yǎng)48h，仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)者，報(bào)告“培養(yǎng)2日無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。9. 注意事項(xiàng) 抽取的腦脊液分置于無(wú)菌試管中，迅速送至實(shí)驗(yàn)室，病毒、霉菌、分支桿菌培養(yǎng)樣本置4 ℃保存待送。 流感嗜血桿菌容易在外界環(huán)境中死亡，腦膜炎奈瑟菌對(duì)寒冷和干燥均很敏感，在體外容易自溶，故不論是涂片鏡檢還是進(jìn)行培養(yǎng)均應(yīng)及時(shí)送檢。10. 臨床意義正常人的腦脊液是無(wú)菌的，檢出細(xì)菌提示細(xì)菌性（急性化膿性或結(jié)核性等）腦膜炎。化膿性腦膜炎最多見(jiàn)腦膜炎奈瑟菌，肺炎鏈球菌居第二位。3個(gè)月至5歲兒童細(xì)菌性腦膜炎的主要致病菌是流感嗜血桿菌，新生兒腦膜炎多由大腸埃希菌、B群溶血性鏈球菌和腦膜敗血黃桿菌引起的，特別是早產(chǎn)嬰兒。結(jié)核分枝桿菌引起結(jié)核性腦膜炎。85%腦膿腫患者腦脊液培養(yǎng)可檢出厭氧菌，有時(shí)可為厭氧菌和需氧菌混合感染。11. 危急值報(bào)告直接涂片找到細(xì)菌或培養(yǎng)陽(yáng)性均作危急值報(bào)告。若檢測(cè)出腦膜炎奈瑟菌則應(yīng)做傳染病報(bào)告。參考文獻(xiàn)1 CNASGL23《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用指南》, 20082周庭銀編著. 臨床微生物學(xué)診斷與圖解. 第二版. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 20073 葉應(yīng)嫵, 王毓三, . 第3版 .南京: 東南大學(xué)出版社, 20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy. 9th ed. Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》, 2007江西省新余市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室版 本 號(hào)：文件標(biāo)題：尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件狀態(tài)：受控文件編號(hào)：修改日期：2013年1月30日文件種類(lèi)：程序文件生效日期：2013年6月30日編 制 者：王騰勇批 準(zhǔn) 者：賀愛(ài)民審 核 者：賀愛(ài)民發(fā) 放 號(hào)：尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的規(guī)范尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。2. 適用范圍尿液。3. 標(biāo)本 標(biāo)本類(lèi)型　尿液。 標(biāo)本采集 中段尿標(biāo)本采集法
　　 女性　先以肥皂水清洗外陰部，再以無(wú)菌水沖洗，用無(wú)菌紗布擦拭，以手指將陰唇分開(kāi)排尿，棄去前段尿，留取中段尿5～7ml于無(wú)菌試管內(nèi)。 男性　翻轉(zhuǎn)包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水沖洗，留取中段尿。 兒童、嬰兒　先以無(wú)菌生理鹽水棉球洗凈其外陰部或外生殖器，將無(wú)菌試管或瓶口對(duì)準(zhǔn)尿道口，以膠布固定于皮膚上，待尿排出后送檢。 兩側(cè)腎盂尿　由專(zhuān)科醫(yī)生采集，左右側(cè)標(biāo)本必須標(biāo)明，避免混淆而誤診。 膀胱穿刺　此法用于厭氧菌培養(yǎng)。恥骨上皮膚經(jīng)碘酒消毒后，再以75％乙醇擦拭，用無(wú)菌注射器作膀胱穿刺，吸取尿液后排去注射器內(nèi)的空氣，針頭插于無(wú)菌橡皮塞上送檢。 尿標(biāo)本采集應(yīng)及時(shí)送檢，2h內(nèi)進(jìn)行接種。 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 申請(qǐng)單項(xiàng)目與標(biāo)本不符。 尿標(biāo)本不是用無(wú)菌容器留取。 送標(biāo)本的時(shí)間在采集標(biāo)本后超過(guò)2h。 標(biāo)本保存采集標(biāo)本后立即送到實(shí)驗(yàn)室，不能及時(shí)送檢可置冰箱。4. 試劑、儀器 革蘭染液、氧化酶試劑、3%觸酶、血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱平板、相關(guān)生化試劑等。 VITEK鑒定系統(tǒng)。革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽(yáng)性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽(yáng)性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲(chǔ)存條件參見(jiàn)試劑說(shuō)明書(shū)。 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、CO2 培養(yǎng)